駱雨欣，閻 俊，季鳳艷 ，焉智偉，單文琪，李金鳳，張師源，李敬雙?

（1.錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧 錦州 121001；2.遼寧省瓦房店市李官動物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 瓦房店 116300；3.遼寧省葫蘆島市建昌縣黑山科動物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 建昌 125300）

雞群生產(chǎn)性能的高低主要取決于傳染病尤其是病毒性傳染病的防控效果，目前病毒性傳染病的控制主要采取疫苗防疫的方法，而免疫失敗時有發(fā)生，免疫增強劑是提高免疫效果的有效措施?；瘜W(xué)免疫增強劑藥物殘留量大，對食品衛(wèi)生造成危害，易造成生產(chǎn)性能降低[1]。中藥免疫增強劑藥物殘留量小，安全性好，能延長免疫時間，有的還能提高生產(chǎn)性能。特別是復(fù)方中藥免疫增強劑通過藥物配伍藥效更佳，越來越受到科研人員的重視[2]。

紫錐菊、黃芪、銀杏、金銀花和甘草都是我國傳統(tǒng)的中藥，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)臨床。紫錐菊主要含有多酚類（主要包括菊苣酸、綠原酸、咖啡酸和紫錐菊皂甙）、黃酮類、多糖類和揮發(fā)油等，具有抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化和提高免疫力等功效[3]。黃芪主要含有黃芪多糖、黃酮和三萜皂甙類等，具有增強免疫、抗菌、降血壓、益氣和活血等功效[4]。銀杏主要含有銀杏黃酮、萜內(nèi)酯、兒茶素和多酚類等，具有增強免疫功能、抗菌、消炎、抗病毒、改善心血管和降血脂等功效[5]。金銀花主要含有綠原酸類、三萜皂苷類、黃酮類和揮發(fā)油等，具有提高免疫力、抗菌、清熱解毒、保肝利膽和降血脂等功效[6]。甘草主要含有三萜類、黃酮類和多糖類等，具有增強免疫、抗菌、抗病毒和抗過敏等功效[7]。我國是世界上研究甘草最早的國家，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載，稱為“中藥之王”[8]。本研究按照中醫(yī)和中獸醫(yī)理論，辨證施治的原則，依據(jù)紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草的性能與功效，采用紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草提取物（簡稱紫黃銀金甘）組方，探討紫黃銀金甘組方對雞的免疫功能和生產(chǎn)性能的影響，為復(fù)方中藥的開發(fā)和利用提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物1日齡海蘭褐公雞雛，購自錦州醫(yī)科大學(xué)實習(xí)農(nóng)場。

1.1.2 飼料雛雞配合飼料購自大成農(nóng)技（葫蘆島）有限公司。

1.1.3 疫苗和試劑雞新城疫活疫苗（La sota株）購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所（批號201702）；肝素抗凝管購自南京奧多福尼生物科技有限公司（批號20170422）；雞新城疫病毒血凝抑制試驗抗原購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所（批號201703）。

1.1.4 試驗藥品紫錐菊提取物主要成分為紫錐菊多酚（菊苣算、綠原酸、咖啡酸和紫錐菊皂甙），總酚含量4%；黃芪提取物（批號為RL170316）主要成分為黃芪多糖，總含量90%（批號為RL170401）；銀杏葉提取物主要成分為萜內(nèi)酯類和黃酮類，黃酮含量24%～26%，萜內(nèi)酯含量8%～10%（批號為RL170410）；金銀花提取物主要成分為綠原酸，總含量30%（批號為RL170415）；甘草提取物主要成分為甘草甜素、后幕比檀素、槲皮素、刺芒柄花素、甘草甙、甘草類黃酮和甘草酸，總含量30%（批號為RL170418）。均購自西安瑞林生物科技有限公司。左旋咪唑購自廣東華南藥業(yè)集團有限公司（批號為201702）。

1.2 方法

1.2.1 紫黃銀金甘藥液的制備 紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草提取物粉劑均為水溶性。按質(zhì)量份數(shù)，將紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草提取物粉劑混合成紫黃銀金甘粉劑（紫錐菊、黃芪、銀杏葉、金銀花和甘草提取物粉劑分別占40%、20%、20%、10%和10%），分別取紫黃銀金甘粉劑20、40和80 g加自來水稀釋至1 L，即為20、40和80 g/L紫黃銀金甘藥液[9-10]。

1.2.2 試驗分組與飼養(yǎng)方法利用1日齡海蘭褐公雞雛，設(shè)20、40和80 g/L紫黃銀金甘組、空白對照組和陽性對照組，每組60只。自由采食、飲水。1日齡開始，在20、40和80 g/L紫黃銀金甘組飲水中加入紫黃銀金甘（分別按20、40和80 g/L加入紫黃銀金甘），在陽性對照組的飲水中加入左旋咪唑（按0.05 g/L加入左旋咪唑），連喂28 d。7日齡所有雞用雞新城疫活疫苗免疫，操作與用量參考疫苗說明書進行。

1.2.3 紫黃銀金甘對NDV抗體效價的影響

1.2.3.1 分離血清 在21、28、35和42日齡，不同濃度中藥組、空白對照組和陽性對照組分別隨機抽取20只雞，翅靜脈采血分離血清，2 000 r/min 4℃離心5 min。

1.2.3.2 1%雞紅細(xì)胞懸液制備 用成年未進行新城疫疫苗免疫的公雞，翅靜脈采血20 mL，加入肝素抗凝管中，2 000 r/min離心10 min，棄上清，加100 mL生理鹽水洗滌血細(xì)胞，2 000 r/min 4℃離心10 min，棄上清，反復(fù)3次，至上清液透明，收集沉淀的紅細(xì)胞用生理鹽水配制成1%的懸液。

1.2.3.3 血凝和血凝抑制試驗檢測NDV抗體效價按照姚火春[11]試驗方法操作，在96孔“V”形微量反應(yīng)板上進行。

1.2.4 紫黃銀金甘對雞體重的影響 于7、14、21、28、35、42和49日齡，不同濃度中藥組、空白對照組和陽性對照組每組分別隨機抽取16只雞，稱量體重。

1.2.5 紫黃銀金甘對料肉比的影響 不同濃度中藥組、空白對照組和陽性對照組每組設(shè)3個小組，每小組10只。在7、14、21、28、35、42和49日齡，每小組稱取消耗飼料量和雞重量，料肉比=消耗飼料重（kg）/雞體重（kg）。

1.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用統(tǒng)計軟件SPSS 17.0進行一維方差分析組間差異顯著（P＜0.05）和極顯著（P＜0.01）。用相同字母表示差異無統(tǒng)計學(xué)意義的各組，用不同字母表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義的各組；字母A表示均值最大組，B、C、D按大小順序分別表示有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）的其他各組，用字母a表示均值最大組，b、c、d、e按大小順序分別表示有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）的其他各組。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫黃銀金甘對N N D D V V抗體效價的影響 紫黃銀金甘對NDV抗體效價的影響見表1。

陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組與空白對照組比較：21日齡和28日齡，陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組NDV抗體效價均極顯著（P＜0.01）高于空白對照組。35日齡和42日齡，陽性對照組NDV抗體效價顯著（P＜0.05）高于空白對照組，紫黃銀金甘各濃度組NDV抗體效價均極顯著（P＜0.01）高于空白對照組。表明在刺激NDV抗體產(chǎn)生上紫黃銀金甘具有促進作用。

表1 紫黃銀金甘對NDV抗體效價（Log2）的影響Table 1 Effect of ZHYJG on NDV Antibody Titers

紫黃銀金甘各濃度組與陽性對照組比較：21日齡，紫黃銀金甘各濃度組NDV抗體效價與陽性對照組均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。28日齡，20 g/L和40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價與陽性對照組均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。35日齡和42日齡，40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價顯著（P＜0.05）高于陽性對照組；20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價與陽性對照組均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。表明在刺激NDV抗體產(chǎn)生上紫黃銀金甘藥物的有效性。

紫黃銀金甘各濃度組之間比較：21日齡，40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價高于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。28日齡，40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價極顯著（P＜0.01）高于80 g/L紫黃銀金甘組，且顯著（P＜0.05）高于20 g/L紫黃銀金甘組。35日齡和42日齡，40 g/L紫黃銀金甘組NDV抗體效價高于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組，無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。表明40 g/L紫黃銀金甘組對刺激NDV抗體產(chǎn)生的效果優(yōu)于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組。

2.2 紫黃銀金甘對雞體重的影響 紫黃銀金甘對雞體重的影響見表2。

表2 紫黃銀金甘對雞體重的影響Table 2 Effect of ZHYJG on Chicken Weight

陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組與空白對照組比較：各日齡，陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組雞體重均極顯著（P＜0.01）高于空白對照組。表明在促進雞生長發(fā)育上紫黃銀金甘能夠發(fā)揮作用。

紫黃銀金甘各濃度組與陽性對照組比較：7日齡，40 g/L紫黃銀金甘組雞體重與陽性對照組無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。14、21、28和35日齡，20 g/L和40 g/L紫黃銀金甘組雞體重與陽性對照組均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。42日齡，20 g/L和40 g/L紫黃銀金甘組雞體重均極顯著高于陽性對照組（P＜0.01）；80 g/L紫黃銀金甘組雞體重與陽性對照組無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。49日齡，紫黃銀金甘雞增重各濃度組均極顯著高于陽性對照組（P＜0.01）。表明在促進雞生長發(fā)育上紫黃銀金甘藥物的有效性。

紫黃銀金甘各濃度組之間比較：7日齡，40 g/L紫黃銀金甘組雞體重顯著（P＜0.05）高于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組；14、21、28和35日齡，40 g/L紫黃銀金甘組雞體重極顯著（P＜0.01）高于80 g/L紫黃銀金甘組，高于20 g/L紫黃銀金甘組無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；42日齡和49日齡，40 g/L紫黃銀金甘組雞體重極顯著（P＜0.01）高于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組。表明40 g/L紫黃銀金甘組對促進雞的生長發(fā)育效果優(yōu)于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組。

2.3 紫黃銀金甘對料肉比的影響 紫黃銀金甘對料肉比的影響見表3。

陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組與空白對照組比較：各日齡，陽性對照組、紫黃銀金甘各濃度組料肉比均極顯著（P＜0.01）低于空白對照組。表明在降低料肉比上紫黃銀金甘能夠發(fā)揮作用。

紫黃銀金甘各濃度組與陽性對照組比較：7日齡和14日齡40 g/L紫黃銀金甘組、21、28、35、42和49日齡20 g/L和40 g/L紫黃銀金甘組各日齡料肉比與陽性對照組無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。表明在降低料肉比上紫黃銀金甘藥物的有效性。

表3 紫黃銀金甘對雞料肉比的影響Table 3 Effect of ZHYJG on Chicken Feed Conversion Ratio

紫黃銀金甘各濃度組之間比較：7日齡，40 g/L紫黃銀金甘組料肉比顯著（P＜0.05）低于80 g/L紫黃銀金甘組；低于20 g/L紫黃銀金甘組無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。14、21、28、35和42日齡，40 g/L紫黃銀金甘組料肉比極顯著（P＜0.01）低于80 g/L紫黃銀金甘組；低于20 g/L紫黃銀金甘組無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。表明40 g/L紫黃銀金甘組對降低料肉比的效果優(yōu)于20 g/L和80 g/L紫黃銀金甘組。

3 討論

3.1 紫黃銀金甘對 N D V抗體效價的影響NDV抗體的高低決定著雞對NDV的抵抗力以及雞群的感染程度。張月等[12]研究苜蓿多糖對新城疫弱毒苗免疫雞所產(chǎn)生的免疫調(diào)節(jié)作用，選擇1日齡海蘭雛雞120羽，隨機分為4組，每組30羽，7日齡每羽用雞新城疫活疫苗（La Sota株）免疫，28日齡以相同劑量進行加強免疫。其中3個試驗組從7日齡開始分別肌肉注射低、中、高劑量（10、25、50 μg/mL）的苜蓿多糖，對照組注射生理鹽水，1次/d，連用7 d。于14、21、28、35、42、49、56日齡，通過靜脈采血，用微量法檢測血清中新城疫病毒血凝抑制（HI）抗體效價。結(jié)果苜蓿多糖能夠顯著提高血清中新城疫病毒HI抗體效價，中劑量組免疫后期抗體存在時間長，抗體高峰期持續(xù)時間也長。甘輝群等[13]利用黃芪、白術(shù)、黨參、甘草和板藍(lán)根組成的復(fù)方制劑（黃芪占40%、黨參占20%、白術(shù)占20%、板藍(lán)根占15%、甘草占15%），用海蘭褐雛雞設(shè)陰性對照組、陽性對照組、復(fù)方制劑低、中、高劑量組（按10、20和40 g/kg體重灌服復(fù)方制劑，1次/d，連喂5 d），7日齡時除陰性對照組不免疫，其他各組用新城疫滅活疫苗皮下注射。14、21、28、35和42日齡采用微量板法測定抗體效價，結(jié)果復(fù)方中藥制劑能提高NDV抗體效價。柳風(fēng)祥等[10]利用黃芪、淫羊藿、黨參和甘草等中藥提取物（黃芪占40%、淫羊藿占25%、黨參占25%、甘草占10%），用海蘭褐雛雞設(shè)不接病毒對照組，感染網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒誘發(fā)了免疫抑制組，中藥提取物在1日齡開始飲水加入2%，直到試驗結(jié)束。7日齡滴鼻、點眼和肌肉注射新城疫弱毒疫苗。28、35、42日齡采用血凝抑制試驗測定NDV抗體效價，結(jié)果中藥提取物能提高NDV抗體水平。靳雙星等[14]利用板藍(lán)根、茯苓、連翹、黃芪、枳實、山楂和白術(shù)組成的復(fù)方中藥制劑，用AA肉仔雞設(shè)對照組、復(fù)方中藥制劑低、中、高劑量組（飲水中加入0.5%、1%、1.5%的復(fù)方中藥制劑，連用28 d），7日齡用NDClone-30疫苗滴鼻點眼，14日齡用IBDV疫苗滴口。14、21、28和35日齡采用瓊脂擴散沉淀反應(yīng)測定抗體效價，結(jié)果復(fù)方中藥制劑能提高NDV和IBDV抗體效價。本研究結(jié)果，紫黃銀金甘能夠提高NDV抗體水平，40 g/L紫黃銀金甘組效果最好。與上述結(jié)果是一致的，說明紫黃銀金甘可以調(diào)節(jié)動物體液免疫功能，增強動物免疫應(yīng)答能力。

本研究結(jié)果顯示，NDV抗體效價，21日齡和28日齡紫黃銀金甘組與陽性對照組無明顯的優(yōu)勢，35、42和49日齡隨日齡的增加，紫黃銀金甘組越來越好于陽性對照組。表明28日齡停止給藥后，紫黃銀金甘比化學(xué)藥物在體內(nèi)停留時間長，能延長體液中高效價抗體水平的持續(xù)時間，從而提高疫苗對動物的保護率，對動物疫病的防控制具有重要作用。

3.2 紫黃銀金甘對雞生產(chǎn)性能的影響牛小飛[9]研究利用黃芪和紫錐菊組方研究對肉雞生長發(fā)育的影響，黃芪和紫錐菊組方促進肉雞生長發(fā)育，降低料肉比，從而提高生產(chǎn)性能。其作用是中藥組方本身含有的多糖成份，有顯著的營養(yǎng)作用，能滿足肉雞增重的生產(chǎn)需要；中藥組方能增強機體的免疫功能，發(fā)病率越低生長發(fā)育就越快。趙天章等[15]利用黃芪多糖研究對仔雞免疫功能和生產(chǎn)性能的影響，用1日齡艾維茵肉仔雞，按常規(guī)免疫程序進行免疫。設(shè)黃芪多糖不同濃度組（基礎(chǔ)日糧加黃芪多糖2%、1%、0.5%和0.1%）和空白對照組，14、28和42日齡測平均料肉比、日采食量和日增重；28日齡和42日齡測外周血T淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志和NDV抗體效價，結(jié)果顯示，黃芪多糖能夠提高外周血T淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+的比值和NDV抗體效價；降低平均料肉比，提高平均日采食量和日增重。本研究結(jié)果，紫黃銀金甘能夠促進雞的生長發(fā)育，降低料肉比。其作用是紫黃銀金甘能夠增強機體的免疫調(diào)節(jié)功能，發(fā)病率越低生長發(fā)育就越快；紫黃銀金甘組方中的黃芪多糖對雞生長起到了營養(yǎng)作用；紫黃銀金甘對于提升營養(yǎng)吸收方面可能起到了重要的生物學(xué)效應(yīng)。

4 結(jié)論

紫黃銀金甘可通過提高NDV抗體效價，來提高機體的免疫功能?？赏ㄟ^促進雞的生長發(fā)育，降低料肉比，來提高雞的生產(chǎn)性能。