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        膀胱癌患者miR—29的表達特點及臨床意義

        2018-11-21 11:50:18吳軍黃群黃敏玉孟冬冬覃天資
        右江醫(yī)學 2018年5期
        關鍵詞:膀胱癌癌細胞淋巴結

        吳軍 黃群 黃敏玉 孟冬冬 覃天資

        【摘要】目的觀察膀胱癌患者miR-29的表達情況,并分析其臨床意義。方法選取2014年10月~2017年12月接受治療的膀胱癌患者為研究對象,用橫斷面方法抽?、窦?、Ⅱ級和Ⅲ級膀胱移行細胞癌(BTCC)不同患者,同時選取同期接受體檢的健康成年人作為對照。觀察不同組別miR-29表達情況,并觀察不同臨床特征膀胱癌患者的miR-29表達,分析影響膀胱癌患者miR-29表達的因素。結果膀胱癌患者的miR-29a、miR-29b、miR-29c相對表達量高于對照組,且Ⅲ級膀胱癌患者的表達量最高;中、低分化,有淋巴結轉(zhuǎn)移,浸潤深度為T3+T4,TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的膀胱癌患者miR-29a、miR-29b、miR-29c相對表達量較高,而不同年齡、不同性別的患者中miR-29a、miR-29b、miR-29c表達量無明顯差別;將單因素分析有意義的臨床分級、分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移、浸潤深度和TNM分期作為自變量,將miR-29a、miR-29b、miR-29c的表達情況作為因變量進行回歸分析,結果分化程度和臨床分級進入回歸方程,說明分化程度和臨床分級是miR-29表達的影響因素。結論膀胱癌患者的miR-29表達水平較高,且與患者的臨床分級、分化程度密切相關。

        【關鍵詞】膀胱癌;miR-29;影響因素;病理

        中圖分類號:R737.14文獻標識碼:ADOI:10.3969/j.issn.1003-1383.2018.05.002

        【Abstract】ObjectiveTo observe the expression of miR-29 in patients with bladder cancer,and to analyze its clinical significance.MethodsPatients with bladder cancer who were treated in our hospital from October 2014 to December 2017 were selected as research subjects,and different patients with grade Ⅰ,grade Ⅱ and grade Ⅲ bladder transitional cell carcinoma(BTCC) were taken by cross-sectional method.At the same time,healthy adults who were examined during the same period were selected as controls.The expression of miR-29 in different groups and the expression of miR-29 in patients with bladder cancer with different clinical characteristics were observed,and factors influencing the expression of miR-29 in patients with bladder cancer were analyzed.ResultsThe relative expressions of miR-29a,miR-29b and miR-29c in bladder cancer patients were higher than those in the control group,and the expression level in patients with grade Ⅲ bladder cancer was the highest.The relative expressions of miR-29a,miR-29b and miR-29c in patients with middle and low differentiation,lymph node metastasis,infiltration depth of T3+T4 and TNM stage Ⅲ+Ⅳ were relatively high,but there was no significant difference in the expression of miR-29a,miR-29b and miR-29c in patients with different ages and genders.Clinical grade,differentiation degree,lymph node metastasis,depth of invasion and TNM stage with significance by univariate analysis were used as independent variables,the expressions of miR-29a,miR-29b and miR-29c were used as dependent variable for regression analysis,and differentiation degree and clinical classification entered regression equation,which showed that the degree of differentiation and clinical grade were the influencing factors of miR-29 expression.ConclusionThe expression level of miR-29 in bladder cancer patients is high,and is closely related to the clinical classification and differentiation degree of the patients.

        【Key words】bladder cancer;miR-29;influencing factors;pathology

        流行病學研究證實,近年來膀胱癌的發(fā)生率具有一定的上升表現(xiàn),我國2010~2017年部分地區(qū)的膀胱癌發(fā)病率可達(272~373)/10萬人[1]。臨床上膀胱癌的發(fā)生能夠?qū)е禄颊邿o瘤生存時間縮短,提高了患者的病死風險[2]。在揭示膀胱癌的發(fā)病機制的過程中發(fā)現(xiàn),微小RNA的改變可能在促進惡性腫瘤的發(fā)生或者病情進展方面發(fā)揮了重要的作用。miR-29作為重要的非編碼RNA,能顯著影響腫瘤細胞的生物學特性,導致早期上皮細胞異常病變的發(fā)生。miR-29能夠通過激活癌細胞的上游轉(zhuǎn)錄過程,進而提高癌細胞的增殖速度[3~4]。部分研究者報道了miR-29在消化系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)生過程中的作用,認為miR-29的表達濃度的上升與腫瘤患者臨床分期的進展、癌細胞浸潤深度的增加密切相關[5~6],但對于miR-29的表達與膀胱癌的臨床病理特征的分析研究較少。為了揭示miR-29的表達與膀胱癌的關系,從而為臨床上膀胱的血清學診斷或者臨床預后評估提供參考,本次研究選取2014年10月~2017年12月在我院接受治療的膀胱癌患者為研究對象,探討了miR-29的表達及其與患者臨床病理特征的關系。

        1資料與方法

        1.1一般資料選取2014年10月~2017年12月在我院接受治療的膀胱癌患者為研究對象。納入標準:(1)年齡≥18周歲;(2)經(jīng)術中病理診斷為膀胱癌;(3)無其他系統(tǒng)嚴重疾病者。排除標準:(1)臨床資料不全者;(2)合并其他部位原發(fā)腫瘤者。根據(jù)納入排除標準共納入病例數(shù)150例,Ⅰ級50例,Ⅱ級50例,Ⅲ級50例,男90例,女60例,年齡45~63歲,平均(55.08±4.02)歲;對照組納入排除標準:(1)年齡≥18歲;(2)無其他部位原發(fā)腫瘤者。共納入100例,男80例,女20例,年齡45~68歲,平均(55.11±3.98)歲。本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審通過,且所有患者均知情同意。

        1.2檢測方法miR-29的檢測:采集患者空腹血5 mL,加入0.2 mL的氯仿,2~8 ℃冰凍離心機中離心 (12 000 g/min,15 min),反復一次洗滌RNA,棄上清,在管底部可見一乳白色小沉淀物,加入1 mL 75%乙醇,0.1% DEPC水溶解。加入GAPDH上下游引物、0.1% DEPC使其終濃度均為 20 pmol/μL,制備反應體系,RT-PCR 擴增的條件與參數(shù):48 ℃,45 min,94 ℃,2 min;94 ℃ 30 s,58 ℃ 60 s,68 ℃ 2 min共40個循環(huán);循環(huán)完畢后68 ℃ 延伸 7 min。

        1.3評價指標觀察不同組別研究對象miR-29表達情況,并比較不同臨床特征膀胱癌患者miR-29的表達,分析影響膀胱癌患者miR-29表達的因素。

        1.4統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)錄入后,采用SPSS 19.0軟件進行分析。計量資料如符合正態(tài)分布,采用均數(shù)±標準差(±s)表示,膀胱癌患者和對照組的比較采用方差分析,組間兩兩比較采用SKD法進行處理,不同臨床特征miR-29表達情況的比較采用t檢驗進行分析,采用多重逐步回歸分析法分析影響膀胱癌患者miR-29表達情況的因素。檢驗水準:α=0.05,雙側檢驗。

        2結果

        2.1膀胱癌患者和對照組miR-29a、miR-29b、miR-29c表達情況的比較膀胱癌患者的miR-29a、miR-29b、miR-29c相對表達量高于對照組(P<0.05),且Ⅲ級膀胱癌患者的表達量最高。見表1。

        2.2不同特征膀胱癌患者miR-29a、miR-29b、miR-29c表達情況的比較中、低分化,有淋巴結轉(zhuǎn)移,浸潤深度為T3+T4,TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的膀胱癌患者miR-29a、miR-29b、miR-29c相對表達量較高(P<0.05),而不同年齡、不同性別的患者miR-29a、miR-29b、miR-29c表達量無明顯差別(P>005)。見表2。

        2.3影響膀胱癌患者miR-29a、miR-29b、miR-29c表達的多因素回歸分析將單因素分析有意義的臨床分級、分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移、浸潤深度和TNM分期作為自變量,將miR-29a、miR-29b、miR-29c表達情況作為因變量進行回歸分析,結果分化程度和臨床分級進入回歸方程,說明以上項目是膀胱癌患者miR-29表達的影響因素。見表3~表5。

        3討論

        膀胱癌的病情進展相對較為隱匿,雖然早期可表現(xiàn)為血尿等臨床癥狀,但疾病的總體早期診斷水平較低。同時膀胱癌的手術治療或者放化療后,患者的病死率或者生存時間等指標均無明顯改善[7~8]。一項包含了334例樣本量的多中心膀胱癌臨床診療分析研究顯示,膀胱癌的早期診斷率不足55%,治療后的病情緩解率不足40%,無瘤生存時間不足48個月[9]。本次研究通過對相關分子生物學水平的研究,不僅能夠為揭示膀胱癌的發(fā)病機制提供參考,同時可以為疾病的早期診斷提供潛在的臨床觀察指標。

        微小RNA的表達在惡性腫瘤的發(fā)生過程中發(fā)揮了重要的作用,其能夠參與到腫瘤細胞的代謝、細胞周期調(diào)控及細胞凋亡等過程中。miR-29水平的改變對于腫瘤信號通路的激活,能夠交錯式激活患者體內(nèi)的癌細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,提高癌細胞DNA的擴增速度[10~11]。miR-29能夠促進癌細胞膜表面糖蛋白配體的激活,促進癌細胞的細胞周期調(diào)控依賴性蛋白激活的轉(zhuǎn)錄及翻譯,增加G1/S期比例,降低G0期細胞的總數(shù)。近年來相關基礎研究顯示,miR-29表達濃度的改變能夠通過促進癌細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄基因的結合,提高癌細胞的增殖活性[12~13]。部分研究者報道了miR-29在乳腺癌中的表達情況,認為miR-29的表達濃度的上升與乳腺癌患者的生存預后的惡化密切相關,同時認為miR-29的表達能夠提高腫瘤細胞的增殖風險,導致腫瘤復發(fā)風險的上升[5],但在膀胱癌中的表達分析研究不足。

        本次研究對于miR-29的表達濃度的分析可見,在膀胱癌患者血清中,miR-29的表達濃度明顯上升,且高于對照組,同時在Ⅲ級膀胱癌患者中,miR-29的表達濃度可進一步上升,提示了miR-29的表達與膀胱癌的病情密切相關。通過薈萃國內(nèi)外相關文獻,筆者認為miR-29的表達濃度的改變與膀胱癌的病情關系可能與下列幾個機制有關[14]:(1)miR-29的表達上升能夠誘導癌細胞的浸潤能力的增強,使膀胱上皮移行細胞的浸潤風險增加;(2)miR-29的高表達能夠?qū)е掳螂咨掀ひ菩屑毎霓D(zhuǎn)錄活性的增強,導致癌細胞的擴增速度明顯加快。張永海等[15]研究者也認為,在膀胱癌患者中,miR-29等微小RNA的表達濃度可平均上升55%以上,同時在合并有遠處轉(zhuǎn)移或者淋巴結轉(zhuǎn)移的患者中,miR-29的表達濃度可進一步上升。在探討miR-29的表達與膀胱癌患者臨床病理特征的關系過程中,可以發(fā)現(xiàn)在發(fā)生了淋巴結轉(zhuǎn)移、癌細胞浸潤程度較高、臨床分期較晚的人群中,miR-29的表達濃度可顯著上升,提示了miR-29與膀胱癌的臨床病理特征密切相關,這主要是由于miR-29的表達能夠提高癌細胞對于淋巴結的黏附能力,導致癌細胞的分化誘導成熟障礙,并提高了膀胱移行上皮細胞對于鄰近正常組織的浸潤程度。但部分研究者并不認為miR-29的表達與膀胱癌患者的淋巴結轉(zhuǎn)移有關,存在不同的結論可能與不同研究的樣本量差別較大或者miR-29的檢測敏感性不同等因素有關。最后回歸分析也可見,癌細胞的分化程度和臨床分級水平是影響miR-29表達的重要因素,進一步提示了miR-29與膀胱癌的病情關系,miR-29對于癌細胞的異型性的影響,能夠顯著影響膀胱癌患者的臨床分級。

        本次研究的創(chuàng)新性在于探討了miR-29的表達與膀胱癌患者的臨床病理特征的關系。綜上所述,miR-29在膀胱癌患者中呈現(xiàn)出明顯的高表達趨勢,miR-29的表達與膀胱癌的臨床病理特征密切相關。

        參考文獻

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        (收稿日期:2018-06-19修回日期:2018-08-21)

        (編輯:潘明志)

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