鐘 光 邵 丹 胡 艷 施壽榮 宋志剛 童海兵*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所，揚州 225125；2.山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，泰安 271018；3.農(nóng)業(yè)部飼料和飼料添加劑有效性試驗機構(gòu)，揚州 225125)

高溫環(huán)境是影響動物生產(chǎn)、繁殖的重要因素之一，會造成細胞和組織損傷，使器官發(fā)育受阻，機體抗氧化功能降低，而血液指標會隨著組織細胞機能和新陳代謝而變化，研究中常用血清生化指標反映機體營養(yǎng)代謝情況。近年來許多學者報道了熱應激對血糖、血脂和載脂蛋白等生理生化指標的影響[1]。因此著眼于熱應激對血液指標的影響，是探索熱應激對機體損傷機理的基礎[2]。國內(nèi)外對熱應激進行了大量的研究。Sun等[3]研究表明，熱應激會使血液指標發(fā)生改變，影響機體脂肪代謝，劉梅等[4]試驗也表明，急性熱應激能提高肉仔雞血清中甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的含量，激活脂肪酸合成相關酶，造成脂肪沉積。黃毅[5]研究表明，熱應激能夠降低肝臟中過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，破壞機體的氧化還原平衡。Jin等[6]和Zhang等[7]研究則表明，熱應激能降低機體的抗氧化功能，而隨著熱應激時間的延長，機體會逐步建立新的氧化還原平衡。我國黃羽肉雞主要以農(nóng)戶地面散養(yǎng)為主，環(huán)境控制差，夏季極易產(chǎn)生熱應激，而當前研究主要以白羽肉雞、羅斯308等商品肉雞為主，對黃羽肉雞熱應激的研究較少。因此，本試驗旨在研究持續(xù)熱應激對黃羽肉雞生長性能、器官指數(shù)、血清生化指標和抗氧化功能的影響，為尋找緩解規(guī)?；S羽肉雞養(yǎng)殖過程中熱應激損傷的方法提供思路。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

隨機選取體重相近、體況健康的35日齡中速型“優(yōu)麻”黃羽肉雞192只，隨機分為常溫組(normal group)和持續(xù)熱應激組(persistent heat stress group)，每組8個重復，每個重復12只雞。2組均飼喂基礎飼糧。常溫組溫度為26 ℃，持續(xù)熱應激組給予34 ℃持續(xù)熱應激，相對濕度均為55%左右。試驗期14 d。分別在熱應激3、7、14 d后采集樣品。

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗在中國農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所試驗基地開展，采用3層籠養(yǎng)，雞籠規(guī)格為120 cm×80 cm×60 cm(長×寬×高)，按照黃羽肉雞飼養(yǎng)標準飼養(yǎng)，并使用北京庫藍科技有限公司生產(chǎn)的動物營養(yǎng)與代謝環(huán)控倉進行試驗。黃羽肉雞購自揚州立華畜禽有限公司，基礎飼糧按照我國《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)配制，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 測定指標與方法

1.3.1 生長性能

試驗開始時統(tǒng)計每個重復的體重，每次喂料時稱料重，采集樣品前統(tǒng)計每個重復的體重和剩余料重，計算持續(xù)熱應激1～14 d的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

1.3.2 器官指數(shù)

分別于熱應激3、7、14 d后從每個重復中隨機選取2只雞，稱重后宰殺，打開腹部皮膚，用游標卡尺測量腹部脂肪帶寬度，測量兩端和中間3處并取平均值，分離肝臟、脾臟、胸肌和腓腸肌并稱重。計算器官指數(shù)。

1.3.3 血清生化指標

分別于熱應激3、7、14 d后從每個重復中隨機選取2只雞，翅下靜脈采血并置于促凝管中，靜置、離心，分離血清并置于-20 ℃保存。用UniCel DxC 800 Synchron全自動生化分析系統(tǒng)(Beckman Coulter，美國)測定血清中葡萄糖(GLU)、尿酸(UA)、尿素氮(UN)、TG、總膽固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和鈣離子(Ca2+)的含量，試劑盒購自中山標佳生物科技有限公司。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1)微量元素為每千克飼糧提供 The microelements provided the following per kg of the diet：Mn 12.13 mg，F(xiàn)e 78.18 mg，Cu 9.26 mg，Zn 25.44 mg，Se 0.04 mg。2)維生素為每千克飼糧提供 The vitamins provided the following per kg of the diet：胡蘿卜素 carotene 0.06 mg，VE 13.88 mg，VB12.93 mg，VB21.56 mg，VB31.16 mg，煙酸 nicotinic acid 1.12 mg，VB67.74 mg，生物素 biotin 0.15 mg，葉酸 folic acid 0.32 mg，VB120.15 mg。3)代謝能為計算值，其余為實測值。ME was a calculated value, while the others were measured values.

1.3.4 血清抗氧化酶活性

分別于熱應激3、7、14 d后從每個重復中隨機選取2只雞，翅下靜脈采血并置于促凝管中，靜置、離心，分離血清并置于-20 ℃保存。測定血清中CAT、SOD、GSH-Px活性和一氧化氮(NO)含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3.5 肝臟抗氧化酶活性

分別于熱應激3、7、14 d后從每個重復中隨機選取2只雞，在肝臟相同部位取少量樣品置于凍存管中，進行勻漿和稀釋等前處理，測定肝臟中CAT、SOD、GSH-Px活性和NO含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2013進行統(tǒng)計和簡單處理后，使用SPSS 20.0軟件的t檢驗進行分析，并進行平均值比較，結(jié)果以平均值±標準差表示，并以P<0.05作為顯著差異，以0.05≤P<0.10作為有差異趨勢。

2 結(jié) 果

2.1 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞生長性能的影響

由表3可知，熱應激1～14 d，持續(xù)熱應激組的體重、平均日增重和平均日采食量顯著低于常溫組(P<0.05)，料重比顯著高于常溫組(P<0.05)。

表2 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞生長性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞器官指數(shù)的影響

由表3可知，熱應激3 d，持續(xù)熱應激組的脾臟指數(shù)顯著低于常溫組(P<0.05)。

表3 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞器官指數(shù)的影響

2.3 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞血清生化指標的影響

由表4可知，熱應激3 d，持續(xù)熱應激組的血清中UA、TG和Ca2+含量顯著低于常溫組(P<0.05)。熱應激7 d，持續(xù)熱應激組的血清中T-CHO和HDL含量顯著高于常溫組(P<0.05)，血清中TG含量顯著低于常溫組(P<0.05)。熱應激14 d，持續(xù)熱應激組的血清中GLU和TG含量顯著高于常溫組(P<0.05)，血清中T-CHO含量有高于常溫組的趨勢(P=0.098)。

表4 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞血清生化指標的影響

2.4 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞血清抗氧化功能的影響

由表5可知，熱應激3 d，持續(xù)熱應激組的血清中CAT活性有低于常溫組的趨勢(P=0.065)。熱應激7 d，持續(xù)熱應激組的血清中CAT、SOD活性和NO含量顯著低于常溫組(P<0.05)。

2.5 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞肝臟抗氧化功能的影響

由表6可知，熱應激3 d，持續(xù)熱應激組的肝臟中GSH-Px活性和NO含量顯著低于常溫組(P<0.05)，肝臟中SOD活性有低于常溫組的趨勢(P=0.060)。熱應激7 d，持續(xù)熱應激組的肝臟中NO含量顯著高于常溫組(P<0.05)，肝臟中CAT活性有高于常溫組的趨勢(P=0.072)。

3 討 論

3.1 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞生長性能的影響

大量試驗已經(jīng)證實，充足的采食量是動物生存和更好發(fā)揮生產(chǎn)潛力的必要保證。而熱應激會降低采食量，導致機體的生理機能會發(fā)生改變，并隨應激強度的加強，機體代謝發(fā)生紊亂，體重下降甚至出現(xiàn)負增長，免疫功能降低，甚至會導致死亡[8]。Deng等[9]和Lin等[10]研究表明，采食量下降是熱應激降低生長性能的根源，并直接導致機體的體重、飼料利用率、產(chǎn)蛋量和蛋品質(zhì)下降，從而降低機體的生長性能。Sohail等[11]研究也表明，熱應激能夠顯著降低42日齡肉仔雞的體重和

飼料利用效率，給生產(chǎn)帶來不利影響。本試驗結(jié)果表明，熱應激14 d后，黃羽肉雞的平均日增重、平均日采食量顯著降低，料重比顯著升高，說明持續(xù)熱應激降低了黃羽肉雞的采食、生長和飼料利用效率，從而降低了生長性能，這與前人研究結(jié)果一致。

表5 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞血清抗氧化功能的影響

表6 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞肝臟抗氧化功能的影響

3.2 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞器官指數(shù)的影響

器官指數(shù)是機體系統(tǒng)發(fā)育狀況的重要指標[12]，并直接影響機體的代謝水平。脾臟是禽類重要的免疫器官，咼于明等[13]研究發(fā)現(xiàn)，隨熱應激時間的延長，機體器官的發(fā)育會受到阻礙，免疫器官比重尤其是脾臟比重顯著降低。劉思當?shù)萚14]也通過試驗證明熱應激能夠降低肉仔雞的脾臟比重。王超等[15]則研究表明，熱應激對小鼠的器官發(fā)育無顯著影響，并認為出現(xiàn)不同的結(jié)果可能與試驗動物和試驗條件有關。本試驗結(jié)果表明，熱應激3 d，持續(xù)熱應激組的脾臟指數(shù)顯著低于常溫組，其他時間和器官均未出現(xiàn)顯著差異，這表明在本試驗條件下，持續(xù)熱應激對機體的器官發(fā)育無顯著作用，與前人研究結(jié)果不一致，可能是因為試驗采用的是黃羽肉雞，其抗性相對較高，對不良環(huán)境的適應能力相對較強所致。

3.3 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞血清生化指標的影響

3.4 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞血清抗氧化功能的影響

熱應激條件下，機體會產(chǎn)生過量自由基并通過各類反應破壞氧化還原平衡，使機體的正常秩序及生理代謝發(fā)生紊亂，機體自由基的清除主要依靠體內(nèi)各類抗氧化酶，包括SOD、CAT和GSH-Px等[20-21]。李葉涵等[22]研究表明，熱應激顯著增加了肉雞的過氧化程度，使血清丙二醛(MDA)含量增加，血清GSH-Px活性降低，機體的抗氧化功能被破壞。也有研究表明，NO是心血管機能的重要調(diào)節(jié)性物質(zhì)，也是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，具有廣泛的生理功能[23]。熱應激發(fā)生時，機體的NO可引起血管擴張，介導和調(diào)節(jié)心肺功能，調(diào)節(jié)體溫[24]。王松波等[25]通過試驗證明，熱應激會顯著降低血清GSH-Px的活性，進而導致血清MDA含量的增加。應激48 h后細胞中MDA含量增加，SOD活性降低[26]。本試驗結(jié)果表明，熱應激3 d，持續(xù)熱應激組血清CAT活性有低于常溫組的趨勢，而到熱應激7 d時，血清CAT、SOD活性顯著低于常溫組，說明本試驗條件下，持續(xù)熱應激能夠降低血清的抗氧化功能，且隨著熱應激時間的延長，血清抗氧化酶的活性持續(xù)降低，說明持續(xù)熱應激能隨時間的延長進一步加深對機體抗氧化功能的影響，這與前人研究結(jié)果相一致。熱應激14 d，血清中抗氧化酶的活性未出現(xiàn)顯著差異，可能是機體逐步適應熱環(huán)境并建立了新的氧化還原平衡，機體的抗氧化功能逐漸恢復所致。本試驗也發(fā)現(xiàn)在熱應激7 d時，持續(xù)熱應激組的血清NO含量顯著低于常溫組，這與前人研究結(jié)果不同，其原因仍需要進一步研究。

3.5 持續(xù)熱應激對黃羽肉雞肝臟抗氧化功能的影響

本試驗結(jié)果表明，熱應激3 d，持續(xù)熱應激組的肝臟GSH-Px活性顯著低于常溫組；熱應激7 d，持續(xù)熱應激組的肝臟NO含量顯著高于常溫組；而熱應激14 d，肝臟抗氧化酶的活性未出現(xiàn)顯著差異。這表明在本試驗條件下，持續(xù)熱應激降低了肝臟中的抗氧化酶活性，增加了NO的含量，而隨著時間延長，機體可能逐步適應熱環(huán)境并建立新的氧化還原平衡，因而各種酶活性的差異性消失。這與王斌等[24]和王松波等[25]的研究結(jié)果相同，而持續(xù)熱應激組在熱應激3 d，肝臟中NO含量顯著低于常溫組，這與前人研究結(jié)果不同，但與本試驗熱應激3 d后血清中NO含量的結(jié)果相符合，作者認為出現(xiàn)這種現(xiàn)象并非測定誤差造成的，可能與試驗動物、日齡和其他條件有關，具體原因仍需要進一步試驗的驗證。

4 結(jié) 論

持續(xù)熱應激能降低黃羽肉雞生長性能，影響機體脂肪代謝，降低機體的抗氧化功能。