□ 侯俊堅 佛山市食品藥品檢驗檢測中心

1 試藥及器材

1.1 試藥

氰甲烷、正己烷、丙酮、氯仿及甲醇等均采L.C.級。醋酸、無水硫酸鈉、正丁醇熒光標示劑采試藥特級。氧化鋁采L.C.級、磺胺唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺一甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶標準品、磺胺奎林標準品試藥級。

1.2 器具及材料

雞肉（選自當?shù)爻?00 g）；攪拌均質(zhì)機；離心機：轉速能達3 000 rpm；振蕩器：新光精機FS-6u；減壓濃縮裝置（Rotavapor RElll）；紫外燈：波長365 nm，（ModelCC-80）；高效液相層析儀：含紫外光檢出器；硅膠薄層板：Silicagel60；微量注射器（705SNR）；熒光標示槽：長21 cm、高20 cm、寬0.8 cm，不銹鋼制；凈化管：內(nèi)徑1.5 cm，高30 cm的玻璃管柱；濾膜：孔徑0.45 μm；水浴箱（SB-9D）。

1.3 展開溶媒

氯仿∶正丁醇（80∶20）。

1.4 熒光標示液的制備

取熒光標示劑25 mg溶于250 mL丙酮中。

1.5 標準溶液的制備

精確稱取磺胺唑（STZ）、磺胺二甲嘧啶（SMT）、磺胺一甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）和磺胺喹啉（SQX）標準品各100 mg，用流動相溶液稀釋至0.5～3.0 mg·L-1，作標準溶液。

1.6 飽和正己烷溶液的制備

取500 mL正己烷于分液漏斗中，加氰甲烷20 mL充分振搖，靜置分層后取正己烷層（上層備用）。

2 檢驗方法

2.1 制備待檢液

檢體細切后用果汁機攪拌均勻，稱取10 g置于攪拌均質(zhì)器中，加入氰甲烷100 mL與無水硫酸鈉50 g，攪拌5 min，移入離心瓶中，以3 000 rpm離心10 min，經(jīng)濾紙過濾后取澄清液，用50 mL氰甲烷依上述步驟再萃取一次殘渣，合并澄清液，加入飽和氰甲烷正己烷溶液30 mL，激烈振搖5 min后靜置分層，去除正己烷層，用飽和氰甲烷-正己烷液30 mL依上述步驟再萃取2次，氰甲烷層移入濃縮瓶后以40 ℃水浴減壓濃縮。

2.2 鑒別試驗

沿硅膠薄層板下端2 cm橫向處，每隔1 cm分別點上直徑約為0.3 cm的檢液線及標準溶液線（大約20 μL），風干后展開，展開溶媒浸沒薄層板下端0.5～1 cm，展開高度約12 cm后取出風干，將其浸入盛有熒光標示液的熒光標示槽中，迅速取出風干，15～30 min內(nèi)置于紫外燈下照射，觀察檢液上升的斑點位置及顏色，并與標準溶液的黃綠熒光斑點進行比較及鑒別[1]。

3 定量方法

依定性方法所制備的檢液用85%的甲醇定容至4 mL，注入氧化鋁凈化管內(nèi)，取85%甲醇10 mL清洗凈化管，洗液丟棄，再以甲醇∶醋酸∶去離子水（30∶0.4∶70，v/v）混合溶液30 mL溶離磺胺劑，收集溶離液，于65 ℃水浴中減壓濃縮至干，用1 mL液相層析流動相溶液溶解，經(jīng)濾膜過濾后，作定量用檢測液。

3.1 高效液相層析儀的條件

分離柱：C18（顆粒大小10 μm），內(nèi)徑3.9 mm，長30 cm。流動相溶液：以醋酸調(diào)整去離子水pH值為3.6，再與氰甲烷以80∶20(v/v)比例混勻，以濾膜過濾，濾液即為移動相溶液。流速：1.2 mL/min。檢出器：紫外光檢出器（波長267 nm）。

3.2 含量測定

待檢液及標準溶液各取20 μL，分別注入液相層析儀，依據(jù)檢液所得波峰的滯留時間，分別與標準溶液進行比較鑒別。由適量待檢液所測得的峰面積，求出檢體中磺胺劑的含量。高效液相層析法的最低檢出量（MDL）為0.015 ppm。

4 總結

添加STZ、SMT、SMM、SDM及SQX 5種磺胺劑標準混合液于雞肉樣品中，添加量為0.1、0.2及0.3 μg/g，利用高效液相層析儀同時分析五種磺胺劑，結果顯示五種磺胺劑的平均回收率分別為88.3%、91.1%、89.4%、86.1%和83.3%，由以上所見以氰甲烷抽出液回收率甚高。在雞的前胸肉、肝臟、腎臟、心臟、胃及血清的空白檢體圖譜中結果顯示，前胸肉、腎臟、心臟、胃及血清的檢液凈化效果頗佳。肝臟較差，在HPLC有SMT偽陽性的現(xiàn)象發(fā)生，以定性分析（TLC）確認則無此情形。