肖 嵐，王 威，吳玉嬌，杜 昕，李 誠(chéng),*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川 雅安 625014；2.四川旅游學(xué)院食品學(xué)院，四川 成都 610100）

缺氧會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體氧敏感性途徑活化，催化線粒體通過Fenton反應(yīng)和Haber-Weiss反應(yīng)生成自由基[1]，影響到機(jī)體正常的氧化分解供能作用。促進(jìn)機(jī)體在缺氧條件下的調(diào)適能力是提高人體低氧耐受性的重要措施，其中比較有效的途徑之一是攝食抗缺氧藥物或功能食品[2-3]。牦牛是分布在海拔3 000 m以上的特殊家畜，經(jīng)過世代的自然選擇，牦牛顯示出對(duì)低氧環(huán)境極好的適應(yīng)性，這可能與牦牛血液的特殊性有一定關(guān)系[4-6]。姚星辰等[7]報(bào)道牦?；钚缘鞍拙哂酗@著的延長(zhǎng)抗缺氧時(shí)間的作用。缺氧誘發(fā)活性氧（reactive oxygen species，ROS）的大量蓄積是造成缺氧損傷的重要因素之一[8]，而抗氧化劑能夠通過清除ROS緩解缺氧造成的神經(jīng)損傷，改善認(rèn)知功能[9-11]。Fan Pengcheng等[11]首次證實(shí)咪唑啉類自由基清除劑具有抗高原缺氧作用；其機(jī)制為清除減壓缺氧導(dǎo)致的體內(nèi)過量ROS等自由基，即缺氧相關(guān)疾病的發(fā)生和線粒體內(nèi)自由基釋放增加密切相關(guān)[12]。Swenson等[13]研究發(fā)現(xiàn)抗氧化劑對(duì)高原病的預(yù)防有積極作用。Bailey等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在登高前3 周開始補(bǔ)充L-抗壞血酸、VE、α-硫辛酸可有效改善機(jī)體的血氧飽和度，減輕高原反應(yīng)癥狀。Subudhi等[15]的研究也顯示，提前補(bǔ)充抗氧化劑能夠改善機(jī)體在急性缺氧條件下（4 300 m海拔）的通氣閾值。在大鼠急性缺氧實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)懈皮素可通過提升抗氧化能力和抑制氧化應(yīng)激核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的表達(dá)，有效地預(yù)防高原腦水腫的發(fā)生[1]。而Paul等[17]發(fā)現(xiàn)具有良好抗氧化活性的化合物水飛薊素也能有效防治急性缺氧暴露時(shí)高原病的發(fā)生。Schreiber等[18]發(fā)現(xiàn)VE和VC的自由基清除作用可以延長(zhǎng)急性缺氧小鼠的存活時(shí)間。Al-Hashem[19]發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充VE和VC可以對(duì)抗高原缺氧相關(guān)的大鼠肺損傷。

本課題組前期測(cè)定了牦牛血低聚肽的體外抗氧化能力[20-22]，包括還原力、2,2’-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基清除力、·OH清除能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除能力、總抗氧化力以及脂質(zhì)過氧化抑制能力6 個(gè)指標(biāo)，其中·OH清除能力、DPPH自由基清除能力、總抗氧化力以及脂質(zhì)過氧化抑制能力均極顯著優(yōu)于商品化大豆低聚肽（P＜0.01）。為了進(jìn)一步證實(shí)牦牛血低聚肽的抗氧化能力，本實(shí)驗(yàn)擬通過高、中、低劑量牦牛血低聚肽對(duì)常壓密閉缺氧動(dòng)物模型的干預(yù)，研究其抗缺氧活性以及可能的作用機(jī)制，通過測(cè)定30 d灌胃小鼠血清中的丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活力、總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）等以綜合評(píng)價(jià)牦牛血低聚肽的體內(nèi)抗氧化能力。以期為牦牛血低聚肽作為抗缺氧功能食品的開發(fā)提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

SPF級(jí)KM小鼠，雄性，體質(zhì)量18～22 g，購(gòu)自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（川）2015-030。

牦牛血低聚肽（氨基酸含量85.25 g/100 g，平均分子質(zhì)量小于1 kDa）由實(shí)驗(yàn)室自制；紅景天膠囊（國(guó)食健字G 20100243，規(guī)格為400 mg/粒，每100 g含紅景天苷0.5 g）北京同仁堂健康藥業(yè)股份有限公司；MDA測(cè)試盒、SOD測(cè)試盒、H2O2測(cè)試盒、GSH-Px測(cè)試盒、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）測(cè)試盒、過氧化氫酶（catalase，CAT）測(cè)試盒、三磷酸腺苷（adenosine 5’-triphosphate，ATP）含量測(cè)試盒、T-AOC測(cè)試盒、蛋白定量測(cè)試盒、A045-2考馬斯亮藍(lán) 南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

DZKW-4型電子恒溫水浴鍋 北京中興偉業(yè)儀器有限公司；722可見分光光度計(jì)、UV752N紫外-可見分光光度計(jì) 上海佑科儀器儀表有限公司；SYQ-DSX-280B手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠；移液槍 大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器（北京）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物喂養(yǎng)

將小鼠隨機(jī)分為5 組，即對(duì)照組（等體積的生理鹽水）、紅景天陽性藥物組以及牦牛血低聚肽低、中、高劑量組（365、700、1 500 mg/kg）。灌胃30 d，1 次/d，自由攝食和飲水。牦牛血低聚肽體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)喂養(yǎng)75 只小鼠；牦牛血低聚肽抗缺氧活性的實(shí)驗(yàn)部分喂養(yǎng)75 只小鼠。

紅景天用量參照人用量（每日2 次，每次3 粒）進(jìn)行折算，以蒸餾水溶解紅景天顆粒，配成36.4 mg/mL的灌胃液，按10 mL/kg mb灌胃[23]。

1.3.2 抗缺氧實(shí)驗(yàn)

按1.3.1節(jié)喂養(yǎng)小鼠，灌胃30 d后小鼠眼眶內(nèi)眥靜脈叢采血測(cè)定MDA含量、SOD活力、GSH-Px活力、T-AOC。

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）》[24]的規(guī)定對(duì)灌胃30 d小鼠進(jìn)行常壓缺氧處理，建立常壓缺氧小鼠模型，當(dāng)實(shí)驗(yàn)小鼠停止呼吸時(shí)處死并記錄存活時(shí)間，取小鼠大腦和心肌組織，-80 ℃保存，并根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?duì)組織進(jìn)行相應(yīng)處理及相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。通過對(duì)缺氧相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)，研究牦牛血低聚肽對(duì)常壓缺氧小鼠腦/心肌組織脂質(zhì)過氧化相關(guān)指標(biāo)（MDA、H2O2）的影響，對(duì)抗氧化酶系統(tǒng)中SOD、GSH-Px、CAT活力的影響，對(duì)無氧酵解系統(tǒng)中LDH活力、ATP含量的影響。所有操作均嚴(yán)格按照測(cè)試盒操作書說明進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)3 次平行實(shí)驗(yàn)后得到，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)分析使用Excel 2013、SPSS 16.0、Origin 8.1軟件，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05表示有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 牦牛血低聚肽對(duì)小鼠體內(nèi)抗氧化能力的影響

表1 牦牛血低聚肽對(duì)小鼠MDA含量、T-AOC、GSH-Px活力和SOD活力的影響Table1 Effect of yak blood oligopeptides on MDA content, T-AOC,GSH-Px activity and SOD activity in mice

不同劑量的牦牛血低聚肽灌胃小鼠30 d后，各組血清中的MDA含量、T-AOC、GSH-Px活力和SOD活力見表1。與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組、高劑量組小鼠血清中SOD活力顯著升高（P＜0.05）；其余各組小鼠血清中SOD活力與對(duì)照組相比無顯著差異。與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組小鼠血清中T-AOC極顯著升高（P＜0.01）；高劑量組、中劑量組小鼠血清中T-AOC顯著升高（P＜0.05）；低劑量組小鼠血清中T-AOC無明顯差異。與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組、高劑量組小鼠血清中GSH-Px活力極顯著升高（P＜0.01）；低劑量組小鼠血清中GSH-Px活力無顯著差異。與對(duì)照組相比，各組小鼠血清中MDA含量無明顯差異。由此可見，牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能影響小鼠血清中的MDA含量、T-AOC、GSH-Px活力和SOD活力，并呈現(xiàn)劑量依賴性；其中，牦牛血低聚肽高劑量組的抗氧化能力最好，與陽性對(duì)照組的抗氧化能力相當(dāng)。此結(jié)果說明適當(dāng)劑量的牦牛血低聚肽能顯著升高小鼠體內(nèi)抗氧化酶活力、抑制脂質(zhì)過氧化、加速清除體內(nèi)自由基，提示牦牛血低聚肽可作為抗缺氧保健食品做進(jìn)一步研究。

2.2 牦牛血低聚肽對(duì)常壓密閉缺氧小鼠存活時(shí)間的影響

牦牛血低聚肽在常壓密閉缺氧研究過程中顯示了較高的抗缺氧活性（表2）。與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組雖然能夠延長(zhǎng)常壓密閉缺氧小鼠的存活時(shí)間，但是無顯著性差異；牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能延長(zhǎng)缺氧小鼠的存活時(shí)間，其中高劑量組的抗缺氧活性優(yōu)于陽性對(duì)照組，延長(zhǎng)率差異極顯著（P＜0.01）。該結(jié)果提示，具有抗氧化活性的低聚肽可通過減少機(jī)體內(nèi)過多自由基生成，阻斷ROS自由基瀑布效應(yīng)，從而保護(hù)機(jī)體免受缺氧損傷[24]。

表2 牦牛血低聚肽對(duì)小鼠常壓缺氧存活時(shí)間的影響Table2 Effect of yak blood oligopeptides on survival time of mice under atmospheric hypoxia

2.3 牦牛血低聚肽對(duì)常壓缺氧小鼠腦/心肌脂質(zhì)過氧化保護(hù)作用

2.3.1 MDA含量

表3 牦牛血低聚肽對(duì)常壓缺氧小鼠腦組織及心肌組織MDA含量的影響（n＝15）Table3 Effect of yak blood oligopeptides on MDA content in myocardial and brain tissues of mice under atmospheric hypoxia (n= 15)

MDA是生物體脂質(zhì)氧化的天然產(chǎn)物之一，生物體內(nèi)MDA含量越高代表機(jī)體組織脂質(zhì)過氧化越嚴(yán)重[25]。由表3可知，牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能減少小鼠腦和心肌組織中MDA含量；與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組、牦牛血低聚肽高劑量組小鼠腦組織中MDA含量極顯著降低（P＜0.01），降低率分別為13.34%和15.25%；其余各組小鼠腦組織中MDA含量無顯著差異。與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組、高劑量組小鼠心肌組織中MDA含量極顯著降低（P＜0.01），降低率分別為9.14%和9.89%；其余各組小鼠心肌組織MDA含量無顯著差異。這與2.1節(jié)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果矛盾，可能是因?yàn)槿毖跽T導(dǎo)小鼠機(jī)體氧敏感性途徑活化，且機(jī)體抗氧化途徑的關(guān)鍵酶上調(diào)，從而協(xié)同降低小鼠腦及心肌組織中MDA水平。由此可見，適當(dāng)劑量的牦牛血低聚肽可以顯著降低缺氧小鼠腦及心肌組織中MDA水平，提示其可降低機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度，保護(hù)機(jī)體免受氧化應(yīng)激損傷。

2.3.2 H2O2含量

H2O2是活性氧代謝的副產(chǎn)物之一，H2O2含量的升高提示機(jī)體ROS生成量增加，機(jī)體氧化應(yīng)激加劇，脂質(zhì)過氧化損傷加重[25]。由表4可知，牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能減少小鼠腦和心肌組織中H2O2含量，與對(duì)照組比較，陽性對(duì)照組、高劑量組小鼠腦和心肌組織中H2O2含量均極顯著降低（P＜0.01）；其余各組小鼠腦和心肌組織中H2O2含量均無顯著差異。此結(jié)果提示牦牛血低聚肽可減少ROS生成或加速ROS分解，從而保護(hù)機(jī)體免受缺氧造成的氧化損傷。

表4 牦牛血低聚肽對(duì)常壓缺氧小鼠腦組織及心肌組織H2O2含量的影響（n＝15）Table4 Effect of yak blood oligopeptides on H2O2 content in myocardial and brain tissues of mice under atmospheric hypoxia (n= 15)

2.4 對(duì)抗氧化防御體系的保護(hù)作用

2.4.1 SOD活力

表5 牦牛血低聚肽對(duì)常壓缺氧小鼠腦組織及心肌組織SOD活力的影響（n＝15）Table5 Effect of yak blood oligopeptides on SOD activity in myocardial and brain tissues of mice under atmospheric hypoxia (n= 15)

SOD能催化超氧化物陰離子發(fā)生歧化作用，是生物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶。表5結(jié)果顯示，牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能升高小鼠腦和心肌組織中SOD活力；陽性對(duì)照組小鼠心肌組織中SOD活力升高率為13.06%，與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05）；高劑量組小鼠心肌組織中SOD活力極顯著升高（P＜0.01），升高率為17.91%；其余各組小鼠心肌組織中SOD活力無顯著差異。與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組、高劑量組小鼠腦組織中SOD活力極顯著升高（P＜0.01），升高率分別為20.43%和23.18%；其余各組小鼠腦組織中SOD活力無明顯差異。此結(jié)果提示，牦牛血低聚肽和陽性對(duì)照紅景天均可以維持缺氧狀態(tài)下機(jī)體SOD活力，加速自由基清除，緩解機(jī)體氧化應(yīng)激，保護(hù)機(jī)體免受缺氧造成的氧化損傷。

2.4.2 GSH-Px活力

GSH-Px可以清除細(xì)胞內(nèi)過氧化物，保護(hù)機(jī)體免受自由基損傷。表6結(jié)果顯示，牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能升高小鼠腦和心肌組織中GSH-Px活力；與對(duì)照組比較，陽性對(duì)照組、高劑量組小鼠腦組織中GSH-Px活力升高率分別為29.65%和26.55%，差異顯著（P＜0.05）；其余各組小鼠腦組織中GSH-Px活力無顯著差異。與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組、中劑量組小鼠心肌組織中GSH-Px活力升高率分別為143.17%和134.78%，差異極顯著（P＜0.01）；其余各組小鼠心肌組織中GSH-Px活力無顯著差異。此結(jié)果提示，牦牛血低聚肽可以維持缺氧狀態(tài)下小鼠心肌及腦組織的GSH-Px活力，減少自由基累積，減輕脂質(zhì)過氧化損傷，保護(hù)機(jī)體免受缺氧造成的損傷。

表6 牦牛血低聚肽對(duì)常壓缺氧小鼠腦組織及心肌組織GSH-Px活力的影響（n＝15）Table6 Effect of yak blood oligopeptides on GSH-Px activity in myocardial and brain tissues of mice under atmospheric hypoxia (n= 15)

2.4.3 CAT活力

表7 牦牛血低聚肽對(duì)常壓缺氧小鼠腦組織及心肌組織CAT活力的影響（n＝15）Table7 Effect of yak blood oligopeptides on CAT activity in myocardial and brain tissues of mice under atmospheric hypoxia (n= 15)

CAT是過氧化物酶體的標(biāo)志酶，可催化分解體內(nèi)H2O2，從而使細(xì)胞免受H2O2的損傷[25]。表7結(jié)果顯示，牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能升高小鼠腦和心肌組織中CAT活力；與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組、高劑量組小鼠心肌和腦組織中CAT活力極顯著升高（P＜0.01）；其余各組小鼠心肌和腦組織中CAT活力無顯著差異。此結(jié)果提示，牦牛血低聚肽和紅景天可發(fā)揮同樣作用，即使缺氧狀態(tài)下機(jī)體CAT活力也接近正常水平，但呈顯著的劑量依賴性。

2.5 對(duì)能量代謝的影響

在持續(xù)的缺氧條件下，因氧氣供給不足會(huì)導(dǎo)致ATP含量下降，機(jī)體各組織必須提高無氧代謝水平以獲得足夠能量。因此，無氧代謝能力是影響機(jī)體低氧應(yīng)激狀態(tài)下正常生理活動(dòng)的關(guān)鍵因素之一[26]。

2.5.1 對(duì)無氧酵解的保護(hù)作用

表8 牦牛血低聚肽對(duì)常壓缺氧小鼠腦組織及心肌組織LDH活力的影響（n＝15）Table8 Effect of yak blood oligopeptides on LDH activity in myocardial and brain tissues of mice under atmospheric hypoxia (n= 15)

LDH是一個(gè)與無氧代謝相關(guān)的酶，其活性升高是無氧酵解水平增強(qiáng)的重要標(biāo)志之一[27]，牦牛血低聚肽和紅景天能夠逆轉(zhuǎn)這種變化，降低無氧酵解水平。如表8結(jié)果顯示，牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能降低小鼠腦和心肌組織中LDH活力；相比于對(duì)照組，陽性對(duì)照組小鼠心肌組織中LDH活力極顯著降低（P＜0.01）；高劑量組小鼠心肌組織中LDH活力顯著降低（P＜0.05）；其余各組小鼠心肌組織中LDH活力無顯著差異。相比于對(duì)照組，陽性對(duì)照組、高劑量組小鼠腦組織中LDH活力顯著降低（P＜0.05）；其余各組小鼠腦組織中LDH活力無顯著差異。此結(jié)論提示牦牛血低聚肽和紅景天可發(fā)揮相同的作用，即在缺氧條件下降低腦和心肌組織中無氧酵解水平，從而保護(hù)機(jī)體免受缺氧損傷的影響。LDH活力的降低對(duì)小鼠腦及心肌組織中ATP的含量提升有一定的改善作用，與2.5.2節(jié)所得結(jié)果對(duì)應(yīng)。

2.5.2 對(duì)能量代謝酶系活性的保護(hù)作用

表9 牦牛血低聚肽對(duì)常壓缺氧小鼠大腦組織及心肌組織ATP含量的影響（n＝15）Table9 Effect of yak blood oligopeptides on ATP content in myocardial and brain tissues of mice under atmospheric hypoxia (n= 15)

表9結(jié)果顯示，牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能提高小鼠腦和心肌組織中ATP含量；與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組、高劑量組小鼠腦及心肌組織中ATP含量極顯著升高（P＜0.01）；其余各組小鼠腦及心肌組織中ATP含量無顯著差異。此結(jié)果提示，在缺氧條件下，牦牛血低聚肽能夠和紅景天膠囊發(fā)揮同樣作用，即在一定程度上提高ATP含量，改善機(jī)體能量代謝并維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。

3 討 論

3.1 關(guān)于牦牛血低聚肽使用劑量問題

本實(shí)驗(yàn)使用國(guó)食健字G 20100243紅景天膠囊，小鼠用量參照人用量（每日2 次，每次3 粒）進(jìn)行折算，小鼠每日紅景天用量為364 mg/kg。依據(jù)紅景天用量，本實(shí)驗(yàn)設(shè)定牦牛血低聚肽低劑量組用量為365 mg/kg，中劑量組是低劑量組的2 倍用量，高劑量組是低劑量組的4 倍用量。另外，由于牦牛血低聚肽有苦味，后續(xù)開發(fā)牦牛血低聚肽功能食品需考慮包埋、微膠囊技術(shù)等解決低聚肽苦味問題。

3.2 牦牛血低聚肽體內(nèi)抗氧化能力

前期實(shí)驗(yàn)表明牦牛血低聚肽具有良好的體外抗氧化能力[20]，本實(shí)驗(yàn)表明牦牛血低聚肽具有良好的體內(nèi)抗氧化能力，能夠顯著提高小鼠血清中SOD活力、GSH-Px活力和T-AOC（P＜0.05）；降低小鼠血清中MDA含量（P＞0.05）。此結(jié)果說明牦牛血低聚肽能顯著升高小鼠體內(nèi)抗氧化酶活力、抑制脂質(zhì)過氧化、加速清除體內(nèi)自由基，此結(jié)果提示牦牛血低聚肽可作為抗缺氧保健食品做進(jìn)一步研究。

3.3 牦牛血低聚肽抗缺氧活性及可能作用機(jī)制

常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)是中國(guó)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[27]中評(píng)判保健食品抗缺氧功效的方法之一。小鼠在密閉瓶中的存活時(shí)間越長(zhǎng)，說明小鼠的耐缺氧能力越強(qiáng)。牦牛血低聚肽高、中、低劑量組均能夠延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間，并呈現(xiàn)劑量依賴性；與陽性對(duì)照組（紅景天組）比較，牦牛血低聚肽高劑量組存活時(shí)間延長(zhǎng)率差異極顯著（P＜0.01），初步證實(shí)牦牛血低聚肽具有良好的抗缺氧功效。值得說明的是，可能是小鼠缺氧誘導(dǎo)時(shí)間較短，未能觀察到牦牛血低聚肽中劑量組對(duì)缺氧小鼠大腦及心肌組織的各項(xiàng)生化指標(biāo)的顯著改善[28]。

與對(duì)照組相比，經(jīng)高劑量牦牛血低聚肽干預(yù)后能夠極顯著降低常壓缺氧小鼠腦和心肌組織中MDA（P＜0.01）、H2O2（P＜0.01）的含量，減少自由基的蓄積和脂質(zhì)過氧化。正常情況下，機(jī)體內(nèi)存在完善的氧化-還原體系，但在缺氧條件下大量生成自由基能夠抑制抗氧化酶活性，導(dǎo)致氧化還原狀態(tài)失衡，加重組織損傷[29]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)[30]報(bào)道結(jié)果一致，高劑量牦牛血低聚肽能夠提高常壓缺氧小鼠腦和心肌組織中SOD（P＜0.01）、GSH-Px（心肌組織中P＜0.01，腦組織中P＜0.05）、CAT（P＜0.01）活力，維持機(jī)體內(nèi)自由基代謝穩(wěn)態(tài)。LDH是參與糖無氧酵解和糖異生的重要酶[30]，牦牛血低聚肽能夠降低無氧酵解水平，常壓缺氧小鼠腦和心肌組織中LDH活力與對(duì)照組相比極顯著降低（P＜0.01）。高劑量牦牛血低聚肽能極顯著提升常壓缺氧小鼠腦和心肌組織中的ATP含量（P＜0.01），進(jìn)而可能對(duì)小鼠的低氧耐受有積極影響，相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

以上結(jié)果說明，牦牛血低聚肽作為抗氧化劑可通過清除體內(nèi)過多的自由基、抑制氧化應(yīng)激導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化、維持機(jī)體抗氧化酶系活性、維持線粒體內(nèi)氧化磷酸化的正常進(jìn)行，提高機(jī)體低氧耐受性。關(guān)于其具體的作用機(jī)制、信號(hào)通路將在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中做進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

牦牛血低聚肽具有良好的體內(nèi)抗氧化活性，能夠顯著提高小鼠血清中SOD活力、GSH-Px活力和T-AOC（P＜0.05）；降低小鼠血清中MDA含量（P＞0.05），由此可見，牦牛血低聚肽具有良好的體內(nèi)體外抗氧化活性。

作為具有良好抗氧化能力的牦牛血低聚肽也具有良好的抗缺氧活性，高、中、低劑量組均能夠延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間，并呈現(xiàn)劑量依賴性；與陽性對(duì)照組（紅景天組）比較，牦牛血低聚肽高劑量組存活時(shí)間延長(zhǎng)率差異極顯著（P＜0.01）。與對(duì)照組相比，經(jīng)高劑量牦牛血低聚肽干預(yù)后能夠極顯著降低缺氧小鼠腦和心肌組織中MDA含量（P＜0.01）、H2O2含量（P＜0.01）、LDH活力（P＜0.01），顯著提高缺氧小鼠腦和心肌組織中SOD活力（P＜0.01）、GSH-Px活力（心肌組織中極顯著升高（P＜0.01），腦組織中顯著升高（P＜0.05）、CAT活力（P＜0.01），極顯著提高缺氧小鼠腦和心肌組織中ATP含量（P＜0.01）。

以上結(jié)果表明：牦牛血低聚肽具有良好的抗缺氧活性，能夠保護(hù)常壓密閉缺氧小鼠的大腦及心臟。牦牛血低聚肽能夠緩解缺氧對(duì)機(jī)體導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷，作用機(jī)制可能與清除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化，維持機(jī)體抗氧化酶系活性及維持線粒體內(nèi)氧化磷酸化的正常進(jìn)行有關(guān)。