張貝葉 趙晶晶 高榮 封宏哲

(河北農(nóng)業(yè)大學海洋學院，河北滄州 061100)

金魚(由鯽魚改良而成的觀賞魚類的統(tǒng)稱)易于飼養(yǎng)，能美化環(huán)境，很受人們的喜愛，是具有中國特色的觀賞魚。但是飼養(yǎng)過程中出現(xiàn)的常見疾病如不及時治療，會造成損失。金魚感染小瓜蟲嚴重時，魚的全身皮膚和魚鰭都會布滿白點并被白色黏液覆蓋?；妓共◆~體表面會長有白色或者灰黑色的絨毛狀或線狀物質(zhì)。福爾馬林是40%左右甲醛的水溶液，具刺激性氣味，有凝固蛋白質(zhì)作用，能抑制病毒、細菌、真菌、寄生蟲和浮游生物，可治療多種常見魚病[1]。本文研究甲醛對金魚的急性毒性作用，通過獲得的數(shù)據(jù)求得半致死濃度和安全濃度，可為亞急性、慢性毒性試驗提供參考資料，通過觀察的毒性癥狀可為臨床檢測毒性提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗用魚

所用金魚為實驗室養(yǎng)殖的草種魚，體形近似鯽魚，身體側(cè)扁呈紡錘形，有背鰭，胸鰭呈三角形，長而尖。野性略存，實驗過程中對藥物有跳缸的可能。挑選健康且狀態(tài)一致的金魚進行一周的馴養(yǎng)[2]。

1.2 實驗藥物

甲醛(分析純)。

1.3 實驗工具

若干個容量、顏色相同的塑料盆、塑料桶，移液管、洗耳球、玻璃棒、鑷子、電子秤、大小燒杯、溫度計若干、精密pH試紙、標簽紙。

1.4 實驗條件

每個盆中為4L曝氣3d的自來水，水溫：18℃，pH：7，溶解氧控制在5mg/L以上。

1.5 實驗方法

實驗開始前隨機選取10條健康、狀態(tài)相近的金魚，進行體長、體重的測量與記錄，得出均值。

在正式實驗開始之前先進行為期2d的預實驗，根據(jù)預實驗結(jié)果確定正式實驗濃度范圍。預實驗濃度范圍通過參考相關(guān)急性毒性實驗文獻確定[3]，共設置6個梯度組(15ppm、20ppm、25ppm、30ppm、40ppm和50ppm)和1個對照組，正式實驗的藥物濃度按照等對數(shù)間距計算，均設置2個重復的平行實驗，做好標簽標記。

實驗藥液每24h更新一次，防止藥物降解，實驗期間觀察水質(zhì)狀態(tài)和實驗魚的游泳狀態(tài)、呼吸、體表黏液等表征并記錄，同時記錄每個組別實驗魚的死亡時間及數(shù)量。通過半對數(shù)坐標和直線內(nèi)插法求得甲醛對金魚的半致死濃度(LC50)，進而通過實驗數(shù)據(jù)計算出安全濃度。實驗期間不投餌。

半致死濃度計算公式(改進寇氏法)：

LC50=lg-1[Xm-i(∑p-0.5)]

其中：

Xm：最大劑量對數(shù)；

p：各組死亡率；

i：相鄰兩劑量比值(高劑量為分子)的對數(shù)。

安全濃度計算公式[4]：

2 實驗結(jié)果

經(jīng)計算得：實驗魚平均體長：4.72cm，平均質(zhì)量：3.77g。

由表1預實驗觀察結(jié)果可以得出：正式實驗濃度梯度可將范圍選擇在20～40mg/L。

表1 預實驗觀察結(jié)果

正式實驗預備設計6個濃度梯度，藥物濃度按照等對數(shù)間距計算，結(jié)果見表2。

表2 正式實驗觀察結(jié)果

經(jīng)計算，甲醛在24h、48h、96h的半致死濃度見表3。

表3 甲醛毒性實驗結(jié)果

甲醛濃度為40mg/L時，15min之后實驗魚開始有浮頭現(xiàn)象，2h后有明顯體表黏液，對刺激反應遲鈍，游動偏向一側(cè)，或有明顯跳缸現(xiàn)象，3h時開始出現(xiàn)死亡，24h死亡率為100%。甲醛濃度為20mg/L時，96h內(nèi)未出現(xiàn)死亡情況。

在甲醛濃度為22.98mg/L以及20mg/L的組別中，9h內(nèi)未出現(xiàn)不適應的反應。甲醛會消耗水中氧氣并且損害魚鰓組織，刺激分泌黏液阻塞呼吸甚至對鰓部造成腐蝕，同時會刺激魚的黏液、表皮蛋白質(zhì)凝固。實驗魚在不同濃度上面受到不同程度的刺激：甲醛在濃度較高時對金魚的生命活動表現(xiàn)出抑制作用，實驗魚的呼吸、擺尾頻率降低；在濃度較低時實驗魚的呼吸、擺尾頻率明顯加快，表現(xiàn)出對藥物的毒性及改變環(huán)境的抵抗。

3 討論

甲醛的安全濃度是7.94mg/L，在實際使用時對濃度要求很小、時間短不易把控，因此不適合大范圍池塘潑灑，可適當濃度浸浴來治療魚病。使用時注意，不同的條件時金魚對甲醛的耐受性可能不同，如果不確定適用量時可以低濃度試用，觀察魚的反應，如發(fā)現(xiàn)呼吸頻率、擺尾頻率出現(xiàn)明顯變化，需及時將其轉(zhuǎn)移到無藥物添加的水中，以免發(fā)生進一步的中毒癥狀。在使用甲醛治療魚病時要將溶解氧控制在5mg/L以上，以防甲醛消耗氧氣造成魚缺氧死亡。