賀晨艷, 龔軍俠, 盧新蘭, 馬 維, 張?zhí)煜?/p>

(陜西省結(jié)核病防治院 內(nèi)科, 陜西 西安, 710061)

現(xiàn)階段臨床上肺結(jié)核的生物學(xué)指標(biāo)包括炎性指標(biāo)、趨化蛋白等，但這些指標(biāo)無法很好地區(qū)分活動性肺結(jié)核及潛伏感染患者，影像學(xué)檢測也缺乏典型的特征，因而需要尋求一種特異性及敏感性較高的生物學(xué)指標(biāo)[1-2]。微小RNAs(miRNA)是機體代謝中的活性RNA分子，與機體的代謝、免疫、內(nèi)分泌等系統(tǒng)密切相關(guān)，且與腫瘤、心血管事件的發(fā)生也有一定關(guān)聯(lián)。本研究發(fā)現(xiàn)miR-146、miR-147在肺結(jié)核患者中呈高表達態(tài)，且與肺結(jié)核患者的病變程度存在相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年1月本院收治的51例肺結(jié)核患者為結(jié)核組，同期本院收治的49例其他肺部疾病患者為疾病對照組，以及同期本院進行健康體檢的60例人群為健康對照組。結(jié)核組中男28例，女23例，年齡35～64歲，平均(51.08±1.56)歲; 疾病對照組中男26例，女23例，年齡33～63歲，平均(50.98±2.15)歲; 健康對照組中男33例，女27例，年齡36～59歲，平均(49.29±3.26)歲。3組性別、年齡等一般資料對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn): ① 符合結(jié)核病診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]; ② 患者意識清晰，能夠配合進行調(diào)研; ③ 小學(xué)及以上文化; ④ 患者及其家屬對本次調(diào)研過程、方法、原理清楚明白，并簽署知情同意書; ⑤ 經(jīng)醫(yī)院倫理會批準(zhǔn)實施本次調(diào)研; ⑥ 影像學(xué)檢查顯示肺部存在滲出性病變或纖維空洞。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 合并精神障礙者; ② 合并其他器質(zhì)性疾病，如冠心病、腎衰竭者; ③ 合并意識障礙者; ④ 合并自身免疫系統(tǒng)疾病者; ⑤ 近期接受激素類藥物或免疫抑制劑治療者。

1.2 方法

測定結(jié)核組、疾病對照組及健康對照組患者入組時miR-146、miR-147的表達程度，將結(jié)核組按照結(jié)核病變程度分為初治型肺結(jié)核及難治型肺結(jié)核，比較2組miR-146、miR-147的表達程度，對結(jié)核組患者實施治療，對比不同治療時期結(jié)核組患者miR-146、miR-147的表達程度。

1.3 觀察指標(biāo)

采集結(jié)核組、疾病對照組及健康對照組患者干預(yù)前空腹靜脈血5 mL，使用離心機離心后取上層清液，使用miRNA提取試劑盒提取sRNA, 而后使用核算濃度檢測儀檢測其純度與濃度，檢測完畢后置于80 ℃下保存，待樣本采集完畢后統(tǒng)一檢測, miR-146、miR-147表達采用熒光定量PCR法進行檢測，對3組患者miR-146、miR-147的表達程度進行比較。

使用結(jié)核菌特異性酶聯(lián)免疫斑點試驗及影像學(xué)檢測結(jié)果將結(jié)核組患者分為初治型肺結(jié)核及難治型肺結(jié)核，初治型肺結(jié)核胸片無明顯異常，難治型肺結(jié)核胸片可見明顯結(jié)核病灶或肺纖維化，對比2組患者miR-146、miR-147的表達程度。

參照《中國結(jié)核病防治規(guī)劃實施工作指南(2008年版)》對結(jié)核組患者實施治療，藥物選擇為利福平、異煙肼、乙胺丁醇、吡嗪酰胺，服藥均為1次/d，連續(xù)服用4個月，檢測治療前、治療1個月及治療2個月時結(jié)核組患者miR-146、miR-147表達程度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 干預(yù)前不同組別患者miR-146、miR-147的表達程度比較

治療前3組miR-146、miR-147的表達程度為結(jié)核組高于疾病對照組，疾病對照組高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 見表1。

表1 3組患者干預(yù)前miR-146、miR-147表達程度對比

與健康對照組相比, *P<0.05; 與結(jié)核組相比, #P<0.05。

2.2 不同病變程度結(jié)核患者miR-146、miR-147表達程度比較

難治型肺結(jié)核患者miR-146、miR-147表達程度依次為(2.63±0.31)、(2.97±0.38), 高于初治型肺結(jié)核患者(1.68±0.51)、(1.79±0.29), 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 不同治療時期結(jié)核組患者miR-146、miR-147表達程度

隨著治療時間的推進，結(jié)核患者miR-146、miR-147表達程度呈逐漸下降趨勢，以治療前、治療1個月及治療2個月作為觀察點，各觀察點miR-146、miR-147表達程度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 見表2。

表2 不同治療時期結(jié)核組患者miR-146及miR-147表達程度(n=50)

與治療前相比, *P<0.05; 與治療1個月相比, #P<0.05。

2.4 ROC曲線分析

ROC曲線分析顯示，不同時間點miR-146、miR-147對肺結(jié)核具有較好的診斷意義，敏感度和特異度均較高，見表3。

表3 不同時間點miR-146及miR-147的ROC分析

3 討 論

結(jié)核病的主要臨床癥狀包括低熱、盜汗、乏力、消瘦等，嚴(yán)重者可出現(xiàn)咯血、呼吸困難，早期的鑒別與診斷對結(jié)核病的治療具有重要的意義，能夠顯著改善患者預(yù)后，縮短其病程[4]。傳統(tǒng)肺結(jié)核診斷技術(shù)主要為炎性因子檢測、結(jié)核菌素試驗、影像學(xué)檢查等，但上述方法均缺乏特異性，敏感性也不高。

MicroRNA是一種轉(zhuǎn)錄后有22個氨基酸的小分子物質(zhì), 2001年Ambros[5]研究發(fā)現(xiàn)miRNA能夠調(diào)控線蟲幼蟲發(fā)育時序，數(shù)年后其他學(xué)者的研究指出miRNA能夠通過影響RNA與蛋白質(zhì)的結(jié)合，從而對個體活動起到負調(diào)控作用?，F(xiàn)階段已有約1 500個人類miRNA被發(fā)現(xiàn)，其中30%以上的基因能夠通過調(diào)控基因表達來參與個體的生長、免疫、發(fā)育等過程，而miRNA在肺結(jié)核發(fā)病機制中的作用已得到證實。李奕平等[6]研究指出, miR-146基因包括miR-146a及miR-146b兩類亞型，在各類免疫調(diào)節(jié)細胞中呈高表達態(tài)，能夠促進Treg細胞的增殖和分化，能夠調(diào)節(jié)個體的免疫反應(yīng)。祝源[7]研究也發(fā)現(xiàn), miR-146高表達的大鼠腎臟損傷會大于低表達大鼠。Cardwell等[8]研究指出, miR-147在冠狀動脈病變患者中呈高表達，柳家榮等[9]研究發(fā)現(xiàn), miR-147能夠靶向調(diào)控卵巢癌細胞的增殖與凋亡，這些都提示miR-146、miR-147在調(diào)節(jié)個體免疫系統(tǒng)、調(diào)控細胞增殖分化中具有重要作用。

本研究結(jié)果顯示，與疾病對照組及健康對照組比較，結(jié)核組患者miR-146、miR-147呈高表達，且難治型肺結(jié)核患者個體miR-146、miR-147表達強度大于初治型肺結(jié)核患者，考慮原因為miR-146、miR-147能夠通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄后蛋白水平來調(diào)控靶基因功能，上述miRNA廣泛參與細胞的分化、增殖、凋亡、血管生成中，與個體免疫系統(tǒng)存在密切聯(lián)系。劉守江等[10]研究也指出, miR-146、miR-147能夠通過抑制T細胞的增殖來調(diào)節(jié)機體的抗結(jié)核免疫反應(yīng)，因而在結(jié)核患者中miR-146、miR-147呈現(xiàn)高表達。本研究還發(fā)現(xiàn)miR-146、miR-147在診斷肺結(jié)核中具有較高的特異性和敏感度，分析其原因為miR-146、miR-147與個體炎性反應(yīng)關(guān)系密切，能夠通過信號通路來進行負向反饋，調(diào)節(jié)結(jié)核病患者的免疫應(yīng)答，不同病變時期的炎性反應(yīng)強度不同，因而檢測miR-146、miR-147表達也有顯著差異。