李國雷，廖敏，呂婷，丁亞麗，陳樹森

(1.浙江省農業(yè)資源與環(huán)境重點實驗室，浙江 杭州 310058； 2.象山縣農業(yè)技術推廣中心，浙江 象山 315700; 3.浙江大學 環(huán)境與資源學院，浙江 杭州 310058)

沼氣工程已成為處理農村畜禽養(yǎng)殖糞便及作物秸稈等廢棄物，減少其環(huán)境污染的重要措施，但其發(fā)酵尾產物沼渣、沼液的去向成為環(huán)保及農業(yè)領域新的關注熱點。經過發(fā)酵，雖然尾產物中有機質含量顯著下降，但尾產物沼液中仍含有豐富的營養(yǎng)元素、氨基酸、腐植酸、生長素、水解酶、維生素等生物活性物質，具有生物肥料和生物農藥的雙重特性[1-2]。將沼液作為有機肥施于農田，不僅能夠提高作物產量、改善土壤品質，而且可以減少化肥和農藥的施用，提高資源利用效率[2-3]。但沼液養(yǎng)分含量低，直接施用肥效不高，物流成本大，缺乏相應的肥料標準，因而難以商品化。隨著膜處理技術的發(fā)展，研究表明，采用反滲透和納濾膜濃縮技術，可實現沼液10倍濃縮[4]，由此生產的濃縮沼液便于貯藏運輸、節(jié)約水肥成本，是一種良好的液體有機肥，有助于沼液肥的商品化。

沼液在水稻種植過程中的應用有不少報道，但結論卻存在較大差異。多數研究認同施用沼液可以提高水稻產量和質量，減輕病蟲害[1-5]，但沼液完全代替化肥施用對水稻生長及產量形成是不利的。不少研究發(fā)現，沼液浸種可以促進水稻種子的萌發(fā)，提升幼苗質量和抗逆性，不過相關報道多集中于不同沼液浸種時間對種子萌發(fā)的影響上[6-11]，這些研究采用的沼液均為原液，而有關濃縮沼液作為種子浸種劑的應用研究較少。甬優(yōu)12是寧波地區(qū)廣泛種植的超級稻品種，種子價格相對較貴，提高其發(fā)芽率和幼苗素質，對于節(jié)約種植戶的投入(生產成本)具有重要意義。鑒于此，本研究采用浙江普遍推廣的水稻甬優(yōu)12種子和濃縮10倍沼液作為研究對象，探討濃縮沼液浸種對水稻甬優(yōu)12種子萌發(fā)及秧苗素質的影響，以期為濃縮沼液的應用和促進其商品化提供科學支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗地點位于浙江省象山縣東陳鄉(xiāng)農業(yè)公共服務中心(科技創(chuàng)業(yè)園)，29°24′32.60″N，121°53′48.13″E，實驗室分析測定委托浙江省農業(yè)資源與環(huán)境重點實驗室進行。

采用人工選取的水稻甬優(yōu)12飽滿(精選)種子作為研究對象。試驗用沼液來自浙江寧波象山縣茅洋養(yǎng)殖場的沼氣工程點。沼液經納濾膜和反滲透組合技術進行濃縮，濃縮倍數為10倍。濃縮沼液的基本理化性質：pH值7.94，電導率11.7 mS·cm-1，有機質2.49 g·L-1，總氮、總磷、總鉀、銅和鋅的體積質量(濃度)分別為5 856.4、224.85、1 752.5、3.45、18.5 mg·L-1。

1.2 浸種及萌發(fā)

以去離子水稀釋純濃縮沼液，獲得0、10%、20%、40%、100%的濃度梯度(相當于總氮質量濃度為0、585.6、1 171.3、2 242.6、5 856.4 mg·L-1)。于小燒杯中，依次加入濃度梯度稀釋后的濃縮沼液100 mL，每杯放入200顆種子，使種子完全浸入沼液中。每個沼液處理濃度設置3個重復。為防浸種過程中沼液殘余微生物耗氧而導致水稻種子缺氧，將小燒杯置于恒溫振蕩器(TS-100C，上海天呈實驗儀器制造有限公司)上培養(yǎng)，設定溫度為30 ℃，轉速150 r·min-1。24 h后去除沼液，將種子轉移至光照培養(yǎng)箱[GZX-150，林茂科技(北京)有限公司]內催芽。種子置于玻璃培養(yǎng)皿中，上下各鋪1層濾紙，用去離子水于每日早晚2次濕潤濾紙，并以無明顯積水為準，每個培養(yǎng)皿放置20粒種子。培養(yǎng)箱設定t(光)∶t(暗)=12 h∶12 h，照度為6 000 lx，保持溫度在30 ℃。觀察出芽情況。

此外，以20%濃縮沼液為浸種劑，設置12、24、48、72 h浸種時間，到達相應浸種時間后，進行催芽培養(yǎng)，培養(yǎng)過程同上，觀察出芽情況。

1.3 幼苗活力與長勢測定

催芽3 d后不再有新的種子萌出，此時從每個培養(yǎng)皿中選出3株長勢最佳的幼苗，測定其莖長、莖粗、根數和總根長等形態(tài)學參數。同時，分別測定對應幼苗的呼吸速率。具體地，采用CIRAS-2光合測定系統(tǒng)聯(lián)合土壤呼吸室(PP Systems，美國)進行，每組沼液處理隨機取3個皿。測定條件以大氣為氣源，控制流速為200 mL·min-1，測定溫度為室溫(25 ℃)。

測定過程中保持幼苗表面濕潤，儀器穩(wěn)定后記錄CO2摩爾分數差值(△x)。測定結束后稱出幼苗鮮重(m)，并以此換算出單位質量幼苗每小時的呼吸量，即呼吸速率(R)：

式中：v為氣體流速；24.7為室溫和標準大氣壓下空氣的平均摩爾體積(L·mol-1)；60為時間單位換算率(min·h-1)；R以CO2計(μmol·g-1·h-1)。

最后將每皿幼苗的芽(莖葉)和根自基部切開，烘干至恒重后稱量，換算為單株平均干重。

1.4 數據處理與分析

采用Excel 2013和SPSS 17.0軟件進行數據處理和分析。

2 結果與分析

2.1 濃縮沼液浸種濃度對甬優(yōu)12水稻種子萌發(fā)的影響

由圖1可知，隨著浸種用濃縮沼液濃度增加(0～20%)，甬優(yōu)12水稻種子萌發(fā)率逐漸增加，當濃縮沼液濃度為20%時種子萌發(fā)率最高(88.3%)，之后，隨著浸種用濃縮沼液濃度增加(20%～100%)，種子萌發(fā)率下降，全部用濃縮沼液時，水稻種子的發(fā)芽率只有4.1%。這說明，當浸種用濃縮沼液添加濃度在20%以下時對甬優(yōu)12水稻種子萌發(fā)有促進作用，濃度過高反對種子萌發(fā)有抑制作用，最佳浸種用液為20%的濃縮沼液。之所以一定量的濃縮沼液可以提升種子的發(fā)芽率，主要是因為沼液中含有豐富的氮、磷、鉀等營養(yǎng)物質和各類氨基酸、赤霉素、生長素等多種活性物質，有利于水稻種子的新陳代謝，對水稻生長有調控作用[1-3]，但當沼液超出一定濃度后，由于電解質濃度過高，對種子形成脅迫，不利于種子的新陳代謝，導致種子的萌發(fā)與生長受到抑制[12]。

圖1 不同濃度濃縮沼液浸種對甬優(yōu)12水稻種子萌發(fā)的影響

2.2 濃縮沼液浸種時間對水稻甬優(yōu)12種子萌發(fā)的影響

由圖2可知，隨著浸種時間延長，甬優(yōu)12水稻種子萌發(fā)率先增加，至浸種24 h時種子萌發(fā)率達到最大(88.3%)，之后隨著浸種時間延長，種子萌發(fā)率下降，浸種72 h時，水稻種子的發(fā)芽率只有75.2%。說明浸種24 h以下對甬優(yōu)12水稻種子萌發(fā)具有促進作用，但浸種時間過長會抑制種子萌發(fā)。20%濃縮沼液的最佳浸種時間為24 h。浸種時間過長之所以會抑制水稻種子的萌發(fā)，主要是因為受到誘導和激發(fā)的種子處于厭氧環(huán)境，其呼吸作用受到抑制[13]，這一現象在其他研究中也得到證實[7-8]。

圖2 濃縮沼液浸種時間對甬優(yōu)12水稻種子萌發(fā)的影響

2.3 濃縮沼液浸種濃度對水稻甬優(yōu)12幼苗質量的影響

由圖3可知，隨著浸種用濃縮沼液濃度的增加，甬優(yōu)12水稻幼苗的芽長、莖粗、根數、總根長及單株生物量(干重)等指標，在濃縮沼液濃度20%以下時逐漸增大，至濃縮沼液添加量20%時，各指標達到最大，幼苗的芽長、莖粗、根數、總根長及生物量分別達到4.6 cm、0.91 mm、6.2條、7.00 cm和1.53 mg，之后，各指標開始下降，至全部為濃縮沼液時，水稻幼苗的芽長、莖粗、根數、總根長及單株生物量(干重)分別下降至0.4 cm、0.53 mm、1.2條、1.20 cm、0.10 mg，其中，芽長、根數和總根長在所有濃縮沼液濃度處理間均存在顯著差異。結果說明，當濃度為20%以下時，濃縮沼液浸種有助于提升甬優(yōu)12水稻幼苗的質量，但添加濃度過高則會抑制水稻幼苗生長。20%的濃縮沼液對提升幼苗質量效果最佳。

圖3 不同濃度濃縮沼液浸種對甬優(yōu)12水稻幼苗質量的影響

2.4 濃縮沼液浸種濃度對水稻甬優(yōu)12幼苗呼吸速率的影響

由圖4可知，隨著浸種用濃縮沼液濃度增加，甬優(yōu)12水稻幼苗呼吸速率在濃縮沼液濃度20%以下時逐漸升高，至濃度20%時水稻幼苗呼吸速率達到最大(33.6 μmol·g-1·h-1)，之后水稻幼苗呼吸速率開始下降，至全部為濃縮沼液時，水稻幼苗呼吸速率只有1.1 μmol·g-1·h-1，所有濃縮沼液濃度處理間水稻幼苗呼吸速率均存在顯著差異。這進一步說明當濃縮沼液濃度為20%以下時，浸種可提升水稻甬優(yōu)12幼苗的活力，但過高的添加濃度則不利于水稻幼苗呼吸，幼苗活力下降，說明濃縮沼液最佳浸種用濃度為20%。

圖4 不同濃度濃縮沼液浸種對甬優(yōu)12水稻幼苗呼吸速率的影響

3 小結

本研究表明，采用一定濃度的濃縮沼液浸種一定時間，將顯著提升水稻甬優(yōu)12種子的發(fā)芽率，同時水稻幼苗質量和活力亦顯著增強，其最佳浸種濃度為20%，最佳浸種時間為24 h。最佳條件下浸種并催芽3 d后，水稻甬優(yōu)12種子的發(fā)芽率達到88.3%，幼苗芽長、莖粗、根數、總根長和單株生物量(干重)分別達到4.6 cm、0.91 mm、6.2條、7.00 cm和1.53 mg，水稻幼苗呼吸速率達到33.6 μmol·g-1·h-1。采用超出上述濃度的濃縮沼液或時間浸種時，將顯著抑制種子的發(fā)芽率及幼苗的質量與活力。