何昊倫 董曉慧* 譚北平 楊奇慧 遲淑艷 劉泓宇 章 雙 楊原志 張海濤

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料實驗室，湛江 524088；2.農(nóng)業(yè)部華南水產(chǎn)與畜禽飼料重點實驗室，湛江 524000)

高不飽和脂肪酸(highly unsaturated fatty acids，HUFAs)是指碳原子數(shù)目≥20且雙鍵數(shù)目≥3的一類不飽和脂肪酸。根據(jù)甲基端第1個雙鍵所連碳原子的位置，可將高不飽和脂肪酸分為n-3、n-6等系列，其中n-3HUFA主要包括二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)。n-3HUFA的生理功能主要包括：1)抑制促炎癥因子產(chǎn)生，抑制炎癥反應(yīng)，減輕疾病癥狀；2)視網(wǎng)膜的重要結(jié)構(gòu)成分，對視力發(fā)育有促進作用；3)作為細胞膜的重要組成成分，可影響甚至決定細胞膜的功能，同時可影響細胞膜的流動性，對細胞之間的信號傳遞起到重大的作用等[2-4]。在海水魚中，EPA、DHA是類花生酸等高活性旁分泌激素類的前體[5]，參與生理功能的調(diào)控。已有的報道證明，多數(shù)淡水魚具有合成EPA和DHA的能力，飼料中只需補充其合成原料亞麻酸即可滿足其對n-3HUFA的需要[6]。對于缺乏脂肪酸延長和去飽和能力的海水魚而言，n-3HUFA則是其必需脂肪酸[6]。飼料中添加n-3HUFA能提高海水魚的生長性能，有利于脂類代謝平衡，加強機體免疫功能[7-10]。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計與飼料配制

以魚粉、小麥谷朊粉等為蛋白質(zhì)源，魚油和玉米油為脂肪源，調(diào)整飼料中玉米油和魚油的含量，配制n-3HUFA水平分別為0.53%、0.80%、1.22%、1.62%、2.12%和2.56%的6組等氮等能飼料，試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1，試驗飼料脂肪酸組成見表2。飼料原料粉碎后過60目篩，根據(jù)飼料配方稱取各原料。飼料制作過程中，微量成分采用逐級擴大法混合均勻，再添加不同含量的魚油和玉米油并攪拌均勻，然后添加30%～40%的水制成團狀，用雙螺桿擠條機制成粒徑為1.5 mm的飼料，在陰涼干燥環(huán)境中風干后封口帶密封，-20 ℃保存。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

續(xù)表1項目Itemsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56磷酸二氫鈣 Ca(H2PO4)21.001.001.001.001.001.00誘食劑 Attractant0.100.100.100.100.100.10乙氧基喹啉 Ethoxy quinolone0.030.030.030.030.030.03微晶纖維素 Microcrystalline cellulose7.577.577.577.577.577.57合計 Total100.00100.00100.00100.00100.00100.00營養(yǎng)水平 Nutrient levels水分 Moisture8.458.148.258.868.118.44粗蛋白質(zhì) CP46.4146.0947.1946.4446.9347.22粗脂肪 EE9.449.679.329.229.779.71粗灰分 Ash7.977.607.617.617.567.52總磷 TP1.211.191.161.221.241.17

1)維生素預(yù)混料為每千克飼料提供 The vitamin premix provided the following per kg of diets：VA 22 500 IU，VD36 000 IU，VE 200 mg，VK340 mg，VB130 mg，VB245 mg，VB635 mg，VB120.25 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 150 mg，煙酸 nicotinic acid 225 mg，葉酸 folic acid 12.5 g，生物素 biotin 0. 5 mg，肌醇 inositol 500 mg。2)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供 The mineral premix provided the following per kg of diets：Fe 60 mg，Zn 24 mg，Mn 16 mg，Cu 1.4 mg，Co 0.2 mg，Se 0.1 mg，I 0.2 mg。

表2 試驗飼料脂肪酸組成(占總脂肪酸的百分比)

1.2 試驗動物與飼養(yǎng)管理

1.3 樣本采集及分析

1.3.1 樣品采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束禁食24 h后取樣。每桶魚用丁香酚麻醉后稱重，計數(shù)，計算生長指標。每桶隨機選5尾魚量取體長、稱體重、肝臟重，計算形態(tài)學(xué)指標。再取5尾魚，吸干體表水分，編號于-20 ℃冰箱中保存，備測常規(guī)成分。另取10尾魚心臟采血，血液置于1.5 mL離心管中于-20 ℃冰箱過夜后4 000 r/min離心10 min，取上清液置于-80 ℃?zhèn)溆?，待測血清生化指標。剖取肝臟及肌肉，液氮冷存，然后轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱，備測肝臟酶活性及肝臟和肌肉脂肪酸含量。

1.3.2 常規(guī)成分分析

全魚和飼料常規(guī)成分采用國際標準方法[12]進行分析。樣品在105 ℃下烘干測定水分含量，凱氏定氮儀(KjeltecTM 8400，瑞典)測定樣品中粗蛋白質(zhì)含量，索氏抽提法(抽提劑為石油醚)測定樣品中粗脂肪含量，550 ℃馬弗爐灼燒法測定樣品中粗灰分含量。

1.3.3 脂肪酸含量分析測定

根據(jù)GB/T 21514—2008進行脂肪酸含量的測定，原理為用氫氧化鈉-甲醇溶液皂化，皂化物與三氟化硼-甲醇溶液反應(yīng)生成脂肪酸甲酯。用毛細管氣相色譜分離，色譜峰用已知組成的標準品進行鑒定，以內(nèi)標法定量。

1.3.4 血清生化指標測定

使用全自動生化分析儀(日立7600-110型)測定血清中甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、總膽固醇(T-CHOL)含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性，所需試劑盒均購自南京威特曼生物科技有限公司。

1.3.5 組織酶活性測定

肝臟中的過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)活性均使用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定，測定步驟按試劑盒說明書進行。

1.4 生長指標和形態(tài)學(xué)指標計算公式

增重率(weight gain rate, WGR, %)=[(末均重-初均重)/初均重]×100；特定生長率(specific growth rate, SGR, %/d)=[(ln末均重-ln初均重)/飼養(yǎng)天數(shù)]×100；飼料系數(shù)(feed conversion rate, FCR)=攝食飼料干重/(末均重-初均重)；成活率(survival rate, SR, %)=試驗結(jié)束時魚尾數(shù)/試驗開始時魚尾數(shù)；肝體比(hepatosomatic index, HSI, %)=(肝臟重量/魚體重)×100；肥滿度(condition factor, CF, g/cm3)=[末重(g)/體長3(cm)]×100。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準差表示，采用SPSS 20.0對試驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，若有顯著性差異則進行Duncan氏法多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 飼料n-3HUFA水平對多鱗生長性能和形態(tài)學(xué)指標的影響

由表3可見，WGR隨著飼料n-3HUFA水平增加呈現(xiàn)先上升后下降趨勢，2.12%組最高，顯著高于0.53%組和0.80%組(P<0.05)，與其他各組差異不顯著(P>0.05)。SGR隨著飼料n-3HUFA水平增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，2.12%組最高，顯著高于0.53%組和2.56%組(P<0.05)，與其他各組差異不顯著(P>0.05)。FCR隨著n-3HUFA水平的增加呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，2.12%組最低，顯著低于0.53%組(P<0.05)，與其他各組差異不顯著(P>0.05)。各組之間SR沒有顯著差異(P>0.05)。隨著飼料n-3HUFA水平的增加，HSI呈現(xiàn)出先下降后穩(wěn)定的趨勢，在2.12%組達到最低值，顯著低于0.53%組和0.80%組(P<0.05)，與其他各組無顯著差異(P>0.05)；而CF則呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢，在2.12%組達到最大值，顯著高于除1.62%組外的其他各組(P<0.05)。

表3 飼料n-3HUFA水平對多鱗生長性能和形態(tài)學(xué)指標的影響

同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

圖1 飼料n-3HUFA水平與多鱗WGR的折線模型

2.2 飼料n-3HUFA水平對多鱗體成分的影響

由表4可見，各組之間全魚水分、粗蛋白質(zhì)、粗灰分含量無顯著差異(P>0.05)。隨著飼料n-3HUFA水平的增加，全魚粗脂肪含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，1.62%組和2.12%組之間全魚粗脂肪含量無顯著差異(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)，其他各組之間無顯著差異(P>0.05)。

2.3 飼料n-3HUFA水平對多鱗血清生化指標的影響

由表5可見，飼料HUFA水平在0.53%～1.62%之間時，血清HDL-C含量顯著上升(P<0.05)，2.56%組血清HDL-C含量顯著高于除2.12%組外的其他各組(P<0.05)。血清LDL-C含量則是先上升后逐漸下降，在0.80%組達到最大值并顯著高于其他各組(P<0.05)。血清ALT、AST活性呈現(xiàn)出先下降后上升再下降的趨勢，血清ALT活性在1.22%組達到最低值并顯著低于其他各組(P<0.05)，血清AST活性則在0.80%組達到最低值并顯著低于其他各組(P<0.05)。隨著飼料n-3HUFA水平的增加，血清T-CHOL含量呈先上升后下降并穩(wěn)定的趨勢，血清TG含量呈先上升后下降的趨勢；0.53%組的血清T-CHOL、TG含量顯著低于其他各組(P<0.05)，0.80%組的血清T-CHOL、TG含量顯著高于其他各組(P<0.05)。

2.4 飼料n-3HUFA水平對多鱗肝臟酶活性的影響

由表6可見，各組之間的血清SOD和ACP活性沒有顯著差異(P>0.05)。2.12%組和2.56%組之間的血清AKP活性無顯著差異(P>0.05)，但顯著低于除1.62%組外的其他各組(P<0.05)。1.62%組的血清CAT活性最低，與1.22%組和2.12%組無顯著差異(P>0.05)，但顯著低于其他各組(P<0.05)。

2.5 飼料n-3HUFA水平對多鱗肝臟、肌肉脂肪酸組成的影響

由表8可見，隨著飼料n-3HUFA水平的提高，肌肉C18∶2n-6、C20∶4n-6含量呈降低趨勢，2.12%組和2.56組顯著低于其他各組(P<0.05)；肌肉C20∶5n-3、C22∶6n-3含量呈升高趨勢，2.56%組顯著高于其他各組(P<0.05)；肌肉C16∶0含量呈先升高后穩(wěn)定趨勢，在1.22%組達到最高。肌肉C16∶1n-9含量在1.62%組達到最高。

表4 飼料n-3HUFA水平對多鱗體成分的影響

Table 4 Effects of dietary n-3HUFA level on body composition of Sillago sihama %

表4 飼料n-3HUFA水平對多鱗體成分的影響

項目 Itemsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56水分 Moisture53.50±2.1257.50±4.9553.33±2.3158.50±0.7158.50±0.7154.00±1.11粗蛋白質(zhì) CP69.41±1.2168.40±2.9569.96±1.4267.56±1.2467.41±0.8370.57±2.36粗脂肪 EE17.16±1.82b16.73±0.71b17.52±1.40b21.34±0.83a20.50±0.39a16.27±0.69b粗灰分 Ash20.93±1.0619.01±2.1619.75±0.7320.76±0.5620.22±1.2021.61±0.95

表5 飼料n-3HUFA水平對多鱗血清生化指標的影響

Table 5 Effects of dietary n-3HUFA level on serum biological parameters of Sillago sihama

表5 飼料n-3HUFA水平對多鱗血清生化指標的影響

項目 Itemsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56高密度脂蛋白膽固醇HDL-C/(mmol/L)2.10±0.05e2.33±0.08d 2.59±0.05c2.76±0.06b2.80±0.02ab2.91±0.05a低密度脂蛋白膽固醇LDL-C/(mmol/L)1.76±0.08d4.25±0.13a3.35±0.18b3.30±0.06b3.24±0.08b2.87±0.06c谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT/(U/L)61.54±0.85a47.04±1.12c34.93±0.91e41.98±0.86d49.94±0.21b47.08±1.15c谷草轉(zhuǎn)氨酶AST/(U/L)228.05±3.61a148.60±3.08d187.06±0.40c191.26±0.51c204.20±1.14b188.67±2.89c總膽固醇T-CHOL/(mmol/L)4.83±0.21c7.96±0.09a6.58±0.36b6.67±0.11b6.98±0.05b6.92±0.06b甘油三酯 TG/(mmol/L)3.75±0.13e8.55±0.26a6.90±0.02c7.06±0.08bc7.30±0.13b6.28±0.05d

表6 飼料n-3HUFA水平對多鱗肝臟酶活性的影響

Table 6 Effects of dietary n-3HUFA level on liver enzyme activities of Sillago sihama

表6 飼料n-3HUFA水平對多鱗肝臟酶活性的影響

項目 Itemsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56超氧化物歧化酶 SOD/(U/mg prot)2.70±0.513.08±0.382.83±0.493.13±0.052.56±0.112.40±0.18酸性磷酸酶 ACP/(金氏單位/g prot)18.82±2.3220.39±1.5222.01±4.9018.90±2.4917.81±2.8318.68±2.26堿性磷酸酶 AKP/(金氏單位/g prot)38.72±6.99ab39.87±4.62ab43.51±4.14a30.01±0.10bc21.43±3.13c23.70±4.13c過氧化氫酶 CAT/(U/mg prot)22.06±1.87b37.06±1.99a16.15±5.80bc7.01±0.84c14.76±1.45bc23.72±9.19b

3 討 論

3.1 飼料n-3HUFA水平對多鱗生長性能和形態(tài)學(xué)指標的影響

表7 飼料n-3HUFA水平對多鱗肝臟脂肪酸組成的影響(占總脂肪酸的百分比)

Table 7 Effects of dietary n-3HUFA level on liver fatty acid composition ofSillago sihama (percentage of total fatty acids) %

表7 飼料n-3HUFA水平對多鱗肝臟脂肪酸組成的影響(占總脂肪酸的百分比)

脂肪酸Fatty acidsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.801.221.622.122.56C14∶02.90±0.042.90±0.012.89±0.012.90±0.032.90±0.002.92±0.01C16∶023.88±0.1923.72±0.0723.78±0.1323.86±0.0923.88±0.0923.85±0.06C16∶1n-98.86±0.128.52±0.048.75±0.088.83±0.078.83±0.168.67±0.30C18∶07.32±0.13b7.31±0.04b7.44±0.08ab7.40±0.06ab7.55±0.11a7.46±0.07abC18∶1n-930.92±0.06a27.49±0.54b25.84±0.71c24.93±0.34c22.63±1.01d22.13±0.36dC18∶2n-611.65±0.07a10.71±0.06b9.93±0.06c9.18±0.09d8.20±0.06e7.49±0.11fC18∶3n-31.25±0.06f1.43±0.03e1.54±0.03d1.66±0.03c1.77±0.02b1.86±0.03aC20∶00.45±0.060.43±0.030.46±0.020.44±0.030.47±0.010.45±0.03C20∶1n-60.70±0.020.73±0.010.71±0.010.69±0.020.73±0.030.74±0.03C20∶2n-60.68±0.04a0.65±0.04ab0.61±0.01bc0.58±0.01bc0.58±0.01c0.61±0.02bcC20∶3n-60.42±0.040.44±0.030.39±0.010.43±0.020.44±0.010.42±0.02C20∶4n-60.88±0.04e1.13±0.06d1.82±0.04c2.32±0.04b2.79±0.13a2.41±0.04bC22∶00.14±0.010.14±0.010.15±0.010.13±0.010.15±0.010.14±0.01C22∶1n-90.13±0.010.14±0.010.12±0.010.12±0.010.13±0.020.13±0.01C20∶5n-31.25±0.06f1.43±0.03e1.54±0.03d1.66±0.03c1.77±0.02b1.86±0.03aC22∶6n-33.92±0.09f5.91±0.04e6.80±0.06d8.52±0.06c9.92±0.06b10.94±0.25a

表8 飼料n-3HUFA水平對多鱗肌肉脂肪酸組成的影響(%總脂肪酸)

Table 8 Effects of dietary n-3HUFA level on muscle fatty acid composition of Sillago sihama (%TFA)

表8 飼料n-3HUFA水平對多鱗肌肉脂肪酸組成的影響(%總脂肪酸)

脂肪酸Fatty acidsn-3HUFA水平 n-3HUFA level/%0.530.81.221.622.122.56C14∶03.41±0.023.25±0.133.32±0.103.44±0.083.48±0.093.30±0.11C16∶024.92±0.05ab24.39±0.40b25.25±0.17a24.60±0.38ab25.00±0.16ab24.75±0.23abC16∶1n-94.30±0.14ab4.01±0.18b4.22±0.11ab4.43±0.08a4.28±0.13ab4.15±0.11abC18∶011.10±0.0810.81±0.3310.98±0.1910.88±0.1311.03±0.0810.99±0.21C18∶1n-914.69±0.0414.50±0.2514.65±0.1314.39±0.1914.56±0.1614.60±0.12C18∶2n-68.85±0.07a9.00±0.14a8.20±0.14b7.25±0.21c6.60±0.14d5.10±0.28eC18∶3n-30.85±0.070.95±0.211.05±0.211.20±0.141.10±0.141.15±0.07C20∶00.54±0.020.53±0.020.54±0.010.53±0.010.56±0.020.55±0.03C20∶1n-60.57±0.010.56±0.010.56±0.010.57±0.010.57±0.010.56±0.01C20∶2n-60.36±0.010.37±0.010.35±0.010.36±0.020.37±0.020.37±0.01C20∶3n-60.46±0.020.45±0.020.45±0.010.46±0.010.47±0.010.47±0.02C20∶4n-64.42±0.07a3.76±0.16b3.13±0.06c2.43±0.06cd1.83±0.08f2.10±0.06eC22∶00.26±0.010.27±0.010.27±0.020.25±0.010.26±0.020.26±0.01C20∶5n-37.81±0.09d8.51±0.09c8.75±0.19c9.28±0.05b9.52±0.10b9.95±0.09aC22∶6n-312.52±0.04d14.14±0.94c14.35±1.08c15.86±0.26b16.93±0.08b18.42±0.07a

3.2 飼料n-3HUFA水平對多鱗體成分的影響

3.3 飼料n-3HUFA水平對多鱗血清生化指標的影響

3.4 飼料n-3HUFA水平對多鱗肝臟酶活性的影響

3.5 飼料n-3HUFA水平對多鱗肝臟、肌肉脂肪酸含量的影響

4 結(jié) 論