姚星丞　李佳

摘要：通過(guò)檢測(cè)白頭翁湯水提物及其組方的各單味藥對(duì)中性粒細(xì)胞cAMP-磷酸二酯酶（PDE）活性的影響，探討其抗炎機(jī)理。結(jié)果表明白頭翁湯較其組方的各單味藥對(duì)中性粒細(xì)胞cAMP-PDE的抑制作用更強(qiáng)；白頭翁湯組方中備單味藥對(duì)中性粒細(xì)胞cAMP-PDE活性抑制作用是以黃連為主。該研究顯示白頭翁湯水提物可能是通過(guò)抑制cAMP-PDE活性，升高炎癥細(xì)胞cAMP水平發(fā)揮抗炎作用。其抗炎成分及機(jī)理有待于進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞：白頭翁湯；拆分方；磷酸二酯酶

白頭翁湯出自張仲景的《傷寒論》，組方嚴(yán)謹(jǐn)，僅由白頭翁、黃連、黃柏、秦皮四味中藥組成，功擅清陽(yáng)明之濕熱，泄厥陰之郁火，解血分之熱毒，治濕熱之痢?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，白頭翁湯具有高效的抗炎及修復(fù)潰瘍的作用，而臨床上常見(jiàn)炎癥性疾病多與中性粒細(xì)胞的炎性反應(yīng)密切相關(guān)。磷酸二酯酶（PDE）可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)cAMP水平發(fā)揮抗炎作用，本試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)白頭翁湯水提物及其各味拆分方對(duì)中性粒細(xì)胞PDE活性的抑制作用，初探其抗炎的相關(guān)機(jī)理與效果，為白頭翁湯的臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1材料與方法

1.1主要試劑

cAMP、Rolipram、PBS（pH值7.4）、鈣鎂PBS（pH值7.4）、中藥白頭翁、黃連、黃芩、黃柏飲片（購(gòu)自北京同仁堂藥店）。

1.2白頭翁湯及其備組方單味藥水提物的制備

白頭翁湯及其各拆分方單味藥物水提物的制備方法參照韓太云等人的方法，將購(gòu)買的白頭翁等飲片用蒸餾水淋1次，加蒸餾水煎煮2次，煎液減壓濃縮至1g/mL生藥。加無(wú)水乙醇使其濃度達(dá)到70%，邊加邊攪拌，4℃放置24h，取上清液用氫氧化鈉調(diào)pH值為7.5～8.0，放置12h，取上清液揮發(fā)掉乙醇，將藥液濃縮至1g/mL生藥。放置12h，離心取上清液濃縮干燥，得白頭翁湯及其四味拆分方單味藥的水提物。

1.3中性粒細(xì)胞cAMP-PDE活性檢測(cè)

中性粒細(xì)胞cAMP-PDE活性影響的檢測(cè)方法參考張冰等的方法。cAMP濃度為100μmol/L，白頭翁湯等水提物的反應(yīng)濃度為10mg/mL，陽(yáng)性對(duì)照為Rolipram，反應(yīng)濃度為100μmol/L，均用PBS配制?？瞻捉M：cAMP 40μL；對(duì)照組：cAMP40μL、酶樣品20μL；白芍水提物組：cAMP 40μL、白頭翁湯等中藥水提物10μL、酶樣品20μL；Rolipram組：CAMP 40μL、Rolipram10.0μL、酶樣品20μL，所有體系加PBS補(bǔ)足100μL。

1.4數(shù)據(jù)處理

PDE活性以底物水解百分率表示：PDE活性=（空白對(duì)照管底物濃度-對(duì)照管或中藥管底物濃度）×10%/空白對(duì)照管底物濃度；中藥對(duì)PDE的抑制率用以下公式表示：PDE活性抑制率%=（對(duì)照管PDE活性-中藥管PDE活性）×10%/對(duì)照管PDE活性。

2結(jié)果與分析

2.1白頭翁湯水提物對(duì)中性粒細(xì)胞cAMP-PDE活性的影響

白頭翁湯水提物在10mg/mL的反應(yīng)濃度下，能極顯著的抑制cAMP-PDE4的活性（P<0.001），其抑制率顯著高于Rolipram組。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2白頭翁備拆分方水提物對(duì)中性粒細(xì)胞cAMP—PDE活性的影響

結(jié)果顯示四味白頭翁湯拆分方單藥中，黃連抑制cAMP-磷酸二酯酶活性作用效果最強(qiáng)，其次為黃柏。結(jié)果見(jiàn)表2。且白頭翁湯對(duì)cAMP-磷酸二酯酶活性的抑制作用效果優(yōu)于其各味拆分方。表2白頭翁湯拆分方水提物及Rolipram對(duì)

3討論

考慮到傳統(tǒng)中藥均采用水煎煮的方法，水溶性成分可能更能真正代表其傳統(tǒng)作用成分。因此，本試驗(yàn)通過(guò)水提醇沉法提取了白頭翁湯及其拆分方的四味中藥中的水溶性成分，檢測(cè)其對(duì)cAMP-PDE活性的影響。cAMP具有抑制中性粒細(xì)胞活化及前列腺素E2過(guò)渡合成的作用。PDE是cAMP的唯一水解酶，對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞PDE水平起著關(guān)鍵性作用。結(jié)果表明，白頭翁湯水提物對(duì)中性粒細(xì)胞中cAMP-PDE活性具有極顯著的抑制作用，其作用優(yōu)于白頭翁湯各拆分方。因此，白頭翁湯水提物的作用可能是通過(guò)抑制PDE活性，升高cAMP水平，進(jìn)而發(fā)揮良好的抗炎效果。本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研究白頭翁何種成分通過(guò)調(diào)節(jié)cAMP-PDE活性發(fā)揮抗炎作用影響奠定基礎(chǔ)。