徐娟 王永雄 杜芬

摘要：為了解重組禽流感病毒（AIV）（H5+H7）二價滅活疫苗的免疫效果，對9家養(yǎng)禽場8萬多羽家禽進行了免疫效果評價。結(jié)果顯示，免疫后7 d內(nèi)家禽死亡率低于0.1%，產(chǎn)蛋率下降幅度小于3%；按照推薦劑量免疫1次，H7亞型禽流感免疫抗體合格率達到90%以上，H5亞型禽流感免疫抗體合格率則低于30%，免疫2次后H5亞型禽流感免疫抗體合格率達到90%以上。分析認(rèn)為，政府統(tǒng)一供應(yīng)的重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗免疫副反應(yīng)小，可放心使用，但須免疫2次才能產(chǎn)生良好的免疫效果。該試驗對執(zhí)行國家禽流感強制免疫政策、提高免疫效果具有實踐指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞：H7亞型禽流感；H5亞型禽流感；免疫效果；副反應(yīng)

中圖分類號：S851.33 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2018）08-0010-03

2013年至2014年第一季度，人感染H7N9流感的沖擊波給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來了不可挽回的巨大損失。自此，每年冬春季節(jié)防控家禽H7N9禽流感成為了各級畜牧獸醫(yī)主管部門的首要任務(wù)。為全面減少易感動物，有效降低家禽感染和傳播H7N9流感病毒的風(fēng)險，2017年下半年，農(nóng)業(yè)部將H7亞型禽流感全面納入動物強制免疫病種。湖北省于10月份開始使用政府統(tǒng)一采購的重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗對所有存籠家禽實施普免。為了解重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗的免疫效果，正確指導(dǎo)養(yǎng)殖場戶禽流感的免疫，我們組織開展了重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗的免疫效果觀察評估工作。

1 材料與方法

1.1 主要試驗對象和材料

試驗選擇荊州市松滋市4個鄉(xiāng)鎮(zhèn)（湖區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)和丘陵鄉(xiāng)鎮(zhèn)各2個）的9家家禽養(yǎng)殖場，共存籠家禽80 776羽，家禽品種涉及雞、鴨、鵝。其中，養(yǎng)雞場7家，共存籠59 826羽；養(yǎng)鴨場1家，存籠18 000羽；養(yǎng)鵝場1家，存籠2 950羽。免疫使用青島xx生物工程有限公司生產(chǎn)的重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗（H5N1Re-8株+H7N9-Re1株），生產(chǎn)批號為171514501，有效期為20180813。免疫抗體檢測試劑使用哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)的禽流感5亞型、H7亞型血凝抑制抗原及陽性、陰性對照血清。

1.2 試驗方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)

對供試家禽采用肌肉注射的方式免疫，觀察記錄免疫后7 d內(nèi)的副反應(yīng)情況。其中，場二首次免疫30 d后對其中已免疫的100羽進行第二次免疫。每次免疫劑量均為雞0.5 mL/羽，鴨1 mL/羽，鵝1.5 mL/羽。對首次免疫群體分別于免疫10～47 d后隨機抽樣，對場二第二次免疫15 d后再次抽樣。對所有采集血樣檢測H5和H7亞型禽流感免疫抗體。

禽流感免疫抗體采用血凝和血凝抑制（HA/HI）[1]試驗方法檢測。試驗測得禽流感H5亞型陽性對照血清抑制效價為8log2，禽流感H7亞型陽性對照血清抑制效價為9log2，陰性對照血清抑制效價均<1log2。檢測樣本對應(yīng)抗體抑制效價>4log2判定為抗體合格，群體抗體合格率≥70%認(rèn)定群體抗體合格率達標(biāo)。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫后7 d內(nèi)副反應(yīng)情況

9家家禽養(yǎng)殖場共免疫80 776羽，觀察并記錄免疫后7 d內(nèi)免疫群體的免疫副反應(yīng)[2]情況，重點觀察禽死亡情況、精神狀況、采食量和產(chǎn)蛋率（蛋禽）的變化等。詳見表1。

由表1可見，免疫后7 d內(nèi)被免疫群體產(chǎn)生的副反應(yīng)較小，且不同種類家禽之間無明顯差異。9個場中有5個場產(chǎn)生了不同程度的副反應(yīng)；免疫的80 776羽家禽中，死亡22羽，其中19羽為發(fā)生跛行后被同群雞踩踏致死；采食量下降的兩個禽場均在3 d后恢復(fù)正常；處于產(chǎn)蛋期的5個蛋雞場中有2家產(chǎn)蛋率下降2%～3%，其余無明顯變化；1個鴨場在免疫后有20%的鴨出現(xiàn)精神不振和部分稀便的狀況，調(diào)查發(fā)現(xiàn)該鴨群系散養(yǎng)在活動場內(nèi)，分析認(rèn)為精神不振可能與免疫時驅(qū)趕捕捉應(yīng)激反應(yīng)較大有關(guān)。

2.2 免疫抗體監(jiān)測結(jié)果

2.2.1 H5亞型禽流感免疫抗體檢測結(jié)果 對9個場點隨機采集血樣270份，檢測270份，H5亞型禽流感免疫抗體合格193份，合格率71.5%。其中，6個場曾免疫注射過H5N1禽流感疫苗，H5亞型禽流感抗體免疫合格率均為100%。3個未免疫過H5N1禽流感疫苗的場H5亞型禽流感免疫抗體均不合格，免疫抗體合格率在0～30%之間，平均合格率為14.4%（表2）。

其中場二首免間隔30 d后在群體中隨機抽取100羽進行了家禽重組禽流感病毒H5+H7二價滅活疫苗第二次免疫，二免15 d后采樣檢測，H5亞型禽流感抗體合格率從0上升為93.3%，平均抑制滴度從<1log2提高至5.92log2。

2.2.2 H7亞型禽流感免疫抗體檢測結(jié)果 9個場點隨機采集血樣270份，檢測H7亞型禽流感血樣269份（其中1份無效），免疫抗體合格263份，合格率97.8%。各場點H7亞型禽流感免疫抗體合格率均在90%以上，其中6個場合格率為100%（表3）。

其中場二第二次免疫后H7亞型禽流感抗體平均滴度從7.33log2提高至9.75log2，抗體離散度從1.325降低至0.772。

2.2.3 不同類別、品種、日齡家禽之間的禽流感免疫抗體水平 不同類別家禽之間免疫抗體水平無明顯差異。只免疫一次重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗，7個雞場、1個鴨場和1個鵝場H7亞型禽流感免疫抗體合格率均在90%以上，未曾免疫過H5N1禽流感滅活疫苗的場一、場二、場五3個養(yǎng)禽場中雞、鴨、鵝H5亞型禽流感免疫抗體合格率均≤30%（表4）。

不同品種之間抗體水平無明顯差異。從監(jiān)測的7個雞場來看，肉用土雞和蛋雞，羅曼粉、海南褐、靈山土雞的免疫抗體水平差異不大，H7亞型禽流感免疫抗體合格率均在90%以上，平均抗體滴度在5.20log2～7.03log2之間。由于場九免疫了兩次重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活苗，所以其H7亞型禽流感平均免疫抗體水平明顯高于其他雞場。

不同日齡禽之間抗體水平無明顯差異。8個只免疫一次重組禽流感（H5+H7）二價滅活疫苗的養(yǎng)禽場中試驗家禽免疫日齡從35～510日齡不等，H7亞型禽流感免疫抗體水平差異不明顯，平均抗體滴度在5.20log2～7.33log2之間。

3 結(jié)論

供試疫苗免疫副反應(yīng)小，免疫后基本不影響家禽的生產(chǎn)性能，能為廣大家禽養(yǎng)殖場（戶）所接受。雖然疫苗使用說明書僅標(biāo)注用于雞，但本試驗也用于鴨和鵝，其免疫效果與雞無顯著差異，建議及早申報備案用于水禽的免疫。

只免疫一次該疫苗H7亞型禽流感抗體合格率高于90%， H5亞型禽流感抗體合格率低于30%，加強免疫后H5亞型禽流感免疫抗體合格率達到90%以上，H7亞型禽流感免疫抗體水平和抗體離散度也明顯向好。建議在生產(chǎn)實踐中間隔4周左右進行加強免疫或補免H5N1禽流感疫苗。提示生產(chǎn)廠家對疫苗進一步改進，以期免疫一次即可保證H5、H7兩種亞型禽流感免疫抗體達標(biāo)，減少家禽養(yǎng)殖生產(chǎn)環(huán)節(jié)的免疫成本[3]。重組禽流感病毒（H5+H7）二價滅活疫苗的全面普免，減少了易感畜群，必將有效降低第六波H7亞型禽流感的發(fā)病和傳播風(fēng)險。

由于時間緊，本試驗完全模擬生產(chǎn)實踐中免疫程序操作，未設(shè)置空白對照組，也未對抗體水平的消漲規(guī)律作跟蹤監(jiān)測，無法進行差異性分析。副反應(yīng)信息采集均來源于養(yǎng)殖場主的反映，可能與實際情況存在一定的偏差。

參考文獻：

[1] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢疫檢驗總局.GB/T 18936—2003高致病性禽流感診斷技術(shù)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[2] 胡至剛，孫澤祥，王維金，等.禽流感免疫接種后的不良反應(yīng)觀察[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2006（3）：44.

[3] 譚 偉，謝麗基，謝芝勛.禽流感病毒疫苗研究進展[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，45（3）：1492-1497.