張 霞，陳輝志，鐘光躍

（1.思南縣思唐街道辦事處，貴州 銅仁 565100；2.貴州山至金生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司，貴州 遵義 563100；3.四川華豐種業(yè)有限責(zé)任公司，四川 成都 610066）

川優(yōu)6203是四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所以優(yōu)質(zhì)不育系川106A與抗病恢復(fù)系成恢3203配組育成的優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)香型雜交水稻新組合，其稻米品質(zhì)達(dá)到國家《優(yōu)質(zhì)稻谷》標(biāo)準(zhǔn)2級(jí)[1]。其于2011年和2014年分別通過四川省審定（審定編號(hào)：川審稻2011002）、湖北省審定（審定編號(hào)：鄂審稻2014007）和國家審定（審定編號(hào)：國審稻2014016）[2]。在四川省2013—2014年度和2014—2015年度現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展項(xiàng)目72個(gè)縣推廣川優(yōu)6203雜交水稻面積達(dá)15.3萬hm2。自推廣以來，深受廣大農(nóng)戶喜愛。但由于制種過程中有不可控因素，使其雜種一代種子純度可能不高，導(dǎo)致種子公司與客戶發(fā)生糾紛[3]。如何快速準(zhǔn)確地測定其純度，一直是困擾種子企業(yè)的一大難題。本地正季鑒定水稻純度費(fèi)時(shí)長，容易錯(cuò)過種子銷售季節(jié)；海南異地鑒定，結(jié)果差異大。DNA指紋圖譜法對技術(shù)人員素質(zhì)要求高，成本大。

筆者通過試驗(yàn)證明：低溫下的酯酶同功酶電泳法可以很好地顯示與區(qū)分雜交水稻川優(yōu)6203的親本與雜種一代，且屬于典型互補(bǔ)譜帶類型，可以用作川優(yōu)6203的純度檢驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器設(shè)備

供試材料為川106A、成恢3203和川優(yōu)6203雜交一代。試驗(yàn)所用儀器為DYY-12型電泳儀、DYY-Ⅲ36型平板電泳槽、水稻剝殼機(jī)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試劑的配取

提取液：20%蔗糖溶液。凝膠液：丙烯酰胺6 g+雙丙烯酰胺0.2 g+蔗糖4.4 g+1%過硫酸氨1 mL+兩性電解質(zhì)4.5 mL定容至100 mL。電極緩沖液：正極1 mol/L磷酸溶液；負(fù)極1 mol/L氫氧化鈉溶液。染色緩沖液：甘氨酸2 g+乳酸1 125 μL定容至1 000 mL。染色液：0.05 g固藍(lán)RR鹽/100粒+0.1 g乙酸-α-萘酯/100粒用染色緩沖液溶解。

1.2.2 試驗(yàn)步驟剝殼：將種子用剝殼機(jī)剝殼，并在清水中浸泡2 h。提?。喝儦げ⒔莺蟮乃痉N子，每粒加提取液l mL搗碎，放置于4℃冰箱中提取10 h。

灌膠：凝膠定容至100 mL，凝膠長23 cm、寬8 cm、厚0.2 cm。

點(diǎn)樣：用2 cm×0.2 cm濾紙條蘸取樣液放在凝膠的靠近正極處，每塊凝膠可點(diǎn)50粒種子。

電泳：50 V電泳1.5 h，220 V電泳2 h，最后高壓580 V電泳1.5 h。

染色：染色10 min。染色完成后沖洗干凈即可直接觀察結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

從圖1中可以看出母本川106A具有上面2條帶；父本成恢3203具有下面4條帶，而雜種一代川優(yōu)6203具有5條帶。除第二條帶外，其余帶譜互補(bǔ)，故可以用作川優(yōu)6203的純度檢驗(yàn)。

圖1 川優(yōu)6203酯酶圖譜

3 討論

（1）進(jìn)行電泳操作，在室溫高于8～9℃時(shí)，應(yīng)該在冰箱中進(jìn)行。

（2）此法對試驗(yàn)儀器、試驗(yàn)人員要求低，一般初中以上文化程度經(jīng)過短期培訓(xùn)就能順利完成。

（3）此法只能用于檢測川優(yōu)6203中川106A和川106B的比例，而不能檢測出雜交種之間相互混雜的情況。所以，使用這種方法還需要和田間檢驗(yàn)相結(jié)合，這樣才能達(dá)到好的效果。

（4）本文改良了酯酶同功酶電泳法提取水稻胚乳中的同工酶，使鑒定時(shí)間大大地縮短，從原來的7 d縮短至1 d。而且，由于胚乳中的同工酶含量較多、染色較深，從而使得染色時(shí)間更短、染色更清晰，更易判斷。