陳玉艷，于家豐

（遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，遼寧 沈陽 110016）

辣椒是生活中常見的食品、香辛料和調(diào)味品。辣椒素又稱辣椒堿，是辣椒的活性成分，是辣椒的次級代謝產(chǎn)物，對哺乳動物包括人類都有刺激性并可在口腔中產(chǎn)生灼燒感，不僅可作為食品添加劑，在醫(yī)藥保健、海洋防污及電線電纜的防蟻防鼠等方面同樣具有著廣闊的應(yīng)用。從辣椒中提取分離出的辣椒堿作為食品加工過程中的添加劑，有利于辣度的控制和辣椒堿的充分吸收利用。另外，現(xiàn)代研究表明，辣椒堿具有消炎、鎮(zhèn)痛、麻醉和戒毒等方面的功效，還可抑制腫瘤的發(fā)生，對皮膚病和減肥擁有特殊功效[1-3]。辣椒素作為驅(qū)避劑，因其強(qiáng)烈辛辣味具有較強(qiáng)驅(qū)趕作用，并且不殺死海洋生物，具有明顯的生態(tài)效益。二氫辣椒素具有殺菌消毒的作用，可作為食品防腐劑，還可促進(jìn)胃腸蠕動及胃液分泌，幫助消化。

辣椒素類物質(zhì)是一種混合物，目前己經(jīng)確定有19種成分，其中辣椒素、二氫辣椒素等5種組分的含量最高，之和已占總量99%左右，5種化合物中又以辣椒素（占總量69%）、二氫辣椒素（占總量22%）含量高，二者之和占總量91%，降二氫辣椒素占到7%[4]。

對辣椒素類似物檢測方法有多種，包括化學(xué)分析方法和儀器分析方法，前者有凱氏定氮法[5]，后者有紫外可見光光度法[6]、三維熒光光譜法[7]、高效液相色譜法。高效液相色譜法適用于復(fù)雜成分混合物的分離、定性與定量，效果較好，根據(jù)辣椒素類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和光吸收特性，一般采用反相化學(xué)鍵合相，紫外檢測器檢測。該方法是目前國內(nèi)外食品或蔬菜行業(yè)在辣椒素類物質(zhì)測定研究中使用較多的方法。它具有快速、靈敏、準(zhǔn)確度高、操作簡單的優(yōu)點(diǎn)，能同時(shí)分離、測定辣椒素類物質(zhì)的主要辣味成分，但在飼料添加劑領(lǐng)域的相關(guān)檢測方法研究未見報(bào)道。

食品中辣椒素的測定方法提取液選的是甲醇-四氫呋喃溶液[8]，流動相也是甲醇-水溶液[9-11]，甲醇、四氫呋喃試劑提取試劑較貴，甲醇對檢測人員存在危害。本研究發(fā)現(xiàn)乙醇提取、乙腈-水流動相分離效果良好，適用于基質(zhì)復(fù)雜的飼料添加劑中辣椒素類似物的檢測，實(shí)際應(yīng)用中更為適合。

1 材料與方法

1.1 試劑和溶液乙醇：色譜純。國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈：色譜純。Fisher公司；試驗(yàn)用水；辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品：含量99%；二氫辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品：含量99%；降二氫辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品：含量99%。

1.2 儀器設(shè)備Waters高效液相色譜儀2695：配雙通道2998紫外檢測器，美國Waters公司；Waters C8色譜柱：粒度5 μm，長度150㎜，內(nèi)徑3.9㎜，美國Waters公司；AT200分析天平；回流冷凝器；微孔濾膜：0.45 μm。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：C8柱（5 μm，150 mm×3.9 mm）；流動相：乙腈-水（40:60）；流速：1.00 mL/min；檢測波長：280 nm，色譜掃描范圍210～400 nm。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度0.15 mg/mL。準(zhǔn)確稱量75 mg辣椒素、二氫辣椒素、降二氫辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品分別至500 mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度并混勻。用一次性注射器吸取適量過0.45 μm濾膜于棕色液相小瓶中，上機(jī)測定。圖譜結(jié)果如圖1～4。

圖1 辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.1Chromatogram of capsaicin

圖2 二氫辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.2 Chromatogram of dihydrocapsaicin

圖3 降二氫辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.3 Chromatogram of noradihydrocapsaicin

圖4 對照品色譜圖（色譜峰依次是降二氫辣椒素、辣椒素和二氫辣椒素）Fig.4 Chromatogram of noradihydrocapsaicin,capsaicin,dihydrocapsaicin

從圖1～4可以看出，辣椒素的保留時(shí)間在10 min左右，降二氫辣椒素的保留時(shí)間在9 min左右，二氫辣椒素的保留時(shí)間在14 min左右。由此可判斷STD標(biāo)準(zhǔn)對照品圖譜3個(gè)色譜峰依次是降二氫辣椒素、辣椒素和二氫辣椒素。

1.3.3 樣品提取 本方法研究的飼料添加劑基質(zhì)有辣椒酊、辣椒粉、氫化棕櫚油、葡萄糖等。準(zhǔn)確稱量25 g飼料添加劑樣品樣品加入到500 mL蒸餾燒瓶中，向其中添加200 mL乙醇和少許沸石，按照從上到下、從左到右安裝裝置，燒瓶連接回流冷凝器，60℃下緩慢回流4 h，冷卻。提取液用0.45 μm微孔濾膜過濾至液相小瓶，上機(jī)測定。三批次樣品，每批次雙平行處理，結(jié)果見表1。

2 結(jié)果與分析

表1 不同樣品中辣椒素類似物的色譜峰面積Table 1 Chromatographic peak area of capsaicin analogues in different samples

2.1 加標(biāo)回收試驗(yàn)按照上述樣品提取、色譜分析條件進(jìn)行分析，分別取同一飼料添加劑樣品，添加0.94、1.88、3.76 mg/g 3個(gè)質(zhì)量濃度的辣椒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 飼料添加劑樣品中的降二氫辣椒素、辣椒素、二氫辣椒素回收率測定結(jié)果Table 2Determination results of recovery rates of no radihydroca psaicin、capsaicin、dihydroca psaicin

由表2可知，降二氫辣椒素、辣椒素、二氫辣椒素的加標(biāo)回收率分別為91.39%～102.78%、85.91%～101.96%、89.16%～96.86%，說明本方法準(zhǔn)確度高，方法有效可行。

2.2 精密度試驗(yàn)取含量為0.15 mg/mL的3種辣椒素類似物的STD標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液進(jìn)行檢測，進(jìn)樣10 μL，重復(fù)測試6次，通過對色譜峰面積的比較來反映儀器精密度。測定降二氫辣椒素、辣椒素和二氫辣椒素的RSD分別為0.75%、0.92%和0.38%。表明測試儀器在該色譜條件下有良好的精密度。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批次飼料添加劑樣品，按上述方法提取6個(gè)平行樣品進(jìn)行測定。降二氫辣椒素RSD=1.93%，辣椒素RSD=1.18%，二氫辣椒素RSD=1.61%，表明本方法重復(fù)性良好。

3 討論和結(jié)論

本研究建立了飼料添加劑中辣椒素、二氫辣椒素、降二氫辣椒素的提取技術(shù)和高效液相色譜檢測方法。在此檢測條件下，最后出峰的二氫辣椒素保留時(shí)間大概在14.6 min，與辣椒及辣椒制品中辣椒素物質(zhì)測定的相關(guān)方法比較[11-12]，保留時(shí)間大概縮短6～11 min，在大批量的樣品分析中能節(jié)省大量的試劑成本和時(shí)間成本，且可以規(guī)避甲醇-水流動相黏度大、傷柱子、峰性差等缺點(diǎn)，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

降二氫辣椒素、辣椒素、二氫辣椒素的加標(biāo)回收率分別平均為97.52%、93.72%、93.99%，能滿足分析要求，精密度RSD＜1%，顯示儀器精密度良好，測定結(jié)果滿意，重復(fù)性試驗(yàn)RSD＜2%，再現(xiàn)性結(jié)果滿意。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，樣品中含量最多的是辣椒素，二氫辣椒素次之，降二氫辣椒素最少，與已知理論相符。所建立的分析方法樣品前處理提取試劑及流動相對試驗(yàn)人員人身健康有幫助，方法簡便快捷，易于操作，高效準(zhǔn)確，能夠很好地檢測出復(fù)雜基質(zhì)飼料添加劑樣品中3種辣椒素物質(zhì)的含量，適合批量檢測，值得推廣。在本檢測方法的基礎(chǔ)上，可以進(jìn)一步研究色譜分離方法，可以考慮梯度洗脫，以便更高通量地檢測更多種辣椒堿類活性物質(zhì)。