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        急性腦梗死患者血清循環(huán)miR-424表達變化及其與炎癥反應(yīng)、脂代謝的關(guān)系

        2018-12-13 11:54:30郜樂樂常永超程麗妞申緋翡劉洪利
        山東醫(yī)藥 2018年43期
        關(guān)鍵詞:血清水平檢測

        郜樂樂,常永超,程麗妞,申緋翡,劉洪利

        (1洛陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)系,河南洛陽471000;2河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院;3洛陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)與檢驗系)

        急性腦梗死(ACI)約占腦梗死的70%。早期診斷、及時采取有效的治療策略是影響ACI患者預(yù)后的關(guān)鍵[1]。原位血栓或其他部位血栓脫落導(dǎo)致腦栓塞是誘發(fā)ACI的主要原因。炎癥反應(yīng)、脂代謝在ACI的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[2, 3]。白細胞介素6(IL-6)、IL-8、C反應(yīng)蛋白(CRP)是臨床常用的炎癥因子指標(biāo)。尋找能夠反映ACI病理改變的血清生物靶標(biāo),對于ACI的早期診斷、指導(dǎo)治療和預(yù)后判斷,均具有積極意義。微小RNA(microRNAs)是小非編碼RNA,長度18~25 nt,參與調(diào)節(jié)多種生理病理過程。ACI患者血清中存在多種異常表達的microRNAs[4, 5]。microRNA-424(miR-424)對ACI導(dǎo)致的腦組織缺血性損傷具有保護作用[6]。但目前關(guān)于血清循環(huán)miR-424在ACI早期診斷、預(yù)后判斷中的作用相關(guān)報道罕見。我們檢測了100例ACI患者血清循環(huán)miR-424,分析其與炎癥反應(yīng)、脂代謝及患者預(yù)后的關(guān)系?,F(xiàn)報告如下。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料 選擇2012年1月至~2017年3月間河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的100例ACI患者其中男62例、女38例,年齡59~78(68.21±6.35)歲,根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)規(guī)定的ACI相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],制定納入標(biāo)準(zhǔn):初次發(fā)作的腦梗死患者;發(fā)病72 h內(nèi)入院;影像學(xué)檢查確診為ACI。排除標(biāo)準(zhǔn):合并乙肝等傳染性疾病者;合并肝腎等重要器官功能不全者;具有心肌梗死、周圍血管性病變等病史者。100例患者根據(jù)NIHSS評分分為重度ACI患者61例和輕度ACI患者39例。選取同期我院門診體檢的60例健康者,其中男38例、女性22例,年齡60~78(67.58±6.66)歲。所有納入者年齡、性別比例等一般資料具有可比性。所有研究對象均簽署知情同意書,本研究獲河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會審核同意。

        1.2 血清循環(huán)miR-424檢測 抽取納入者晨起空腹靜脈血10 mL,室溫靜置10 min,3 000 rpm離心20 min,取上清,-80 ℃保存?zhèn)溆谩崟r定量PCR法檢測血清循環(huán)miR-424:TRIzol試劑提取血清總RNA,采用Hairpin-itTM miRNAs qPCR定量試劑盒,ABI7500實時定量PCR系統(tǒng),進行反應(yīng)。反應(yīng)條件如下,95 ℃,30 s;95 ℃,5 s;60 ℃,30 s,共40個循環(huán)。引物序列如下,miR-424正向引物:5′-GGCTAGTCAGCAGCAATTCATGT-3′,miR-424反向引物:5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′;U6正向引物:5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,U6反向引物:5′-AACGCTTCA CGAATTTGCGT-3′,以U6為內(nèi)參,以2-ΔΔCt代表血清循環(huán)miR-424的相對表達量。實驗重復(fù)3次,取平均值。

        1.3 血清炎癥反應(yīng)因子檢測 采用ELISA法檢測檢測血清 IL-6、IL-8、CRP,所有操作均嚴格參照試劑盒(北京方程嘉鴻科技有限公司)的操作步驟,采用全自動酶標(biāo)儀(DNM-9602G)檢測。實驗重復(fù)3次,取平均值。

        1.4 血清脂代謝指標(biāo)檢測 酶法檢測納入者血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)水平,直接法檢測低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋白(HDL-C)水平,采用全自動生化儀(日立7080)進行檢測。

        1.5 ACI患者隨訪方法 采用門診、電子通訊等方式,對ACI患者進行為期1年的隨訪,采用格拉斯哥預(yù)后評分(GOS)評估ACI患者預(yù)后情況,GOS評分越高表示病情好轉(zhuǎn),分數(shù)越低表示病情越重[8]。

        2 結(jié)果

        輕、 重度ACI患者及健康者血清循環(huán)miR-424相對表達量分別為0.71±0.21、0.62±0.24、0.98±0.36,與健康者比較,輕、 重度ACI患者血清循環(huán)miR-424相對表達量均降低(P均<0.05);與輕度ACI患者比較,重度ACI患者血清循環(huán)miR-424相對表達量降低(P<0.05)。

        輕、 重度ACI患者及健康者血清IL-6、IL-8、CRP水平比較見表1。

        輕、 重度ACI患者及健康者血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比較見表2。

        輕度、 重度ACI患者GOS評分分別為(3.15±0.65)、(2.14±0.59)分,二者比較,P<0.05。相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示,ACI患者血清循環(huán)miR-424水平與HDL-C、GOS評分呈正相關(guān)(r=0.49、0.61;P均<0.05),與血清IL-6、IL-8、CRP、TC、TG、LDL-C水平均呈負相關(guān)(r=-0.36、-0.42、-0.39、-0.47、-0.56、-0.57;P均<0.05)。

        表1 輕、 重度ACI患者及健康者血清IL-6、IL-8、CRP水平比較

        注:與健康者比較,*P<0.05;與輕度ACI患者比較,#P<0.05。

        表2 輕、重度ACI患者及健康者血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平比較

        注:與健康者比較,*P<0.05。

        3 討論

        ACI是最常見的腦部疾病之一,病情復(fù)雜、預(yù)后差、致殘率高。近年ACI發(fā)病率逐年增加。ACI早期癥狀不明顯(如頭暈、嘔吐、頭痛等),但病情發(fā)展迅速,可導(dǎo)致患者昏迷、半身不遂甚至死亡。尋找有效的ACI早期診斷、預(yù)后判斷的血清生物靶標(biāo)有助于提高治療療效、改善患者預(yù)后。目前已發(fā)現(xiàn)多種與ACI關(guān)系緊密的血清分子,如ACI患者腦脊液中血清胱抑素C(cystatin C)可進入血循環(huán),導(dǎo)致血清cystatin C水平升[9];高尿酸血癥是心血管疾病的獨立危險因素,Han等[10]的回顧性研究結(jié)果證實,血尿酸與ACI患者的腦白質(zhì)高信號有關(guān)[10];此外,血清牙齦卟啉單胞菌特異性IgG是我國居民患ACI的危險因素[11]。

        血清循環(huán)microRNAs能夠耐受RNA酶進而穩(wěn)定存在于血循環(huán),可作為疾病的診斷指標(biāo)。Miyaaki等[12]研究發(fā)現(xiàn),血清microRNA-122可作為非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)診斷的生物學(xué)標(biāo)志分子。血清microRNA-218可作為食管癌患者早期診斷的生物標(biāo)記物和雨后預(yù)測的靶分子[13]。卵巢癌患者血清microRNA-145[14]、乳腺癌患者血清microRNA-21[15]以及結(jié)腸癌患者血清microRNA-155[16]在診斷、預(yù)測病情進展及患者預(yù)后等方面均具有積極意義。血清miR-16可作為超急性腦梗死的診斷、危險評估及預(yù)后的生物靶標(biāo)[17];血清miR-24、miR-21可作為ACI患者早期診斷的生物靶標(biāo)[4];血清miR-124可作為腦梗死早期診斷的生物靶標(biāo)[18]。

        miR-424低表達與卵巢癌、非小細胞肺癌、乳腺癌和結(jié)腸癌的增殖、侵襲以及耐藥性均關(guān)系緊密[19~21]。miR-424在血管性疾病(如肺動脈高血壓)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病(如脆性X相關(guān)的震顫/共濟失調(diào)綜合征)和不同組織干細胞分化中均發(fā)揮重要作用[22]。有研究[23]證實,小鼠腦缺血4 h后血清miR-424表達明顯降低,增加miR-424表達可減輕腦梗死體積和腦水腫。本研究發(fā)現(xiàn),與健康者相比,ACI患者血清循環(huán)miR-424水平降低。說明miR-424減少可能參與并促進了ACI發(fā)生、進展。

        高脂血癥、高血壓、炎癥反應(yīng)、吸煙、酗酒等都是誘發(fā)ACI的重要危險因素。炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致ACI繼發(fā)性腦損傷的關(guān)鍵因素之一,Liu等[24]研究發(fā)現(xiàn),ACI患者的血清IL-33水平顯著升高,可能參與并促進了ACI發(fā)生進展過程。本研究發(fā)現(xiàn),ACI患者血清IL-6、IL-8、CRP水平均升高,提示炎癥反應(yīng)因子參與了ACI發(fā)生、進展。近年來,越來越多的證據(jù)表明,炎癥在腦梗死發(fā)生和復(fù)發(fā)中發(fā)揮作用,如腦梗死患者血清中TNF-α、IL-1以及IL-6存在異常表達,炎癥反應(yīng)強度可反映ACI病情嚴重程度,血清炎性因子是一系列對機體炎癥反應(yīng)具有促進作用的細胞因子,在一定程度上可反應(yīng)機體的應(yīng)激狀態(tài)。

        脂代謝紊亂與ACI關(guān)系密切,血脂升高可引起血液黏度升高,紅細胞攜氧和釋氧功能下降,導(dǎo)致局部組織缺血缺氧,易引發(fā)腦梗死。ACI患者普遍存在血脂代謝異常,多表現(xiàn)為TG、TC、LDL明顯升高,而HDL明顯降低[25],本研究結(jié)果顯示,ACI患者血清TC、TG、LDL-C水平升高,HDL-C水平降低,證實ACI患者體內(nèi)存在脂代謝異常。

        本研究進一步分析了血清循環(huán)miR-424與炎癥反應(yīng)因子、脂代謝指標(biāo)及GOS評分的相關(guān)性,結(jié)果顯示,ACI患者血清循環(huán)miR-424水平與血清IL-6、IL-8、CRP、TC、TG、LDL-C水平均呈負相關(guān),與HDL-C呈正相關(guān),提示ACI患者血清循環(huán)miR-424水平可反映患者炎癥反應(yīng)、脂代謝的波動程度。盡管IL-6、IL-8、CRP、TC、TG、LDL-C、HDL-C均不是miR-424的直接靶基因,但各指標(biāo)與miR-424均呈負相關(guān)性,由此推測,miR-424低表達可增加某些關(guān)鍵信號通路分子的表達,進而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)增強、脂代謝紊亂。miR-424是血管生成的重要調(diào)節(jié)因子,Lee等[26]發(fā)現(xiàn)miR-424參與炎癥介導(dǎo)的血管再生,后續(xù)研究將在體外細胞水平探究miR-424參與炎癥反應(yīng)、脂代謝的分子機制。此外,本研究發(fā)現(xiàn)血清循環(huán)miR-424與ACI患者GOS評分呈正相關(guān),GOS評分可反應(yīng)患者功能預(yù)后情況,以上結(jié)果均提示,監(jiān)測ACI患者血清循環(huán)miR-424水平,對病情評估、預(yù)后判斷有較高的臨床價值。

        綜上所述,ACI患者血清循環(huán)miR-424表達下降,血清循環(huán)miR-424水平與ACI患者炎癥反應(yīng)因子水平、脂代謝水平有關(guān)miR-424可能成為ACI患者預(yù)后評估的一種潛在的生物靶標(biāo)。

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