胡金梅

梔子收載于歷版《中華人民共和國(guó)藥典》中，為茜草科植物梔子Gardenia jasminoisesEllis的干燥成熟果實(shí)。梔子性寒味苦，具有保肝、抗腦缺血損傷、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂、降血糖、抗炎作用等多種藥理作用[1]。在2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》中焦梔子的制法描述為：“取梔子，或碾碎，照清炒法（通則0213）用中火炒至表面焦褐色或焦黑色，果皮內(nèi)表面和種子表面為黃棕色或棕褐色，取出，放涼?！苯箺d子含梔子苷不得少于1.0%。本研究參照藥典炮制工藝，選取200 ℃、180 ℃、160 ℃做為炮制火力的參考溫度，炒制時(shí)間以梔子炒到顏色表面顏色焦褐色，6分鐘開(kāi)始計(jì)時(shí)，分別以6、8、10 min做參考時(shí)間，研究得出能量化的炮制工藝。本研究主要為了明確焦梔子的炮制工藝參數(shù)，并驗(yàn)證其止血效果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀（Waters 2998 DAD檢測(cè)器，Waters Empower工作站）；CM-5分光測(cè)色計(jì)(日本KONICA MINOLTA CM-5)； CPA225D型電子天平（十萬(wàn)分之一，德國(guó)Sartorius公司）；BS224S型電子天平(萬(wàn)分之一，德國(guó)Sartorius公司)；DHG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)； SB-D220型超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 試藥

梔子藥材，購(gòu)自重慶市藥材市場(chǎng)；梔子苷對(duì)照品（批號(hào)110749-201115，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈、甲醇均為色譜純，購(gòu)自美國(guó)TEDIA公司；其他試劑均為分析純；水為三級(jí)水。

2 梔子苷含量測(cè)定方法學(xué)研究

2.1 色譜條件

色譜柱為Boston Symmetrix ODS-RC18 （4.6×250 mm, 5 μm）；流動(dòng)相為乙睛-水=15:85；流速：1.0 mL·min-1；柱溫:30 ℃；進(jìn)樣體積：10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm。

圖1 對(duì)照品、供試品、空白溶液HPLC圖

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取梔子苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含梔子苷5.6 mg的對(duì)照品溶液，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約0.1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系的考察

精密吸取上述對(duì)照品溶液配制成系列濃度對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以梔子苷的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)(X)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行回歸，得回歸方程為Y = 1.6×106 X+15399（R2= 0.9999），結(jié)果表明，梔子苷在0.168～3.36 μg范圍內(nèi)峰面積與含量線(xiàn)性關(guān)系良好。

圖2 梔子苷標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果，梔子苷量的RSD為0.33%，表明儀器具有較好的精密度。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取梔子藥材粉末約0.5 g，共6份，按照擬定的方法制備供試品溶液并測(cè)定，計(jì)算梔子苷的量，結(jié)果梔子苷量的RSD為2.01%，表明本法較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算梔子苷的量，結(jié)果對(duì)照品溶液和供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的梔子樣品溶液6份，每份0.5 g，精密加入一定量的梔子苷對(duì)照品，按供試品制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄梔子苷峰面積，計(jì)算回收率和RSD，梔子苷的平均回收率為99.42%，RSD為1.26%，表明該方法較好。

3 焦梔子炮制工藝研究

3.1 梔子炒制工藝的單因素考察

3.1.1 炒制溫度的考察 取凈梔子，烘干，稱(chēng)取100 g，置熱鍋中，分別用200 ℃、180 ℃、160 ℃炒制6 min，取出，及時(shí)攤晾。以梔子苷為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察炒制溫度對(duì)焦梔子炮制的影響。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 含量測(cè)定結(jié)果

結(jié)果表明，炒制溫度為180 ℃時(shí)，梔子苷含量較高，因此選定炒制溫度為180 ℃。

3.1.2 炒制時(shí)間的考察 取凈梔子，烘干，稱(chēng)取100g，置180 ℃鍋中，觀其外觀，6分鐘左右有焦斑出現(xiàn)，故分別炒制6、8、10 min，取出，及時(shí)攤晾。以梔子苷為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察炒制時(shí)間對(duì)焦梔子炮制的影響。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果

可知，炒制時(shí)間為6 min時(shí)，梔子苷含量較高，隨著時(shí)間的增加，梔子苷含量有所降低，故確定炒制時(shí)間為6 min。

3.1.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 為考察其工藝的穩(wěn)定性，取凈梔子，烘干，稱(chēng)取100 g，置180 ℃鍋中，重復(fù)三次，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 含量測(cè)定結(jié)果

結(jié)果表明，三次驗(yàn)證試驗(yàn)梔子苷含量RSD為1.47%，表明該工藝較穩(wěn)定、重現(xiàn)性較好。

3.2 焦梔子顏色的測(cè)量

采用分光測(cè)色計(jì)，對(duì)驗(yàn)證試驗(yàn)的三批焦梔子的顏色性狀進(jìn)行測(cè)定，若分別對(duì)果皮的內(nèi)外表面及種子表面分別進(jìn)行測(cè)定，數(shù)據(jù)多，操作繁瑣，標(biāo)準(zhǔn)不易統(tǒng)一，而且種子的內(nèi)部顏色也不能直接測(cè)定，故考慮將其粉碎，過(guò)藥典三號(hào)篩，混合均勻，測(cè)定色度值，每批樣品取5 g，重復(fù)測(cè)定5次，取平均值，以均數(shù)為最終測(cè)定結(jié)果，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 顏色測(cè)定結(jié)果

由表2-15可知，三批焦梔子顏色色度值的RSD小于3%，表明色度值數(shù)據(jù)穩(wěn)定性良好。

4 焦梔子的止血凝血藥效驗(yàn)證[2,3]

4.1 樣品的制備

取梔子及焦梔子，加水煎煮兩次，每次0.5 h，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至含生藥1 g/mL，即得。

4.2 分組與給藥

將體重為18-22 g的小鼠，隨機(jī)分為空白組，生品組，炮制組三組，每組10只，雌雄各半，每天灌胃給藥0.2 mL/10 g，每天1次，連續(xù)給藥5 d，空白組給予同體積的生理鹽水。

4.3 出血及凝血時(shí)間的測(cè)定

于第五天給藥1 h后，剪去鼠尾3 mm，從血液流出時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，并于60 s后開(kāi)始，每隔10 s用濾紙輕輕拭血1次，直至不再流出血為止，小鼠的出血時(shí)間即為開(kāi)始出血至停止出血的時(shí)間；血液流出時(shí)計(jì)時(shí)的同時(shí)，用毛細(xì)管收集血液并平放于桌面上，從收集時(shí)計(jì)時(shí)，每隔30秒折斷毛細(xì)管并緩慢拉開(kāi)，觀察折斷處是否有血凝絲出現(xiàn)，出現(xiàn)血凝絲的時(shí)間即為凝血時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 各組小鼠出血時(shí)間與凝血時(shí)間比較（x±s，n=10）

結(jié)果表明，生品梔子與焦梔子均能縮短小鼠的出血時(shí)間和凝血時(shí)間。

5 討論

梔子是臨床常用中藥，收載于歷版《中華人民共和國(guó)藥典》中，其制法在2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》中描述為：“取梔子，或碾碎，照清炒法（通則0213）用中火炒至表面焦褐色或焦黑色，果皮內(nèi)表面和種子表面為黃棕色或棕褐色，取出，放涼。”此描述可以看出，其工藝參數(shù)多為感官指標(biāo)，無(wú)具體的量化指標(biāo)，因而不同的人炮制結(jié)果不同，因而對(duì)其炮制工藝進(jìn)行量化是很有必要的。用化學(xué)手段對(duì)其工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)合藥理效果對(duì)其驗(yàn)證，更能體現(xiàn)焦梔子炮制的合理性。

目前很多中藥炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)都描述為“參照藥材”，這樣體現(xiàn)不出來(lái)炮制品與生品的差異，因而建議其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定需要根據(jù)炮制品的有效成分等進(jìn)行控制。