周紹松，周 敏*，陳拾華，張忠武，楊景華，王建新，段宗顏，魯 耀，鄒炳禮，董石飛，張 靜，李 偉

(1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境資源研究所，云南 昆明 650205；2.紅云紅河煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司，云南 昆明 650231)

【研究意義】烤煙質(zhì)量特征和風(fēng)格的構(gòu)成與生態(tài)條件密切相關(guān)[1]?？緹焹?nèi)在品質(zhì)主要受煙葉中的致香物質(zhì)影響，它是評(píng)價(jià)烤煙品質(zhì)的主要指標(biāo)，生態(tài)因素對(duì)煙葉的致香成分影響顯著[2]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】致香成分雖然含量很低，但對(duì)烤煙的香氣影響較大[3]。有研究表明，種植海拔對(duì)烤煙化學(xué)成分及香氣有較大的影響[4-6]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前關(guān)于海拔對(duì)烤煙品種K326、紅花大金元、云煙87、云煙85、中煙103致香成分的影響已有報(bào)道[7-10]，但海拔對(duì)NC102烤煙品種致香成分的影響目前尚未有報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問題】文章在云南省昆明市4縣(區(qū))6個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))采集了85套NC102煙樣，每套煙樣取B2F、C3F各1個(gè)，共170個(gè)煙樣。針對(duì)NC102烤煙品種種植海拔與上、中部煙葉致香成分含量的相關(guān)性進(jìn)行了研究，為NC102品種在昆明煙區(qū)的適宜種植規(guī)劃提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

NC102是美國(guó)李卡德種子公司育成的F1代雜交種，由云南中煙公司和云南省煙草公司于2006年引進(jìn)種植[11]。

1.2 樣品采集

2011-2012年，使用GPS定位技術(shù)，在云南省昆明市石林、安寧、祿勸、西山4縣(區(qū))6個(gè)鄉(xiāng)(鎮(zhèn))，NC102品種種植區(qū)域內(nèi)，選取1600～1700、1800～1900、2000～2100和2200 m 4個(gè)海拔范圍的 85個(gè)取樣點(diǎn)，土壤類型為紅壤，每樣點(diǎn)取一套煙樣，每套煙樣取B2F、C3F各1個(gè)，共采集170個(gè)煙樣。

1.3 致香成分物質(zhì)的分析測(cè)定

煙樣致香成分采用蒸餾萃取設(shè)備和 Agilent 6890氣相色譜/Agilent 7890GC/5975MS氣質(zhì)聯(lián)用儀測(cè)定。稱取30 g樣品放入蒸餾萃取燒瓶中，加氯化鈉30 g和蒸餾水350 mL，在60 ℃水浴加熱，蒸餾萃取2.0 h；蒸餾萃取結(jié)束后，向萃取液加1 mL內(nèi)標(biāo)乙酸苯乙酯溶液(0.4236 mg/mL)，取1.0 mL濃縮液，使用Agilent 7890GC/5975MS氣質(zhì)聯(lián)用儀分析，經(jīng)過分析并與規(guī)范質(zhì)譜圖對(duì)比和搜索，最終與分析室的已知化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行色譜分析對(duì)照，判斷分離出成分的化學(xué)構(gòu)造[12]。由于烤煙中所含致香物質(zhì)的組分龐雜，種類眾多，要取得各類致香物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品很困難，采用Nist03標(biāo)準(zhǔn)圖譜確定其種類，相對(duì)校訂因素假設(shè)為1[17]，根據(jù)以下公式計(jì)算出致香物質(zhì)的含量。

香味物質(zhì)提取量(μg/g)=

1.4 GC/MS的分析要求

色譜柱型號(hào)：HP-6MS(75 m×0.4 mm i.d.×0.55 μm d.f.)；入口溫度：270 ℃；送樣數(shù)量：3 μl；分流比例：12∶1；載氣速率：He, 1.2 mL/min；升溫順序：60 ℃保持2 min，然后以4 ℃/min升溫至280 ℃保持25 min[13]。質(zhì)譜傳輸線溫度：270 ℃；源電子能量：65 eV；倍增器電壓：1640 V；掃描跨度：40～500 amu；離子源溫度：220 ℃；四極桿溫度：160 ℃[13]。

1.5 數(shù)據(jù)處理方式

采用統(tǒng)計(jì)分析軟件DPS15.0進(jìn)行分析。雙變量相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析使用相關(guān)模塊分析，“*”表示5 %水平顯著，“**”表示1 %水平顯著[14]。

2 結(jié)果與分析

2.1 致香成分與種植海拔的相關(guān)系數(shù)分析結(jié)果

NC102烤煙品種42個(gè)煙葉致香成分物質(zhì)數(shù)據(jù)通過分析測(cè)試獲得后，用 DPS 對(duì)整個(gè)數(shù)據(jù)樣本開展基礎(chǔ)統(tǒng)計(jì)特征值評(píng)估，指標(biāo)基本上符合正態(tài)分布。將各個(gè)海拔段采集的170個(gè)NC102品種煙樣的致香物質(zhì)含量與其對(duì)應(yīng)的海拔高度值進(jìn)行相關(guān)性檢測(cè)，獲得了NC102烤煙品種各種致香成分與種植海拔的相關(guān)系數(shù)(表1)。從表1的數(shù)據(jù)看出，B2F級(jí)別煙葉中正戊醛、香葉醇含量與種植海拔間呈極顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系，3-羥基-2-丁酮、糠醛、2-乙?；秽⒎颊链?、香葉基丙酮和3-羥基-β-大馬酮與種植海拔間呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。C3F級(jí)別煙葉中3-甲基-2-(5H)-呋喃酮含量與種植海拔間呈極顯著的負(fù)相關(guān)，正戊醛、苯甲醛、2-戊基呋喃和芳樟醇與種植海拔間呈顯著的負(fù)相關(guān)。

2.2 種植海拔對(duì)NC102烤煙品種各致香成分的影響

把NC102烤煙品種種植海拔依照低到高的次序，分為1600～1700、1800～1900、2000～2100和2200 m，計(jì)算上述11個(gè)物質(zhì)在每個(gè)海拔的平均值，并將B2F煙葉中正戊醛、香葉醇、3-羥基-2-丁酮、糠醛、2-乙酰基呋喃、芳樟醇、香葉基丙酮和3-羥基-β-大馬酮和C3F煙葉中3-甲基-2-(5H)-呋喃酮、正戊醛、苯甲醛、2-戊基呋喃和芳樟醇的數(shù)值與種植海拔之間的關(guān)系見圖1～2。

表1 NC102品種煙葉各致香成分與種植海拔的相關(guān)系數(shù)

從圖1看出，NC102烤煙品種B2F級(jí)別煙葉中正戊醛、3-羥基-2-丁酮、糠醛、2-乙?；秽?、芳樟醇、香葉醇、香葉基丙酮和3-羥基-β-大馬酮的含量平均值隨種植海拔升高下降明顯，以1600～1700和1800～1900 m海拔段尤為突出。

從圖2看出，NC102烤煙品種C3F級(jí)別煙葉中正戊醛、苯甲醛、3-甲基-2-(5H)-呋喃酮、2-戊基呋喃、芳樟醇的含量平均值隨種植海拔升高下降明顯，以1600～1800和1800～1900 m海拔段表現(xiàn)突出。

圖1 種植海拔與B2F等級(jí)煙葉中致香成分的關(guān)系Fig.1 The correlation between planting altitude and aroma compositions of B2F flue-cure tobacco leaves

2.3 種植海拔對(duì)NC102烤煙品種各類致香成分的影響

致香物質(zhì)因?yàn)楣倌軋F(tuán)的差異被分為7類，以此找出各類致香物質(zhì)含量與種植海拔間的相關(guān)性，見表2。 從表2看出，NC102烤煙品種上部煙葉的醛類致香物質(zhì)與種植海拔呈極顯著負(fù)相關(guān)；中部煙葉的酯類致香物質(zhì)與種植海拔呈極顯著正相關(guān)。

圖2 種植海拔與C3F等級(jí)煙葉中致香成分的關(guān)系Fig.2 The correlation between planting altitude and aroma compositions of C3F flue-cure tobacco leaves

表2NC102烤煙品種各類致香成分與種植海拔間的相關(guān)系數(shù)

Table 2 The correlation coefficients between planting altitude and different types of aroma compositions of NC102

致香成分Aroma compositionsB2FC3F酮類-0.2330.031醇類-0.2370.277醛類-0.781**0.095酯類-0.3410.914**酚類-0.043-0.037呋喃類-0.3920.168雜環(huán)類-0.043-0.026

從圖3～4可見，通過一元線性回歸分析進(jìn)行回歸探索，找到NC102品種上部煙葉醛類致香物質(zhì)與種植海拔的一元線性回歸方程為y=94.7319-0.0353x，中部煙葉酯類致香物質(zhì)與種植海拔的一元線性回歸方程為y=-75.8251+0.0587x。

3 討 論

(1) NC102品種在昆明煙區(qū)海拔1600～2200 m范圍內(nèi)，種植海拔與NC102品種上部葉的正戊醛、香葉醇含量間呈極顯著的負(fù)相關(guān)，種植海拔與NC102品種上部葉的3-羥基-2-丁酮、糠醛、2-乙?；秽?、芳樟醇、香葉基丙酮和3-羥基-β-大馬酮含量間呈顯著的負(fù)相關(guān)。種植海拔與NC102品種中部葉的3-甲基-2-(5H)-呋喃酮含量間呈極顯著的負(fù)相關(guān)，這與前人的研究結(jié)果相同[8]；種植海拔與NC102品種中部葉的正戊醛、苯甲醛、2-戊基呋喃和芳樟醇含量間呈顯著的負(fù)相關(guān)。綜上所述，正戊醛和芳樟醇在中部葉和上部葉中的含量都與種植海拔間呈顯著的負(fù)相關(guān)，說明這兩種致香物質(zhì)含量不受煙葉部位的影響。其它致香物質(zhì)在不同部位煙葉的含量可能受到光照、降雨的影響呈現(xiàn)出差異性的結(jié)果。

(2)香葉基丙酮、3-羥基-β-大馬酮是類胡蘿卜的降解產(chǎn)物，低海拔地區(qū)種植的NC102烤煙品種上部煙葉比高海拔地區(qū)積累更多類胡蘿卜，這與常壽榮等人的研究結(jié)果相反，可能是由于種植海拔對(duì)于不同的烤煙品種影響有所差異造成的。3-甲基-2-(5H)-呋喃酮、3-羥基-2-丁酮、2-戊基呋喃、糠醛普遍認(rèn)為是美拉德反應(yīng)的產(chǎn)物[15]，高海拔區(qū)域種植的NC102烤煙品種中上部煙葉較低海拔地區(qū)美拉德反應(yīng)的產(chǎn)物含量有所下降，這與前人的研究結(jié)果相同[8]。

(3)從各類致香成分統(tǒng)計(jì)結(jié)論可以看出，在1600～2200 m海拔范圍內(nèi)的昆明植煙區(qū)，種植海拔與大部分致香成分之間并無顯著相關(guān)性，可以得出，有眾多的生態(tài)因子影響煙葉中致香物質(zhì)的含量[16-18]，需要分別研究多個(gè)因素。從致香物質(zhì)種類而言，NC102烤煙品種上部煙葉的醛類致香物質(zhì)與種植海拔呈極顯著負(fù)相關(guān)，一元線性回歸方程為y=94.7319-0.0353x；中部煙葉的酯類致香物質(zhì)與種植海拔呈極顯著正相關(guān)，這與前人的研究結(jié)果相同[12]，一元線性回歸方程為y=-75.8251+0.0587x。

圖3 NC102烤煙品種B2F煙葉醛類致香物質(zhì)與種植海拔的關(guān)系Fig.3 The correlativity between planting altitude and Aldehydes of B2F tobacco leaves of NC102

圖4 NC102烤煙品種C3F煙葉酯類致香物質(zhì)與種植海拔的關(guān)系Fig.4 The correlativity between planting altitude and Esters of C3F tobacco leaves of NC102

(4)煙葉的致香成分是評(píng)估卷煙質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)[3]，重視海拔等生態(tài)要素對(duì)NC102烤煙品種煙葉品質(zhì)的影響將有助于明確致香成分的形成路徑及轉(zhuǎn)變規(guī)律，為優(yōu)化NC102烤煙品種的種植規(guī)劃提供科學(xué)依據(jù)。

4 結(jié) 論

昆明煙區(qū)海拔1600～2200 m范圍內(nèi)種植的NC102品種中、上部葉中正戊醛和芳樟醇的含量均與種植海拔間呈顯著的負(fù)相關(guān)。高海拔區(qū)域種植的NC102烤煙品種中、上部煙葉較低海拔地區(qū)美拉德反應(yīng)的產(chǎn)物含量有所下降。在NC102品種的種植規(guī)劃中應(yīng)重視海拔對(duì)煙葉品質(zhì)的影響。