周穎，羅小菊，常秀亭，李備

（海南省食品檢驗(yàn)檢測中心，海南海口 570314）

葛根枳椇軟膠囊以葛根提取物與枳椇子提取物為主要原料，對化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)功能[1]。葛根為豆科植物野葛的干燥根，其性涼，味甘、辛，具有解肌退熱、生津止渴、解酒毒等功效[2]。枳椇子為鼠李科拐棗屬植物枳椇的干燥成熟種子，其主要功能為清熱利尿、止渴除煩、解酒毒，用于熱病煩渴、呃逆、小便不利[3]。近年來，乙醇中毒及飲酒導(dǎo)致的疾病呈現(xiàn)上升趨勢。急性乙醇中毒是臨床常見的急重癥，其對肝臟損傷較為常見[4]。為了驗(yàn)證解葛根枳椇軟膠囊對肝臟的保護(hù)作用，進(jìn)行了以下研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

SD大鼠，SPF級，40只，成年雄性，體重140～160 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK（粵）2008-0002。飼養(yǎng)條件：溫度20～26 ℃，相對濕度40%～70%，環(huán)境等級為屏障系統(tǒng)，動物自由進(jìn)食、水，12 h/12 h明暗交替。

1.2 受試樣品

金奧力牌葛根枳椇軟膠囊，威海紫光生物科技開發(fā)有限公司生產(chǎn)。膠囊內(nèi)容物為棕黃色黏稠油狀液體，每100 g含總黃酮510 mg。密封、避光、置陰涼干燥處保存。人體推薦用量為每日2次，每次2粒。成人體重以60 kg計(jì)，人體推薦劑量為33 mg/kg，以膠囊內(nèi)容物作為受試樣品進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3 主要儀器和試劑

1.3.1 儀器

電子分析天平(METTLER TOLEDO XS204)，超細(xì)勻漿器(Fluko F6/10)，離心機(jī)，全自動生化分析儀(日立7100)，紫外可見分光光度計(jì)(Thermo EVOLUTION 300)，酶標(biāo)儀(Thermo MK3)，冰凍切片機(jī)(Leica CM1900UV)，顯微鏡 (Leica DM2500)等。

1.3.2 試劑

丙二醛測定測試盒、甘油三酯測定試劑盒及還原型谷胱甘肽測定試劑盒均來源于南京建成生物工程研究所。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

動物按體重隨機(jī)數(shù)字法分為4組，分別為空白對照組、模型對照組、受試樣品低、高劑量組，每組8只。分組后低、高劑量組分別灌胃給予16.7、66.7 mg/mL的受試樣品，10 mL/kg，空白和模型對照組均灌胃給予等體積的溶媒玉米油，每日一次，連續(xù)30日。末次給藥結(jié)束后，模型對照組及低、高劑量組一次灌胃給予50%乙醇12 mL/kg，空白對照組給等體積純化水，建立肝損傷模型。

生化檢測指標(biāo)及組織病理學(xué)檢查禁食16 h后，腹腔注射60 mg/kg戊巴比妥鈉溶液進(jìn)行麻醉處死動物，各組大鼠分別取出肝臟，其中一部分（左葉）用作冷凍切片，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，觀察脂滴在肝臟中的分布、范圍和面積并進(jìn)行評分；另一部分用于制成肝勻漿分別測定丙二醛（MDA）、還原性GSH及甘油三酯（TG）含量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

采用SPSS 20.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)以x—±SD表示，采用方差分析，比較組間差異。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

受試樣品對酒精性肝損傷大鼠的肝組織過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛（MDA）以及甘油三酯（TG）含量的影響，見表1。

從表1可見，與空白對照組比較，肝損傷模型對照組的MDA、TG含量明顯升高，且兩者的差異具有顯著性（P＜0.05、P＜0.01），表明酒精性肝損傷模型成立。

表1 葛根枳椇軟膠囊對肝勻漿MDA、還原型GSH、TG的影響（±SD）

表1 葛根枳椇軟膠囊對肝勻漿MDA、還原型GSH、TG的影響（±SD）

注：#、##分別表示與空白對照組比較P＜0.05、P＜0.01；*、**分別表示與模型對照組比較P＜0.05、P＜0.01。

組別 劑量/（mg/kg） 動物數(shù) MDA/（nmol/mg） GSH/（mg/g） TG/（mmol/l）空白對照組 0 8 6.80±1.11 46.25±5.03 1.70±0.418模型對照組 0 8 10.44±2.90# 32.86±7.43## 2.54±0.60##低劑量組 167 8 7.38±1.87* 32.51±5.69 1.90±0.33*高劑量組 667 8 6.94±1.25** 36.07±5.99 1.26±0.22**

受試樣品各劑量組大鼠的肝組織MDA含量均低于肝損模型對照組，與肝損模型對照組的差異均有顯著性（P＜O.05），表明葛根枳椇軟膠囊具有降低乙醇性損傷的大鼠肝組織中過氧化脂質(zhì)含量的作用。

受試樣品各劑量組大鼠的肝組織TG含量均低于肝損模型對照組，且與肝損模型對照組的差異均有極顯著性（P＜0.01），表明葛根枳椇軟膠囊具有降低乙醇性損傷的大鼠的肝組織甘油三脂（TG）含量的作用。

受試樣品對乙醇性肝損傷大鼠的肝組織脂肪變性的影響結(jié)果見表2。

表2 葛根枳椇軟膠囊對脂滴在大鼠肝臟分布的影響（x—±SD）

從表2可見，肝損模型對照組大鼠的肝組織脂肪變性評分值明顯高于空白對照組，兩者的差異具有極顯著性（P＜O.01），表明肝損模型成立。樣品各劑量組大鼠的肝組織脂肪變性評分值均低于肝損模型對照組，且與模型對照組的差異均具有極顯著性（P＜0.01），表明葛根枳椇軟膠囊具有減輕乙醇性肝損傷的大鼠肝組織脂肪變性的作用。

3 結(jié)語

當(dāng)機(jī)體大量攝入乙醇時，乙醇在體內(nèi)的代謝中間產(chǎn)物乙醛和氧自由基可對肝臟產(chǎn)生危害[5]。攝入大量的乙醇，可使得自由基產(chǎn)生增加，導(dǎo)致肝臟的脂質(zhì)過氧化，體內(nèi)與氧化或抗氧化有關(guān)的指標(biāo)，如GSH、MDA等也隨之發(fā)生相應(yīng)的改變。此外，乙醇在乙醇脫氫酶的催化下大量脫氫氧化，使三羧酸循環(huán)障礙和脂肪酸氧化減弱而影響脂肪代謝，致使脂肪的堆積，導(dǎo)致體內(nèi)的TG指標(biāo)升高[6-7]。因此，清除氧自由基、降低肝臟組織脂質(zhì)過氧化、降低TG含量被視為對肝臟有保護(hù)作用的指標(biāo)[8]。

本研究設(shè)定低、高劑量組以檢測葛根枳椇軟膠囊對乙醇所致的化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樣品低、高劑量都能顯著降低體內(nèi)MDA、TG含量，高劑量組的作用更明顯，而對于還原型GSH兩個劑量組均無明顯改變，說明樣品具有抵抗脂質(zhì)過氧化、降低甘油三脂等保護(hù)肝臟的作用。并且樣品各劑量組大鼠均能明顯減輕乙醇所致肝組織脂肪變性均。綜上所述，葛根枳椇軟膠囊對大鼠化學(xué)性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。