劉莉，虞冰，吾建祥，馬婧妤，楊德毅，刁銀軍

(1.金華市農(nóng)產(chǎn)品質量綜合監(jiān)督檢測中心，浙江 金華 321017； 2.金華職業(yè)技術學院，浙江 金華 321007)

磺胺類藥物(Sulfonamides，SAs)是一類抗菌作用高效且價格低廉的化學合成抗生素，廣泛應用在生豬養(yǎng)殖過程中。SAs可在動物源性食品中殘留和蓄積，進入人體后，可破壞造血系統(tǒng)，引起溶血性貧血[1-2]，而且SAs可導致病原體產(chǎn)生抗藥性，導致機體發(fā)生過敏反應[3-6]，危害人體健康。歐盟及我國規(guī)定，磺胺類藥物在肉類食品中最高殘留限量為：單一磺胺類藥物不超過25 μg·kg-1，磺胺類藥物總量不超過100 μg·kg-1[7-8]。

隨著人們對肉類食品質量安全意識的提高，檢測機構對獸藥殘留檢測的質量控制標準也更加規(guī)范，通過嚴格控制質量控制程序、提升實驗室測試質控能力、增加實驗室間的檢測結果比對、溯源測量結果等措施增加測量結果的可靠性[9]。本文主要依據(jù)《畜禽肉中十六種磺胺類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法》(GB/T 20759—2006)對豬肉中3種磺胺類藥物殘留(磺胺甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺多辛)進行檢測，研究檢測方法的不確定度的來源、評定、合成以及結果表示，通過建立測定豬肉中3種磺胺類藥物殘留方法的測量不確定度的模型，評定測量不確定度，使不確定度作為提高分析檢測結果的精密度和準確性的理論依據(jù)[10-12]。

1 材料與方法

1.1 材料

豬肉購自金華農(nóng)貿市場。

LC-30A-LCMS-8050液相色譜儀串聯(lián)質譜儀、ESI-8050離子源、Sil-30AC自動進樣器(日本島津公司)；均質機(德國IKA公司)；N-EVAP氮吹儀(美國Organomation公司)；YQ116-01電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。乙腈、正己烷、無水硫酸鈉均為分析純；磺胺甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺多辛標準品(天津思億浩遠科技有限公司)。

1.2 液相條件

色譜柱，島津Shim-pack GISS C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.9 μm)。流動相A，0.2%甲酸水溶液，B，乙腈/甲醇(6∶4)溶液，初始濃度為10%。0～4.5 min，B線性變化至40%；4.5～4.6 min，40% B線性變化至95%；4.6～5.5 min，95% B保持不變；5.5～5.6 min，95% B線性變化至10%；5.6～9 min，10% B保持不變。流動相流速為0.4 mL·min-1，柱溫為40 ℃，進樣量為1 μL。

1.3 質譜條件

離子源為電噴霧離子源，離子源溫度300 ℃，掃描方式為正離子掃描，檢測方式為多反應檢測，電噴霧電壓5 000 V，加熱氣為空氣(10 L·min-1)，加熱溫度400 ℃，霧化氣為氮氣(3 L·min-1)，干燥氣為氮氣(10 L·min-1)，延遲時間3 ms，碰撞氣為氬氣(表1)。

表1 3種磺胺類藥物的檢測離子、對應質譜參數(shù)及保留時間

注：*為定量離子。

1.4 樣品處理

稱取5 g豬肉(精確至0.01 g)樣品，放在50 mL離心管中，向離心管中加入20 mL乙腈和20 g無水硫酸鈉后，均質1.5～2 min，3 000 r·min-1離心3 min，離心后的上清液倒入100 mL雞心瓶中，濾渣加入20 mL乙腈重復上述操作1次，合并的上清液一并加到雞心瓶中。向雞心瓶中加入10 mL異丙醇，50 ℃水浴旋蒸干，準確加入1 mL流動相和1 mL正己烷溶解旋干物，溶解液轉移至5 mL離心管中，1 min渦旋，3 000 r·min-1離心3 min，棄除上層，再加入1 mL正己烷，重復上述步驟1次。取下層清液，0.22 μm濾膜過濾后備用。

2 結果與分析

2.1 定量數(shù)學模型

2.2 不確定度的來源

豬肉中3種磺胺類藥物殘留測定不確定度來源主要包括2大類：磺胺類藥物標準品稱量、稀釋等過程中引入的不確定度和豬肉中磺胺類藥物在稱量、樣品進樣、樣品重復測定以及回收率等過程中引入的不確定度，計算合成不確定度(表2)。

2.2.1 標準品純度引入的不確定度

表2 磺胺藥物在豬肉中殘留量測定的不確定度

2.2.2 標準物質稱量引入的不確定度

2.2.3 標準物質定容引入的不確定度

2.2.4 標準溶液稀釋引入的不確定度

2.2.5 標準溶液配制引入的不確定度

2.2.6 擬合標準曲線引入的不確定度

3種磺胺類藥物標準系列溶液各取1 μL分別測定，根據(jù)UPLC-MS/MS方法測定得到相應的色譜峰面積Ai，用Excel擬合而成的線性回歸方程為A=ac+b。式中，a為斜率，b為截距?；前芳奏奏さ臉藴是€擬合回歸方程為：Y=118 276X+6 743.4，R2=0.999 2；磺胺間甲氧嘧啶的標準曲線擬合回歸方程為：Y=59 784.482 8X+5 907.422 4，R2=0.999 0；磺胺多辛的標準曲線擬合回歸方程為：Y=97 845X+5 902.2，R2=0.999 9。3種磺胺類藥物擬合標準曲線引入的不確定度為Urel(mc)。

2.2.7 豬肉樣品稱量引入的不確定度

2.2.8 進樣體積引入的不確定度

2.2.9 樣品重復檢測引入的不確定度

2.2.10 回收率引入的不確定度

2.3 擴展不確定度

根據(jù)《化學分析測量不確定度評定》(JJF 1135—2005)，對于大多數(shù)測量采用包含因子(k=2)進行衡量，則豬肉中磺胺類藥物殘留量的擴展不確定度U=Urel×2×X，由此得到UPLC-MS/MS方法同時檢測豬肉中3種磺胺類藥物殘留量的結果(表3)。

表3 豬肉中磺胺類藥物殘留量的擴展不確定度

2.4 影響不確定度因素的分析

采用UPLC-MS/MS方法同時檢測豬肉中3種磺胺類藥物殘留，檢測過程中引入的不確定度實驗過程主要是加標回收率、樣品重復測量、樣品稱量、擬合標準曲線、配制標準系列溶液、稀釋標準溶液、標準物質定容、標準物質稱量、標準品純度(圖1)。

圖1 不確定度評定結果分析

影響檢測的各個因素的不確定度范圍在0.000 408～0.026 720，磺胺多辛、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲嘧啶的合成不確定度在測定結果的比重分別是6.4%、5.9%和5.4%。從圖1可以看出，檢測磺胺多辛時，樣品重復檢測對實驗結果影響最大；檢測磺胺間甲氧嘧啶時，擬合曲線產(chǎn)生的不確定度對實驗結果影響最大；檢測磺胺甲嘧啶時，擬合曲線產(chǎn)生的不確定度對實驗結果影響最大。樣品稱量對3種藥物殘留實驗影響最小。

3 小結

在對豬肉中3種磺胺類藥物的分析檢測操作過程中，可以通過提高實驗操作人員的專業(yè)素質，增加平行樣品測定次數(shù)，并定期對氣相色譜儀進行檢定，來減小分析測定結果的不確定度，保證檢測結果的準確性。