馮雪，李帥，鄭欣，蒼鵬，楊紅育

（長春生物制品研究所有限責任公司，吉林長春 130012）

注射用重組人干擾素α2a是由高效表達人干擾素α2a基因的大腸桿菌，經發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的凍干制劑，含適宜穩(wěn)定劑，不含防腐劑和抗生素[1]，主要用于治療病毒性疾病及腫瘤。水分含量是注射用重組人干擾素α2a的一項重要指標，影響藥品的外觀、性狀、含量、穩(wěn)定性等。水分含量越低，藥品越能長期穩(wěn)定的儲存。

本文參照《中國藥典》2015年版通則0832水分測定法中容量滴定法，利用水分測定儀-卡氏干燥爐聯(lián)用技術測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量，其原理為樣品在干燥爐內加熱，使其水分在高溫下蒸發(fā)釋放，蒸發(fā)出來的水分由干燥載氣（空氣或氮氣）推送入水分測定儀進行測定[2]。聯(lián)用干燥爐可自動完成測定，提高工作效率；密封蓋能夠保證樣品在測定過程中不受環(huán)境的影響，同時避免了樣品在滴定杯中的相互干擾，使滴定杯始終保持良好的狀態(tài)，測定結果重復性好，準確度高。

1 實驗部分

1.1 主要儀器

V30水 分 測 定 儀（METTLER TOLEDO）、Stromboli加熱爐樣品轉換器（METTLER TOLEDO）、XS205型電子天平（METTLER TOLEDO）。

1.2 試劑

無水甲醇（國藥集團化學試劑有限公司）、1 mg/mL費休氏試液（Merck）、2 mg/mL費休氏試液（Merck）、5 mg/mL費休氏試液（Merck）、固體標準水（Merck）。

1.3 實驗樣品

注射用重組人干擾素α2a（長春生物制品研究所有限責任公司）。

1.4 測定步驟

1.4.1 操作條件

加熱爐樣品轉換器加熱溫度：（150±2）℃；加熱爐樣品轉換器加熱時間：10 min；費休氏試液滴定度：1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL。

1.4.2 樣品測定

啟動儀器，加入適量無水甲醇，待儀器平衡后，用10 μL微量進樣器量取經稱量的10 μL純化水（精確至0.01 mg）加入到滴定杯中，儀器顯示質量后按“確定”鍵，儀器開始自動滴定，到達終點時，屏幕顯示費休氏試液的滴定度。按此法標定三次，取三次標定的平均值，即為本次費休氏試液的滴定度。

將注射用重組人干擾素α2a搗碎，稱取樣品適量（精確至0.01 mg），記錄樣品質量，將樣品密封后置于卡氏干燥爐上。在水分測定儀輸入樣品質量，用費休氏試液滴定至終點。

2 結果與討論

2.1 加熱爐樣品轉換器加熱溫度及終止時間的選擇

加熱爐樣品轉換器的溫度直接影響樣品中水分的蒸發(fā)；終止條件也是影響測定結果的關鍵因素，加熱時間太短，樣品中的水分未完全蒸發(fā)，導致測定結果偏低；加熱時間太長，則延長了測定時間，環(huán)境因素的影響變大，因此需要選擇合適的終止時間和加熱溫度[3]。試驗分別選擇自動終止、加熱10 min和加熱15 min作為終止條件，在不同的終止條件下分別選擇了140、150、160 ℃作為加熱溫度，每種條件下連續(xù)進樣6次。結果見表1、表2、表3。結果表明，當選擇自動終止條件時，三個加熱溫度的樣品結果的RSD相對較大；當選擇10 min和15 min作為終止條件時，加熱溫度為150 ℃和160 ℃時，樣品結果的差異較小。因此選擇加熱溫度150 ℃，終止條件為10 min比較合適。

表1 自動終止條件下不同加熱溫度的樣品水分測定結果

表2 加熱10 min條件下不同加熱溫度的樣品水分測定結果

表3 加熱15 min條件下不同加熱溫度的樣品水分測定結果

2.2 稱樣量的選擇

在150 ℃加熱10 min的測定條件下，樣品稱樣量也會對測定結果有影響[4]。分別稱取0.03g、0.04g、0.05g、0.06g、0.07g、0.08g、0.09 g、0.10g、0.11g、0.12g的 樣品質量，考察樣品稱樣量對測定結果的影響，結果見圖1。從圖中可以看出，儀器測得樣品水分含量隨著加入樣品質量的增大逐漸趨于穩(wěn)定，當單次加入的樣品質量較小時，測得結果偏高[5]。稱量樣品質量在50～120 mg結果無明顯差異。

圖1不同樣品質量的測定結果

2.3 費休氏試劑滴定度對測定結果的影響

在150 ℃加熱10 min的測定條件下，不同滴定度的費休氏試劑對測定結果有影響。分別采用滴定度為1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL的費休氏試劑，考察不同滴定度的費休氏試劑對測定結果的影響，結果見表4。結果表明，不同滴定度的費休氏試液對測定結果無明顯差異。

表4 不同滴定度的測定結果%

2.4 重復性試驗

在150 ℃加熱10 min的測定條件下，采用滴定度為1 mg/mL的費休氏試劑，用卡氏干燥爐自動進樣法測定樣品中水分含量，樣品測定6次，計算6次結果的相對標準偏差（RSD%）數據見表5。結果表明測定結果具有良好的重復性。

表5 重復性試驗結果

2.5 回收率試驗

在樣品中加入精密稱取的標準水加標水平分別為 0.3 mg、0.4 mg、0.5 mg，在 150 ℃加熱 10 min的測定條件下，采用滴定度為1 mg/mL的費休氏試劑，每個加標水平重復測定3次，經測定，加標回收率在91.8%～100.1%，結果見表6。

3 結論

本文考察了影響水分測定儀-卡氏干燥爐聯(lián)用法測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量的因素，建立了該制品水分的檢測方法。研究結果表明，加熱溫度及加熱時間對該制品水分的測定具有一定影響。實驗也考察了樣品稱量質量及費休氏試劑滴定度對測定結果的影響。當樣品稱量質量較小時，天平稱量誤差及儀器漂移引起的誤差將對實驗結果產生顯著影響，實驗結果明顯偏高；費休氏試劑滴定度對測定結果無顯著影響。實驗使用固體標準水對實驗方法進行確證，實驗結果相對穩(wěn)定。因此，采用水分測定儀-卡氏干燥爐聯(lián)用測定注射用重組人干擾素α2a中水分含量，選擇干燥爐150 ℃加熱10 min，樣品稱量質量50～120 mg作為檢測條件時，其操作過程方便簡潔，且方法準確可靠，符合實際樣品的檢測需求。

表6 準確度試驗結果