右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000

急性酒精中毒，是指在短時間內(nèi)大量飲酒后，乙醇的吸收大于代謝，吸收的乙醇通過血腦屏障致使中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生先興奮隨后抑制，甚至危及生命的狀態(tài)[1-2]。急性酒精中毒的發(fā)生率在大幅增加，不但嚴重損壞大眾健康，亦非常容易產(chǎn)生許多社會問題[3]。因此，尋找安全、有效的中藥解酒制品已日益受到關(guān)注。枳椇子，又可稱為雞距子、萬壽果、酸棗、結(jié)肉籽，是鼠李科植物枳椇的成熟種子。其主要成分為黃酮類、蒽醌類、三萜皂苷類、苯丙素類、二蒽酮類、萘酚類、生物堿類等成分。有抗菌、保肝、解酒、抗腫瘤、抗炎、抗氧化、瀉下之功效。其中黃酮類化合物，主要是黃酮類碳苷化合物可能是枳椇子的重要藥效物質(zhì)[4-5]。 其解酒功能在我國古代就已發(fā)現(xiàn)，藥王孫思邈曾高度評價枳椇子的解酒功能為“園中生枳椇，家中無醉人”。

現(xiàn)代研究表明，枳椇子可能是因為能清除氧自由基和抗脂質(zhì)過氧化，具備護肝、解酒之功效[6]。但對探究枳椇子水提液對胃腸運動的影響來促進解酒的研究較少。因此，本實驗通過探究枳椇子水提液對急性酒精中毒小鼠胃腸運動的影響及枳椇子的解酒原理以期能對其臨床應(yīng)用有一定指導(dǎo)意義。

1 儀器與材料

1.1 實驗動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量范圍20～28 g，右江民族醫(yī)學(xué)院動物實驗中心供應(yīng)，許可證號：SCXK桂2017-0003，小鼠質(zhì)量合格證號：0007556。

1.2 試劑 一氧化氮(NO)試劑盒(批號：A012)、 乙醇脫氫酶(ADH)試劑盒(批號： A083-1)、乙醇試劑盒(批號：E036)均為南京建成生物工程研究所，解酒靈(批號：20170101，江西光達可信醫(yī)藥生物公司)、無水乙醇(批號：20170918，天津市大茂化學(xué)試劑廠)、羥甲基纖維素鈉(批號：20110219，成都市科龍化工試劑廠)

1.3 儀器 日立7600-020E型全自動生化分析儀、722N型分光光度計，低速臺式離心機(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

2 方法

2.1 枳椇子水提液的制備 選枳椇子干品50 g置于500 mL蒸餾水中達8 h，小火煎煮至沸騰后再煎煮1.5 h，第2次添300 mL蒸餾水，小火煎煮至沸騰后再煎煮1 h，聚集兩次煎液于同一器皿，然后過濾，濃縮至2 g/mL，置于冰箱冷藏封口備用，等待用時加蒸餾水配置為濃度2000 g/L、1000 g/L、500 g/L，小鼠給藥體積為0.1 mL/10 g[7]。

2.2 碳末懸液的制備 稱5 g活性碳末與1 g羥甲基纖維素鈉，置其于100 mL水中，轉(zhuǎn)動玻璃棒使它們均勻混合后配成碳末懸液后放置于冰箱冷藏，等待需要用時將溫度恢復(fù)至室內(nèi)溫度[8]。

2.3 動物分組和給藥方法 取小鼠60只，將其自由組合成6組，即正常對照組、模型組、解酒靈組、枳椇子水提液高、中、低劑量組。正常對照組與模型組每天灌與其他組等量體積的蒸餾水，解酒靈組每日依據(jù)1 g/ kg的藥量喂養(yǎng)，枳椇子水提液高劑量組、枳椇子水提液中劑量組、枳椇子水提液低劑量組每天分別按照2000 g/ L、1000 g/ L、500 g/ L的給藥量灌喂，所有小鼠皆按照0.1 mL/10 g的藥量給藥，其給藥方法為灌胃給藥，頻次為1天1次，持續(xù)7 d。

2.4 小鼠急性酒精中毒模型的建立 最后一次灌藥前12 h小鼠停止進食但不停止進水，除了正常對照組的小鼠外，其它組的小鼠在灌喂相應(yīng)藥液完畢之后均灌胃50%酒精，30 min后再以5%碳末懸液0.25 mL/10 g灌胃[8]。

2.5 血生化指標測定 上述操作完成時間達15 min時，摘小鼠眼球采血并離心獲得其上層血清，并根據(jù)說明書上方法來測定其血清NO、血乙醇、乙醇脫氫酶濃度。

2.6 小鼠胃內(nèi)容物殘留率和炭末推進比的測量與計算 采血完畢立即剖腹將胃及小腸取出，先稱胃稱質(zhì)量(胃總質(zhì)量)，用手術(shù)剪沿胃大彎部將胃剪開并排出胃內(nèi)容物，然后沖洗胃中的殘留物將殘留物洗凈并用濾紙吸干多余水分，稱量并記錄胃凈質(zhì)量。計算胃內(nèi)容物殘留率(%)= (胃總質(zhì)量—胃凈質(zhì)量)/半固體米糊質(zhì)量×100% 。根據(jù)胃內(nèi)容物殘留率的數(shù)值大小指標評判胃排空的速度。用直尺量取胃的幽門部到回盲部的長度當做“小腸總長”，將取出的小鼠小腸自然擺成直線平鋪于桌面上并進行測量，用直尺量取胃幽門到炭末前沿的長度當做“炭末推進長度”，并根據(jù)以下式子求炭末推進比：炭末推進比(%)=炭末推進長度(cm)/小腸總長(cm)×100% 。 根據(jù)炭末推進比的數(shù)值大小作為標準評判小腸的推進速度[8]。

2.7 統(tǒng)計學(xué)處理方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0處理，以(x±s)形式表示，計量資料組間比較利用 One-Way ANOVA，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 枳椇子水提液對急性酒精中毒小鼠血清血乙醇、乙醇脫氫酶的影響 由表1可知，與正常對照組相比，模型組的血乙醇值明顯上升(P<0.01)，乙醇脫氫酶值明顯下降(P<0.01)說明了急性酒精中毒小鼠模型創(chuàng)造成功；跟模型組比較，枳椇子水提液高劑量組的血乙醇較低(P<0.05)，乙醇脫氫酶較高(P<0.05)，枳椇子水提液中劑量組、枳椇子水提液低劑量組、解酒靈組的血乙醇濃度呈現(xiàn)下降趨勢，乙醇脫氫酶水平呈現(xiàn)上升趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，證明枳椇子水提液能抑制乙醇吸收，降低血液中乙醇的水平，增加血液中乙醇脫氫酶水平，且枳椇子水提液高劑量組效果優(yōu)于枳椇子水提液低劑量組、中劑量及解酒靈組。

3.2 枳椇子水提液對急性酒精中毒小鼠血清 NO濃度的影響 由表1可知，與正常對照組相比，模型組的 NO值稍高但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與模型組相比，低劑量、中劑量、高劑量、解酒靈組的 NO值均升高(P<0.05)，說明枳椇子水提液、解酒靈跟 NO相關(guān)。

表1 枳椇子水提液對急性酒精中毒小鼠血乙醇、乙醇脫氫酶、一氧化氮的影響

3.3 枳椇子水提液對急性酒精中毒小鼠胃內(nèi)容物殘留率及炭墨推進比的影響 由表2可知，與正常對照組相比，模型組的胃內(nèi)容物殘留率上升(P<0.01)，炭墨推進比下降(P<0.05)，表明了急性酒精中毒后小鼠胃排空速度、小腸推進均有減慢；與模型組相比，中劑量組、高劑量組的胃內(nèi)容物殘留率均下降(P<0.01)，碳末推進比均上升(P<0.01，P<0.05)，解酒靈組的胃內(nèi)容物殘留率呈下降趨勢，碳末推進比呈升高趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明中、高劑量組具備加快急性酒精中毒小鼠胃排空及加快小腸推進的功用。

表2 枳椇子水提液對急性酒精中毒小鼠胃內(nèi)容物殘留率、碳末推進比的影響

4 討論

醉酒的發(fā)展主要取決于胃腸吸收和肝臟代謝速度，當胃腸吸收大于肝臟代謝能力時，體內(nèi)乙醇會隨著血液循環(huán)進入大腦，影響大腦皮質(zhì)，讓神經(jīng)存在短暫的興奮而后受到抑制[9]。酒精在胃腸道吸收后，在乙醇脫氫酶催化下轉(zhuǎn)化成乙醛，乙醛被乙醛脫氫酶氧化為乙酸后以乙酰輔酶 A的存在形式進入到三羧酸循環(huán)，形成二氧化碳和水[10]，若乙醛不能快速形成二氧化碳和水排出體外，則會在體內(nèi)組織和臟器聚積。乙醇的首過代謝(FPM)，指個體飲酒后，一部分乙醇在尚未進入肝臟前在消化道內(nèi)產(chǎn)生被氧化分解的作用[11]，當乙醇經(jīng)口進入人體后，首先經(jīng)胃組織吸收，胃黏膜上含有乙醇脫氫酶(ADH)和乙醛脫氫酶主要氧化分解乙醇的酶類，可在乙醇進入血液和肝臟前優(yōu)先將其進行代謝分解，從而減少乙醇進入血液的含量，避免大量乙醇涌入肝臟超過肝臟代謝能力引起乙醛等有害物質(zhì)蓄積，減輕肝臟負擔(dān)[9]。ADH是人體內(nèi)重要的代謝酶，有多數(shù)學(xué)者以為胃ADH在FPM中起重要作用。FPM可以通過降低機體對乙醇的生物利用度，從而減緩其在體內(nèi)代謝過程中給肝臟、腦等器官造成的損傷。

通過枳椇子水提液治療后高劑量組的血乙醇水平較低(P<0.05)，乙醇脫氫酶水平較高(P<0.05)，枳椇子水提液中劑量組、枳椇子水提液低劑量組、解酒靈組的血乙醇濃度呈現(xiàn)下降趨勢，乙醇脫氫酶水平呈現(xiàn)上升趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，高劑量組效果優(yōu)于低、中劑量及解酒靈組。提示枳椇子可能通過提高血液中乙醇脫氫酶水平，此實驗結(jié)果與宋莎莎等報道的結(jié)果一致[6]。增強乙醇在胃腸道的 FPM，抑制乙醇吸收，達到降低血中乙醇的濃度的目的，實驗結(jié)果與王潔等報道的結(jié)果一致[1]。而解酒靈的解酒原理是使乙醇的吸收過程被消化道所阻斷，增強它的 FPM作用，同時降低它在血液中的含量，以減弱它對機體的神經(jīng)、消化等系統(tǒng)的損傷[12]。

NO能促進小腸血管平滑肌舒張，生理狀況下，70%～80%小腸黏膜血流量由小腸供血，小腸黏膜血流量能增強小腸運動， NO值增加使血流量增加從而提高小腸的新陳代謝和物質(zhì)交換，及時為小腸提供收縮運動中所需要的營養(yǎng)物質(zhì)和能量物質(zhì)，并且還能為小腸清除代謝產(chǎn)物，進而增強小腸運動功能[13]。通過治療后低劑量組、高劑量組、解酒靈組的 NO水平都上升(P<0.05)， 提示枳椇子、解酒靈可通過提高 NO水平來舒張小腸血管平滑肌，增加小腸黏膜血流量，提高小腸的新陳代謝和物質(zhì)交換，從而增強小腸運動功能，使進入血液循環(huán)的乙醇減少。

胃排空速度快慢與胃運動的強弱有關(guān)，而又可通過計算胃內(nèi)容物殘留率來評判胃運動的強弱，胃內(nèi)容物殘留率可以作為評價胃排空速度快慢的指標，其數(shù)值小則表明胃排空速度快。食物在小腸推進的快慢與小腸運動的強弱有關(guān)，可以通過測量炭墨推進比間接反映小腸運動的速度，炭墨推進比越高，小腸運動越強。與正常對照組相比，模型組的胃內(nèi)容物殘留率上升(P<0.01)，炭墨推進比下降(P<0.05)，說明急性酒精中毒后小鼠胃排空速度、小腸推進均減慢，通過枳椇子水提液治療后中劑量組、高劑量組的胃內(nèi)容物殘留率皆降低(P<0.01)，碳末推進比均升高(P<0.01，P<0.05)，提示枳椇子有拮抗乙醇抑制胃腸運動的作用，又可加快腸運動和胃運動來促進乙醇的胃腸排空，使進入血液循環(huán)的乙醇減少致使起到解酒的功效。有研究報道[4，14]，枳椇皂苷能促進腸管蠕動、有利尿作用，蒽醌類衍生物中的大黃素有瀉下作用，是否與此有關(guān)需進一步探究。

綜上所述，枳椇子水提液有促進胃腸運動及解酒作用，其解酒機制可能與乙醇在胃腸道的首過代謝、促進腸胃運動及NO水平有關(guān)。