姚海航 于 文

（西安開米股份有限公司，陜西 西安 710075）

QB/T 2738-2012《日化產(chǎn)品抗菌抑菌效果的評價方法》中，用抑菌環(huán)法檢測洗滌劑的抑菌率，標準中要求所用載體為新華一號定性濾紙，而新華定性濾紙分為定性快速濾紙、定性中速濾紙、定性慢速濾紙。文章研究了定性快速濾紙和定性慢速濾紙對同一實驗結(jié)果的影響，以期望對標準加以完善。

1 實驗與方法

1.1 實驗儀器及試劑

1.1.1 實驗設(shè)備

生物安全柜，型號：BSC-1100II A2-x，濟南鑫貝西生物技術(shù)有限公司；抑菌劑載體（5mm直徑圓形新華定性快速濾紙片和定性慢速濾紙片，經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理后，置120o烤干2h，保存?zhèn)溆茫?；恒溫生化培養(yǎng)箱，上海一恒科技儀器有限公司；TYJ-2A菌落計數(shù)器，上海宏匯電器廠；渦旋儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；微量移液器（5mL-50mL，可調(diào)式）；游標卡尺，成都量具刃具總廠；玻璃平板；接種環(huán)；玻璃試管；棉拭子；刻度吸管5mL、1mL。

1.1.2 生化試劑

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（pH7.2～7.4），北京路橋技術(shù)有限公司；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（pH7.2～7.4），北京路橋技術(shù)有限公司；磷酸鹽緩沖溶液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）；標準硬水（硬度342mg/L）。

1.2 實驗菌種

試驗菌株為大腸埃希菌（ATCC 25922）、金黃色葡萄球菌（ATCC 6538），均來源于中國普通微生物菌種保藏管理中心[3]。

1.3 試驗樣品

9個樣品均采購于大型超市，且標貼宣稱具有抑菌功能的洗手液、洗衣液、餐具凈的產(chǎn)品。

2 試驗方法

2.1 菌懸液的配制[3]

取實驗菌種（5代）其24h的新鮮培養(yǎng)物，在生物安全柜里用接種環(huán)挑取一定量的菌落于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的試管中，震蕩搖勻，再用裝有一定量的PBS試管進行稀釋。要求濃度為：取0.1mL滴入5.0mL PBS液內(nèi)，回收菌數(shù)在1×104～9×104cfu/mL備用。

2.2 操作程序[1]

2.2.1 抑菌片的制備

分別取無菌干燥的直徑為5mm的濾紙片（定性快速濾紙和定性慢速濾紙），每片滴加實際使用樣品濃度溶液20mL，然后將濾紙片平放于清潔無菌的平板中，開蓋置于恒溫生化培養(yǎng)箱（37℃）中烘干，備用。

2.2.2 陰性對照樣片的制備

取無菌干燥的直徑為5mm的濾紙片（定性快速濾紙和定性慢速濾紙），每片滴加無菌純水20mL，干燥后備用。

2.2.3 染菌平板的制備[2]

用無菌棉拭蘸取濃度為1×104～9×104cfu/mL試驗菌懸液500mL，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板表面上均勻涂抹3次，每次涂抹轉(zhuǎn)動平板60o。最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周。蓋好平板，置于室溫干燥5min。

2.2.4 樣片的貼放

用無菌鑷子取抑菌樣片貼放染菌平板表面，每個平板放4片試驗樣片，1片陰性對照，共計5片。各樣片中心距離25mm以上，與平板邊緣相聚15mm以上。貼好以后，用無菌鑷子輕壓樣片，使其緊貼于平板表面。蓋好平皿，將平板倒置在37℃的生物培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)16h～18h觀察結(jié)果。用游標卡尺測量抑菌環(huán)的直徑（包括樣片）并記錄。試驗重復(fù)3次。

3 結(jié)果

抑菌環(huán)實驗結(jié)果表明：日化產(chǎn)品在用不同的載體（定性慢速濾紙比定性快速濾紙）測試，抑菌環(huán)直徑有差異（表1）。

從表1可知：對于液體洗滌劑、洗手液和餐具清潔劑類產(chǎn)品，對于金黃色葡萄球菌和大腸桿菌而言，慢速定性濾紙的抑菌圈均大于快速定性濾紙的抑菌圈。

4 結(jié)論

試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)：抑菌環(huán)試驗法因載體的不同，對同一產(chǎn)品的抑菌效果存在明顯差異，采用定性慢速濾紙作為載體的抑菌效果優(yōu)于定性快速濾紙。對同一產(chǎn)品，均采用QB/T 2738-2012《日化產(chǎn)品抗菌抑菌效果的評價方法》進行抑菌環(huán)測試，采用不同的載體，可能會出現(xiàn)不同的實驗結(jié)果。該標準在后續(xù)的修訂過程中，應(yīng)對載體所用的濾紙做出明確的規(guī)定，以保證實驗的一致性。

表1 日化產(chǎn)品抑菌試驗結(jié)果