(浙江省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江 杭州 311199)

雞傳染性貧血病(Chicken infectious anemia，CIA)是由雞傳染性貧血病毒(Chicken infectious anemia virus，CIAV)引起，以再生障礙性貧血和廣泛性淋巴細(xì)胞衰竭為主要特征的免疫抑制性傳染病。免疫機(jī)能受損導(dǎo)致對(duì)其他病原的易感性增高，極易并發(fā)或繼發(fā)其他傳染性疾病，并且對(duì)某些疫苗的免疫應(yīng)答下降，甚至免疫失敗。該病發(fā)生后在雞群中長(zhǎng)期存在，難以凈化，嚴(yán)重影響雞群的生長(zhǎng)及生產(chǎn)性能，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)造成不同程度的經(jīng)濟(jì)損失。

1979年Yuasa等[1]在日本首次分離到雞傳染性貧血病毒(Gifu-1株)，1992年崔現(xiàn)蘭等[2]在我國(guó)黑龍江首次分離到該病毒。雞傳染性貧血病毒屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae)的陀螺病毒(Gyrovirus)屬，為二十面體單股負(fù)鏈DNA病毒，基因組全長(zhǎng)2.3 kb，有3個(gè)開(kāi)放閱讀框分別編碼VP1、VP2和VP3三種蛋白。VP1是主要的免疫原蛋白，與VP2共同作用誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，VP3作為功能蛋白會(huì)誘導(dǎo)雞胸腺細(xì)胞和原始造血細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致嚴(yán)重貧血、免疫抑制等癥狀[3-4]。該病毒比較保守，只有1個(gè)血清型；雞是已知的唯一宿主，未發(fā)現(xiàn)其他禽類易感。

1 流行病學(xué)研究進(jìn)展

近幾年國(guó)內(nèi)的流行病學(xué)調(diào)查表明，CIAV感染陽(yáng)性率較高，且混合感染普遍存在。解慧梅等[5]對(duì)蘇中地區(qū)開(kāi)展血清學(xué)調(diào)查，CIAV抗體整體陽(yáng)性率為50.59%，江蘇泰州、揚(yáng)州、南通地區(qū)的平均陽(yáng)性率分別為61.35%、52.13%和41.36%。儲(chǔ)鴻蒙[6]對(duì)安徽省進(jìn)行CIAV血清學(xué)調(diào)查及分析，抗體總陽(yáng)性率為63.60%，皖南、皖中、皖北地區(qū)CIAV抗體陽(yáng)性率在60%～64.46%，調(diào)查的126個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)中70.63%場(chǎng)點(diǎn)呈陽(yáng)性。鮑偉華等[7]調(diào)查研究浙江寧波雞傳染性貧血病毒(CIAV)、禽白血病病毒(ALV)及禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)的感染情況，CIAV的抗體陽(yáng)性率最高(66.8%)，所有雞場(chǎng)共同感染ALV-AB和CIAV，80.0%雞場(chǎng)共感染3種免疫抑制性疫病。姜泊宇等[8]對(duì)江蘇省某雞場(chǎng)開(kāi)展雞星狀病毒(CAstV)、雞傳染性貧血病毒(CIAV)和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)的病原學(xué)調(diào)查，PCR和RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，CAstV、CIAV、REV單獨(dú)檢出率分別為45%、37.5%和O%，其中CAstV和CIAV雙重感染率為25%。

通過(guò)進(jìn)一步的病毒分離鑒定、序列同源性和遺傳進(jìn)化分析，分離獲得的CIAV毒株多呈高致病性，所屬分支和親緣性有所差異。Zhang X等[9]綜合分析了2011-2012年我國(guó)南方地區(qū)CIAV的系統(tǒng)發(fā)育和表征，分離到的13個(gè)毒株均具有標(biāo)志其高致病性的394位氨基酸。Li Y等[10]將2014-2015年我國(guó)分離到的24個(gè)CIAV毒株分別歸類到進(jìn)化樹(shù)中的8個(gè)分支，所有獨(dú)特的核酸和氨基酸替換均發(fā)生在VP1區(qū)域，且具備394位氨基酸，推測(cè)其高致病性。Xie Z等[11]從廣西三黃雞中分離到1個(gè)CIAV毒株(命名為GXC060821)，與我國(guó)的兩個(gè)CIAV毒株(TJBD40和LF4)關(guān)系近。于帥(2015)[12]從四川省獲得的11個(gè)CIAV分離株處在同一分支上，與美國(guó)分離株(Del Ross株)親緣性最近。藺文成[13]等從廣東省大型雞場(chǎng)分離得到4株CIAV毒株，均為高致病性的Ⅱ分支病毒株。林歡等[14]從黑龍江分離到1個(gè)CIAV毒株(命名為HLJl6069)，與日本分離株C369親緣關(guān)系最近(99.1%)，且在VP1的75、89、141和394位氨基酸存在有意義的突變。

2 分子生物學(xué)檢測(cè)方法研究進(jìn)展

2.1特異性單病原檢測(cè)方法 國(guó)內(nèi)研究學(xué)者先后建立了檢測(cè)CIAV的套式PCR方法(nested-PCR)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法(LAMP)等，為CIAV的病原學(xué)檢測(cè)提供多選的分子生物學(xué)手段。王景儒等[15]建立了適合CIAV快速檢測(cè)的套式PCR方法,通過(guò)兩步PCR擴(kuò)增將敏感性從第1步的100 pg提高到第2步的1 fg,敏感性提高了105倍。該方法因具有敏感性高、重復(fù)性好、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),可用于CIAV的臨床診斷和分子流行病學(xué)調(diào)查。張訓(xùn)海等[16]搭建檢測(cè)CIAV的LAMP技術(shù)平臺(tái)，所建立的方法不需要特殊儀器，有效擴(kuò)增在65℃恒溫條件下即可完成，且通過(guò)SYBR Green I染料可直接肉眼判斷結(jié)果，具備快速高效、成本低、結(jié)果直觀顯示、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)，可應(yīng)用于基層檢測(cè)診斷。

由于弱毒疫苗中污染CIAV是造成雞群感染的途徑之一，通常疫苗中CIAV污染劑量較低，常用的細(xì)胞培養(yǎng)檢查法和經(jīng)典的SPF雞檢查法較為復(fù)雜和困難，為更快速、靈敏地檢測(cè)到弱毒疫苗中CIAV的低劑量污染，針對(duì)性地建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR、SYBR GreenⅠ熒光定量PCR等方法，均能夠檢測(cè)到1000羽份弱毒疫苗中1個(gè)EID50的低劑量污染。任志浩等[17]建立的CIAV實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法靈敏度可達(dá)10拷貝/μL，比常規(guī)PCR靈敏度高100倍，但該方法需要合成專門的Taq Man探針，成本相對(duì)較高，并且針對(duì)每一種外源病毒檢測(cè)時(shí)均需要合成特定探針，給企業(yè)帶來(lái)較多的經(jīng)濟(jì)開(kāi)支，企業(yè)不容易接受。付佳媛等[18]建立的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法，靈敏度可達(dá)6.36拷貝/μL，是常規(guī)PCR靈敏度的1000倍，具有快速、準(zhǔn)確、特異性高、可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)、定量以及自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)。

2.2多重檢測(cè)方法 CIA、AL、RE等雞免疫抑制性疫病常常發(fā)生混合感染，使確診的難度加大，建立能夠同時(shí)檢測(cè)多種病原的多重檢測(cè)方法，將大大提高檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性。蘇霞等[17]研究建立的同時(shí)檢測(cè)CIAV、REV與ALV的基因芯片方法，將分子生物學(xué)與微電子技術(shù)結(jié)合，靈敏度達(dá)到106拷貝/mL，比PCR的敏感性高出100倍，且結(jié)果肉眼即能判讀；與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，具有快速、敏感、高通量的特點(diǎn)，能實(shí)現(xiàn)對(duì)多種病原的同時(shí)檢測(cè)。曾婷婷等[20]建立的基于GeXP多基因表達(dá)分析系統(tǒng)的多重PCR方法，能夠同時(shí)檢測(cè)包括雞傳染性貧血病毒、雞馬立克病毒、禽白血病病毒(包括A、B和J亞群)、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒、禽呼腸孤病毒和傳染性法氏囊炎病毒在內(nèi)的6種雞免疫抑制病病毒8個(gè)目的基因，敏感度達(dá)到100 拷貝/20 μL，兼具高通量、強(qiáng)特異性和高敏感度，可用于臨床鑒別診斷和分子流行病學(xué)調(diào)查，具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

3 討論

3.1免疫抑制使危害加劇 CIAV等免疫抑制性病毒會(huì)侵害家禽的免疫系統(tǒng)，易出現(xiàn)其他病原的并發(fā)或激發(fā)感染,尤其是當(dāng)出現(xiàn)多種免疫抑制病共同感染時(shí)，會(huì)互相增強(qiáng)致病力，在免疫抑制上出現(xiàn)明顯的協(xié)同效應(yīng)。有研究表明[21-23]，CIAV感染會(huì)顯著降低禽流感滅活疫苗和活疫苗的免疫效果，對(duì)活疫苗的免疫效果影響更大；CIAV感染會(huì)降低馬立克氏病的疫苗免疫功能；CIAV與REV共感染會(huì)加重導(dǎo)致家禽生長(zhǎng)遲緩，對(duì)新城疫疫苗抗體反應(yīng)的免疫抑制作用比單一病毒感染要嚴(yán)重得多。因此，進(jìn)行疫苗免疫防控時(shí)，需高度重視免疫抑制病的影響。

3.2弱毒疫苗污染檢測(cè)不容忽視 在一些減毒活疫苗中發(fā)現(xiàn)外源性病毒，報(bào)告最多的是ALV和REV，CIAV也報(bào)告較多[24]。因ALV、CIAV、REV等病毒主要是通過(guò)垂直傳播，使用了被病毒污染的SPF雞胚制成的減毒疫苗會(huì)感染雞群。Li Y等[25]首次報(bào)道在中國(guó)SPF雞中檢測(cè)到CIAV，并分離鑒定一個(gè)毒株(命名為SD1403)，推測(cè)這可能是減毒疫苗被CIAV污染的重要原因。在SPF雞群和減毒疫苗中開(kāi)展CIAV檢測(cè)，排除低劑量污染，將極大保障疫苗的使用安全和免疫效果。

3.3防控關(guān)鍵在預(yù)防 由于目前尚無(wú)治療CIA的特效藥物，要堅(jiān)持以預(yù)防為主，采取綜合防控措施。一是加強(qiáng)對(duì)種雞的檢疫，在引進(jìn)種雞前進(jìn)行CIAV抗體檢查，防止引入帶毒雞；種蛋孵化前也要進(jìn)行嚴(yán)格消毒。二是嚴(yán)格科學(xué)飼養(yǎng)管理，做好雞舍的日常清潔和消毒滅源工作，嚴(yán)格管理人員、車輛、飼養(yǎng)工具等進(jìn)出管理，防止攜帶病原的傳播媒介污染養(yǎng)殖環(huán)境[26]。三是切斷垂直傳播途徑，通過(guò)種雞群的普查，掌握病毒分布、隱性感染和帶毒狀況，淘汰種雞群、低齡發(fā)病雞只，切斷CIAV的垂直傳播源。四是做好疫苗保護(hù)，可經(jīng)飲水免疫接種CIA弱毒商品凍干疫苗，重點(diǎn)針對(duì)12-16周齡的高危易感對(duì)象，接種15 d后逐漸產(chǎn)生有效抗體，6周后達(dá)到最強(qiáng)免疫力，一般免疫保護(hù)力可持續(xù)至60周齡左右。