陳瑞丹 李娜 穆亞平

[摘要]目的 探討一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）及硫化氫（H2S）水平的變化與嬰幼兒輕度輪狀病毒腸炎合并良性驚厥的關(guān)系。方法 選取2015年9月～2017年4月在沈陽(yáng)市兒童醫(yī)院確診為輕度輪狀病毒性腸炎伴良性驚厥患兒50例為觀察組，選取同期的單純輕度輪狀病毒腸炎患兒50例為對(duì)照組。觀察兩組患兒的臨床特點(diǎn)、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查、NO、NOS、H2S變化及觀察組的驚厥特點(diǎn)。結(jié)果 兩組患兒臨床特點(diǎn)、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查及NO水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。觀察組的血清NOS水平顯著高于對(duì)照組，血清H2S水平顯著低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 輕度輪狀病毒腸炎伴良性驚厥的發(fā)生與NO水平無(wú)關(guān)，與NOS、H2S水平有關(guān)，提示可以通過(guò)血清中NOS和H2S水平變化預(yù)測(cè)輕度輪狀病毒腸炎患兒良性驚厥的發(fā)生。

[關(guān)鍵詞]輪狀病毒性腸炎；良性驚厥；血清一氧化氮；血清一氧化氮合酶；血清硫化氫

[中圖分類(lèi)號(hào)] R725.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）9（a）-0019-04

[Abstract] Objective To explore the relationship between the change of nitric oxide （NO）， nitric oxide synthase （NOS） and hydrogen sulfide （H2S） level in infants with mild Rotavirus enteritis accompanied with benign convulsions. Methods A total of 50 children diagnosed as mild Rotavirus enteritis accompanied with benign convulsion in Shenyang Children′s Hospital from September 2015 to April 2017 were selected as the observation group in Shenyang Children′s Hospital， and 50 children with simple mild Rotavirus enteritis were selected as the control group at the same time. The clinical features， routine laboratory tests， and NO， NOS， H2S changes in children of the two groups and convulsion characteristics of the observation group were observed. Results There was no significant difference in clinical characteristics， routine laboratory examination and NO level between the two groups （P>0.05）. The serum NOS level of the observation group was significantly higher than that of the control group， and the serum H2S level was significantly lower than that of the control group （P<0.01）. Conclusion The occurrence of mild rotavirus enteritis with benign convulsion is independent of NO level， and is related to NOS and H2S level， and it suggests that the incidence of benign convulsions in children with mild Rotavirus enteritis can be predicted by changes in serum NOS and H2S level.

[Key words] Rotavirus enteritis； Benign convulsion； Serum nitric oxide； Serum nitric oxide synthase； Serum hydrogen sulfide

輪狀病毒感染是嬰幼兒急性腸胃炎的主要原因，占嬰幼兒腸道感染的39%左右[1]，5歲以下患兒全球死亡人數(shù)約52.7萬(wàn)/年[2]。輪狀病毒腸炎常合并神經(jīng)系統(tǒng)損害，并以良性驚厥多見(jiàn)[3]，癲癇轉(zhuǎn)換率為2%～3%[4]，復(fù)發(fā)率為4.7%[5]。但目前對(duì)于輕度輪狀病毒腸炎伴良性驚厥的具體發(fā)生機(jī)制尚未明確，為進(jìn)一步明確輕度輪狀病毒腸炎伴良性驚厥的發(fā)生機(jī)制，現(xiàn)選取國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)血清一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）及硫化氫（H2S）3個(gè)指標(biāo)進(jìn)行研究，以明確其是否參與了輕度輪狀病毒腸炎伴良性驚厥的發(fā)病機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2015年9月～2017年4月在沈陽(yáng)市兒童醫(yī)院確診為輕度輪狀病毒性腸炎伴良性驚厥的患兒50例為觀察組，男28例，女22例；月齡10～36個(gè)月，平均（22.6±12.0）個(gè)月。隨機(jī)選擇同期輕度輪狀病毒性腸炎無(wú)驚厥的患兒50例為對(duì)照組，男26例，女24例；月齡7～35個(gè)月，平均（21.5±11.8）個(gè)月，兩組患兒的性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有患兒家屬均簽署知情同意書(shū)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合輕度胃腸炎合并良性驚厥的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②大便輪狀病毒抗原檢測(cè)陽(yáng)性；③驚厥發(fā)作時(shí)患兒可有短暫意識(shí)喪失，醒后精神狀態(tài)尚可；④驚厥基本形式為全身強(qiáng)直—陣攣性發(fā)作，可為單次或多次發(fā)作。排除標(biāo)準(zhǔn)：①年齡<6個(gè)月或>3歲、有中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或疾病史、精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育異常；②伴煩躁、精神萎靡、意識(shí)蒙朧等全身中毒癥狀；③伴中到重度脫水，或伴重癥代謝性酸中毒；④頭部MRI、血清電解質(zhì)及血糖等檢測(cè)異常；⑤不除外癲癇、中毒、顱內(nèi)感染等引起的驚厥。

1.3輕度胃腸炎合并良性驚厥的診斷標(biāo)準(zhǔn)

①6個(gè)月～3歲既往健康的嬰幼兒，無(wú)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或疾病史，精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育正常；②可伴輕度脫水，無(wú)明顯酸中毒及電解質(zhì)紊亂；③單次病程中驚厥可多次發(fā)作；④頭部MRI、血清電解質(zhì)及血糖檢測(cè)正常；⑤發(fā)作時(shí)腦電圖正?；虺霈F(xiàn)短暫異常的慢波、局灶性棘波、癇性放電；⑥排除腦膜腦炎、腦膜炎、瑞氏綜合征等其他的神經(jīng)系統(tǒng)疾病引起的癲癇發(fā)作[6]。

1.4血清NO及NOS水平的測(cè)定

在確診后24 h內(nèi)用無(wú)抗凝干燥管抽取兩組患兒的靜脈血4 ml，離心分離血清保存在-80℃的冰箱里。根據(jù)選購(gòu)于美國(guó)Sigma公司的NO測(cè)試盒（硝酸還原酶法）及NOS合成酶測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)分別進(jìn)行嚴(yán)格操作，使用分光光度計(jì)分別在550、530 nm處測(cè)定NO、NOS吸光度值。最后根據(jù)NO、NOS標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出NO、NOS水平。

1.5血清H2S水平的測(cè)定

在確診后的24 h內(nèi)用無(wú)抗凝干燥管分別抽取兩組患兒的靜脈血2 ml，離心分離血清后保存在-60℃的冰箱里。根據(jù)選購(gòu)于美國(guó)Sigma公司的測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行嚴(yán)格操作，使用分光光度計(jì)在670 nm處測(cè)定吸光度值。最后根據(jù)H2S標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出H2S水平。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)；等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組患兒臨床特點(diǎn)及常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果的比較

2.1.1腹瀉的臨床特點(diǎn) 兩組患兒腹瀉均發(fā)生在病程的1～4 d，為蛋花湯樣或水樣便，無(wú)黏液及膿血，無(wú)里急后重。兩組患兒每日不同腹瀉次數(shù)所占百分比比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.2440，P>0.05）（表1）。

2.1.2嘔吐的臨床特點(diǎn) 兩組患兒嘔吐均發(fā)生在病程的1～4 d，為胃內(nèi)容物，不含膽汁及咖啡色樣物。兩組患兒每日不同嘔吐次數(shù)所占百分比比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.6314，P>0.05）（表2）。

2.1.3脫水的臨床特點(diǎn) 兩組中部分患兒有皮膚彈性稍差、口腔黏膜略干燥、眼窩略凹陷、尿量略減少等輕度脫水的表現(xiàn)。兩組患兒脫水情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.5425，P>0.05）（表3）。

2.1.4兩組患兒常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果的比較 兩組患兒血?dú)夥治觥⒀Ｒ?guī)、CRP、心肌酶譜、肝功能、腎功能、便常規(guī)及尿常規(guī)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表4）。

2.2兩組患兒血清NO、NOS、H2S水平的比較

兩組患兒的血清NO水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），觀察組的血清NOS水平顯著高于對(duì)照組，血清H2S水平顯著低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表5）。

2.3觀察組患兒驚厥的特點(diǎn)

驚厥均為全身強(qiáng)直—陣攣性發(fā)作，均有突然意識(shí)喪失，四肢僵直，雙眼凝視或上翻等表現(xiàn)。驚厥發(fā)作次數(shù)：32例發(fā)作1次、13例發(fā)作2～3次、3例發(fā)作4～5次、2例發(fā)作>5次，平均（1.78±1.20）次；驚厥發(fā)作時(shí)間：10例 ≤1分，34例2～5分，6例>5分；驚厥發(fā)作體溫：34例正常，10例抽搐前體溫升高，最高達(dá)40°C。對(duì)7例驚厥發(fā)作次數(shù)>5次，驚厥時(shí)間>5分患兒行腰椎穿刺術(shù)，腦脊液檢查結(jié)果均正常。所有患兒頭部MRI無(wú)異常。電診檢查：45例為正常睡眠腦電地形圖，無(wú)彌漫性或局限性慢波出現(xiàn)，無(wú)癇性放電等異常改變；2例為界限性幼兒腦電圖；3例為異常睡眠腦電地形圖。5例患兒出院前復(fù)查腦電圖結(jié)果均正常。

3討論

輪狀病毒腸炎是由呼腸孤病毒科輪狀病毒屬——輪狀病毒感染引起的一種既可經(jīng)糞-口傳播，也可通過(guò)氣體溶膠形式經(jīng)呼吸道感染的急性胃腸炎性疾病[7]。輪狀病毒腸炎是造成嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)不良、生長(zhǎng)發(fā)育障礙甚至死亡的主要原因之一。輪狀病毒屬自限性疾病，患兒感染后多可自愈，但仍有部分出現(xiàn)良性驚厥、心肌損害、肝膽損害、腎炎、肺炎等腸道外癥狀[8]。雖然關(guān)于輪狀病毒合并良性驚厥的報(bào)道很多，但其發(fā)病機(jī)制仍不明確。

NO是NOS以L-精氨酸為底物，利用氧生成的一種高擴(kuò)散性、自由基性氣體。NO在人體中可參與免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)傳遞、激素釋放和血管擴(kuò)張等多種生理過(guò)程，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中關(guān)鍵的信號(hào)分子[9]。NOS具有神經(jīng)元型（nNOS）、誘導(dǎo)型（iNOS）和內(nèi)皮細(xì)胞型（eNOS）三種亞型，分別存在于神經(jīng)元、免疫細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)。nNOS具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)突觸可塑性、中樞性血壓調(diào)節(jié)及松弛平滑肌等作用，iNOS可以協(xié)助巨噬細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中對(duì)抗病原體，兩者對(duì)神經(jīng)元均有毒性作用[10]；eNOS具有心血管張力調(diào)節(jié)、血管平滑肌細(xì)胞增殖、白細(xì)胞粘連和血小板聚集等功能，可能對(duì)神經(jīng)元起到保護(hù)作用[11]。研究發(fā)現(xiàn)[12]，輪狀病毒腸炎伴良性驚厥患者腦脊液中的NO水平與化膿性腦膜炎、腦炎或發(fā)熱性驚厥患者相比顯著升高，NSP4、細(xì)胞因子和NO等介質(zhì)穿過(guò)血腦屏障可能是誘發(fā)輪狀病毒腸炎患者驚厥發(fā)作的主要原因。石凱麗等[13]認(rèn)為輕度胃腸炎伴良性驚厥的發(fā)生機(jī)制與NO及其合酶體系密切相關(guān)，患兒抽搐的發(fā)生可能與iNOS異常升高導(dǎo)致的NO生成過(guò)量有關(guān)。本研究中，兩組患兒的血清NO水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；兩組患兒的血清NOS水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?？紤]原因可能為輕度輪狀病毒腸炎發(fā)生后，刺激機(jī)體免疫細(xì)胞產(chǎn)生大量iNOS，當(dāng)其對(duì)神經(jīng)元的毒性作用遠(yuǎn)高于eNOS對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用時(shí)，導(dǎo)致患兒驚厥地發(fā)作。NOS催化生成NO的過(guò)程與鈣離子密切相關(guān)，nNOS和eNOS催化生成NO的過(guò)程為鈣依賴型，iNOS催化生成NO的過(guò)程為鈣非依賴型。Yeom等[14]發(fā)現(xiàn)輪狀病毒腸炎伴良性驚厥患兒的鈣離子濃度雖然在正常范圍內(nèi)，沒(méi)有直接引起驚厥發(fā)作，但與單純性輪狀病毒腸炎患兒相比鈣離子穩(wěn)態(tài)有更大的破壞。因此，nNOS和eNOS催化生成NO的功能減弱或消失，NO以iNOS催化生成為主。iNOS的單獨(dú)作用，不足以催化生成大量NO引起患兒驚厥發(fā)作。

H2S是一種分子量小、脂溶性高、在體內(nèi)可以通過(guò)多種途徑合成的內(nèi)源性氣體信號(hào)分子。研究發(fā)現(xiàn)[15]，H2S在體內(nèi)不但可以增加谷胱甘肽的水平，還可以在氧化應(yīng)激時(shí)通過(guò)激活A(yù)TP依賴的K+和Cl-通道來(lái)保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。Whiteman等[16]的研究表明H2S是大腦功能和疾病的重要介質(zhì)，具有抗神經(jīng)細(xì)胞氧化的作用。本研究結(jié)果顯示，觀察組患兒血清的H2S水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。輕度輪狀病毒性腸炎伴良性驚厥的發(fā)生與內(nèi)源性H2S濃度有關(guān)，推測(cè)患兒驚厥發(fā)作后體內(nèi)產(chǎn)生大量自由基，內(nèi)源性H2S為保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激而過(guò)度消耗，導(dǎo)致內(nèi)源性H2S進(jìn)一步減少。

綜上所述，輕度輪狀病毒腸炎伴良性驚厥的發(fā)生與NO水平無(wú)關(guān)，與NOS、H2S水平有關(guān)，提示臨床工作者可以通過(guò)患兒血清NOS水平升高及血清H2S水平降低來(lái)預(yù)測(cè)輕度輪狀病毒腸炎患兒良性驚厥的發(fā)生。

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（收稿日期：2018-02-11 本文編輯：許俊琴）