童 輝

江西省鷹潭市人民醫(yī)院腫瘤科，江西鷹潭 335000

p140Cap基因目前被認(rèn)為是一種抑癌基因，在乳腺癌細(xì)胞如MCF7和T47D中有表達(dá)，通過去除和獲得p140Cap，發(fā)現(xiàn)影響乳腺癌細(xì)胞運(yùn)動、侵襲和體內(nèi)腫瘤生長。p140Cap蛋白在多種腫瘤組織和細(xì)胞株中表達(dá)減弱或者消失，包括腎癌、肺癌、前列腺癌等[1-2]。

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個復(fù)雜過程，乳腺癌浸潤性生長和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移導(dǎo)致患者預(yù)后差，乳腺癌切除術(shù)后容易引起肝臟和肺臟轉(zhuǎn)移，單純的手術(shù)技巧改善無法降低乳腺癌復(fù)發(fā)的風(fēng)險。乳腺癌的化療目前處于一個瓶頸期，研究發(fā)現(xiàn)p140Cap在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯降低或缺失，提示p140Cap可能是一個抑癌基因，其在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。

p140Cap蛋白通過調(diào)節(jié)整合素和生長因子受體在腫瘤的形成中起著抑制腫瘤的作用[3]。整合素是細(xì)胞表面重要受體，通過將細(xì)胞外基質(zhì)的化學(xué)成分和力學(xué)狀態(tài)信息傳入細(xì)胞，介導(dǎo)細(xì)胞和細(xì)胞間及細(xì)胞外基質(zhì)間相互作用。對于癌癥，整合素也為腫瘤遷徙性散布所必需，如腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲和目標(biāo)組織的定植[4]。p140Cap蛋白作為整合素下游重要的接頭分子蛋白，可能起著調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲作用，因此通過研究p140Cap蛋白在乳腺癌中的表達(dá)，不但能預(yù)測乳腺癌的預(yù)后，而且有可能作為乳腺癌治療的潛在靶點(diǎn)。本研究通過免疫組化技術(shù)檢測p140Cap在乳腺癌中的表達(dá)及臨床預(yù)后意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取符合納入標(biāo)準(zhǔn)的2012年6月～2017年6月在鷹潭市人民醫(yī)院就診住院的246例原發(fā)性乳腺癌患者作為病例組，選取60例乳腺癌旁組織作為對照組。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測p140Cap在246例乳腺癌組織和60例乳腺癌旁組織的表達(dá)水平，利用統(tǒng)計學(xué)方法分析p140Cap在乳腺癌和癌旁組織中的表達(dá)水平、在臨床參數(shù)（年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期）中及在分子生物學(xué)指標(biāo)[雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長因子受體（HER-2）]中的表達(dá)水平和相關(guān)性。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

用于免疫組織化學(xué)染色的一抗多克隆兔抗人p140Cap抗體購自Novus，即用型快捷免疫組織化學(xué)MaxVision試劑盒、DAB顯色試劑盒購于福州邁新生物技術(shù)公司。

1.4 免疫組織化學(xué)的步驟

按照抗體及免疫組織化學(xué)試劑盒說明書進(jìn)行，將組織切片脫蠟和水化，放置枸櫞酸鈉緩沖液中高溫抗原修復(fù)，PBS溶液沖洗3次，滴加1︰50稀釋滴度的一抗，PBS溶液沖洗5次，滴加辣根過氧化物酶二抗，室溫30 min，最后，經(jīng)PBS洗滌后DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片。

1.5 免疫組化結(jié)果分析

光學(xué)顯微鏡下觀察每張切片，選擇4個不同視野，按照染色程度，計算p140Cap陽性和陰性細(xì)胞。每個視野的得分按照細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色陽性細(xì)胞所占范圍乘積來判斷。評分標(biāo)準(zhǔn)：①染色強(qiáng)度計分中，不染色記為0分，淡黃色記為1分，淺褐色記為2分，深褐色記為3分。②染色面積計分中，0～25%細(xì)胞染色記為1分，＞25%～＜50%細(xì)胞染色記為2分，50%～75%細(xì)胞染色記為3分，＞75%細(xì)胞染色記為4分。結(jié)果取兩者評分之乘積，染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比乘積≥6分為免疫反應(yīng)高表達(dá)，乘積＜6分判為低表達(dá)[5]。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p140Cap在乳腺癌組織和癌旁組織中表達(dá)的比較

p140Cap在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率為33%，在乳腺癌旁組織中的陽性表達(dá)率為70%，p140Cap在乳腺癌組織中的表達(dá)降低。p140Cap在乳腺癌組織和乳腺癌旁組織中表達(dá)陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 p140Cap在乳腺癌組織和癌旁組織中表達(dá)的比較[n（%）]

2.2 免疫組化檢測p140Cap在乳腺癌旁組織中表達(dá)圖像

p140Cap在乳腺癌組織中的高表達(dá)和低表達(dá)如下圖（圖 1）。

圖1 免疫組化檢測乳腺癌中p140Cap蛋白表達(dá)（細(xì)胞質(zhì)×200）

2.3 免疫組化檢測p140Cap在乳腺癌旁組織中表達(dá)圖像

p140Cap在乳腺癌旁組織中的高表達(dá)和低表達(dá)見圖2。

圖2 免疫組化檢測乳腺癌旁組織中p140Cap蛋白表達(dá)（細(xì)胞質(zhì)×200）

2.4 p140Cap在乳腺癌組織中的表達(dá)同臨床病理參數(shù)關(guān)系分析

p140Cap的表達(dá)同乳腺癌患者的腫瘤直徑、年齡、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、ER狀態(tài)、PR狀態(tài)、HER-2狀態(tài)有關(guān)（P＜0.05），而與患者的腫瘤分期無關(guān)（P＞0.05）（表2）。

表2 p140Cap在乳腺癌組織中的表達(dá)同臨床病理參數(shù)關(guān)系分析[n（%）]

3 討論

p140Cap由srcin1基因編碼，在人類、小鼠、大鼠、狗、牛和斑馬魚srcin1基因編碼是保守的[6-7]。在乳腺癌中，p140Cap通過激活Csk的Src負(fù)性調(diào)節(jié)物，影響乳腺癌的侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[8-11]。

細(xì)胞凋亡指的是在內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定狀態(tài)下，由基因控制的細(xì)胞的自主的、有序的死亡。既往研究發(fā)現(xiàn)在大腸癌中，惡性腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)凋亡，可以對腫瘤治療起重要作用，p140Cap表達(dá)降低會引起大腸癌凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長，增強(qiáng)了癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移的能力[12]。

體外實(shí)驗(yàn)顯示，p140Cap降低乳腺癌細(xì)胞在ECM蛋白中的擴(kuò)散能力、遷移和侵襲能力。p140Cap靜默加速細(xì)胞在ECM上早期擴(kuò)散，誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞樣變形，并且增加細(xì)胞移動和侵襲[13]。在乳腺癌細(xì)胞中，p140Cap可能通過Src和Rac激活表達(dá)控制非依賴性生長，p140Cap高表達(dá)抑制體內(nèi)腫瘤生長，p140Cap低表達(dá)增加體內(nèi)腫瘤的形成[14-15]。

p140Cap在乳腺癌中的表達(dá)程度同乳腺癌患者的腫瘤直徑、年齡、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、ER、PR、HER-2狀態(tài)有關(guān)，而與患者的腫瘤分期無關(guān)。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究，p140Cap在乳腺癌中作為一種腫瘤抑制劑，在細(xì)胞增殖、腫瘤生長中具有廣泛的作用。

綜上所述，目前p140Cap與乳腺癌的研究甚少，本研究提示p140Cap在乳腺癌中起著負(fù)性調(diào)節(jié)作用，其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。