張李榮，楊海明，*，龔道清，肖 霞，唐徐華，王志躍，2

(1.揚州大學(xué) 動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 揚州 225009； 2.揚州大學(xué) 農(nóng)業(yè)科技發(fā)展研究院，江蘇 揚州 225009)

乳雙歧桿菌(Bifidobacteriumlactis)屬于革蘭氏陽性厭氧菌，作為一種微生物飼料添加劑，具有促進(jìn)動物生長、保護(hù)黏膜屏障、調(diào)節(jié)腸道菌群和加強(qiáng)免疫等功能[1-2]。其發(fā)揮益生效用是多種機(jī)制共同作用的結(jié)果，包括加強(qiáng)營養(yǎng)吸收、競爭黏附位點、釋放抑菌物質(zhì)、激活宿主免疫因子等。胡學(xué)智[3]認(rèn)為，一些難消化低聚糖可促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，這類未消化的低聚糖到達(dá)后腸后，可被雙歧桿菌發(fā)酵利用，產(chǎn)生的乳酸、H2O2、CO2等化學(xué)物質(zhì)對腐敗菌有抑制作用，而酸性環(huán)境也更利于鈣、鎂、鋅等礦物質(zhì)的消化吸收。Merrifield等[4]用乳雙歧桿菌NCC2818飼喂斷奶仔豬后發(fā)現(xiàn)，飼喂組仔豬代謝表型具有差異性并持續(xù)變化，同時影響微生物代謝。宋曉玲等[5]將雙歧桿菌細(xì)胞壁肽聚糖制成懸浮液，注射日本對蝦后發(fā)現(xiàn)顯著提高對蝦血清內(nèi)的多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PO)活性和溶菌酶(lysozyme，LSZ)活性。范金波等[6]研究發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌能夠增強(qiáng)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(delayed type hypersensitivity，DTH)，提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬活性和自然殺傷細(xì)胞活性，血清溶血素水平和脾淋巴細(xì)胞增殖率均有提高。所以，在提倡畜牧生產(chǎn)逐漸減少直至禁止使用抗生素的大環(huán)境下，乳雙歧桿菌作為一種潛在替代品，具有重要研究價值。

動物腸道寄居著大量微生物，被稱為機(jī)體的“第二基因組”，這些微生物與宿主相互作用，共同構(gòu)成了穩(wěn)定協(xié)調(diào)的腸道系統(tǒng)。同時，腸道微生物可受動物個體、年齡、飲食結(jié)構(gòu)、環(huán)境應(yīng)激等多種因素的影響而變化，這種變化會對宿主腸道形態(tài)、功能和免疫等方面產(chǎn)生重要作用[7-10]。據(jù)研究報道，雞盲腸內(nèi)容物微生物大約為1011個·g-1，無論是從微生物種類還是數(shù)量上看，都是其他腸道所無法比擬的[11]。盲腸微生態(tài)系統(tǒng)受到了廣泛關(guān)注，但傳統(tǒng)的微生物檢測方法，如平板培養(yǎng)、凝膠電泳PCR、熒光定量PCR或其他的間接測定方法存在一定的局限性，而二代測序技術(shù)一定程度上彌補了缺陷，為相對全面而準(zhǔn)確地檢測微生物提供了可能[12-13]。本試驗運用高通量測序技術(shù)，測定雛雞盲腸微生物，產(chǎn)生覆蓋廣、深度深的測序數(shù)據(jù)，并通過微生物豐度和多樣性比較，判定樣本間微生物組成差異，更深入地挖掘和了解盲腸微生物信息，為乳雙歧桿菌在動物生產(chǎn)上的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與動物

乳雙歧桿菌(Bifidobacteriumlactis)凍干粉購自山東中科嘉億生物工程有限公司，經(jīng)實測乳雙歧桿菌活菌數(shù)為1.5×1010cfu·g-1。羅曼褐蛋公雛由金湖縣永祥種雞有限公司提供。

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗在揚州大學(xué)試驗動物房進(jìn)行。按常規(guī)飼養(yǎng)程序進(jìn)行飼養(yǎng)管理，三層階梯式籠養(yǎng)，自由采食和飲水。第1周控溫在33 ℃，后每周降低3 ℃，直至室溫21 ℃左右。1 日齡時進(jìn)行馬立克氏病免疫，7、28 日齡時用新支二聯(lián)苗進(jìn)行新城疫免疫，14 日齡時進(jìn)行法氏囊病免疫。

1.3 試驗設(shè)計

選取1日齡健康、體質(zhì)量相近的羅曼褐蛋公雛216只，隨機(jī)分成2個組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)18只雞。對照組飼喂粉狀基礎(chǔ)飼糧(C組)，無抗生素；試驗組飼喂基礎(chǔ)飼糧另添加乳雙歧桿菌凍干粉(T組，添加量為1×107cfu·g-1)，人工投料，試驗持續(xù)42 d。試驗結(jié)束后，每處理組隨機(jī)選取6只雞，再從中選出體質(zhì)量相近且狀態(tài)良好的3只，收集盲腸食糜樣并進(jìn)行高通量測序。

1.4 試驗飼糧

試驗飼糧參照NRC(1994)營養(yǎng)需要配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.5 盲腸食糜樣收集與處理

試驗結(jié)束后，將6只雞禁食12 h后處死。在無菌條件下打開腹腔，結(jié)扎盲腸兩端，剪下后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺，用無菌剪刀剪開盲腸腸壁，采集食糜置于凍存管中，迅速投入液氮后轉(zhuǎn)至-70 ℃保存，備用。后將樣品送往上海生工生物工程股份有限公司進(jìn)行16S rDNA高通量測序。

1.6 DNA提取和擴(kuò)增

食糜樣品采用OMEGA公司的E.Z.N.ATMMag-Bind Soil DNA Kit試劑盒提取樣品的總基因組DNA，具體步驟參照說明書，并用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行定性檢測和測定濃度。以提取的DNA為模板，對16S rDNA V3-V4可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，融合了Miseq測序平臺的通用引物序列：341F(5′-CCCTACACGACGCTCTTCCGATCTG(barcode) CCTACGGGNGGCWGCAG-3′)和805R(5′-GACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCAGACTAC-HVGGGTATCTAATCC-3′)。擴(kuò)增體系30 μL：2×TaqMaster Mix 15 μL，Bar-PCR Primer F(10 μmol·L-1) 1 μL，Primer R (10 μmol·L-1) 1 μL，模板DNA 20 ng。擴(kuò)增條件：94 ℃ 3 min，5個循環(huán)(94 ℃ 30 s，45 ℃ 20 s，65 ℃ 30 s)，20個循環(huán)(94 ℃ 20 s，55 ℃ 20 s，72 ℃ 30 s)，最后72 ℃延伸5 min。將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化回收后上機(jī)測序，最終上機(jī)測序濃度為20 pmol·L-1。

1.7 數(shù)據(jù)處理與分析

用CASAVA對原始圖像數(shù)據(jù)文件進(jìn)行堿基識別，分析轉(zhuǎn)化為原始測序序列(raw data)。再通過去雜拼接、質(zhì)量控制、篩選并去除嵌合體序列步驟后，使用Usearch軟件將干凈序列按97%相似水平聚類成操作分類單元(operational taxonomic units，OTU)。計算豐度指數(shù)和多樣性指數(shù)，并進(jìn)行主成分分析(principal component analysis，PCA)，利用R軟件作圖；采用 SPSS 19.0進(jìn)行方差分析(ANOVA)。

2 結(jié)果和分析

2.1 乳雙歧桿菌對蛋雛雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，飼糧中添加乳雙歧桿菌可顯著提高雛雞體質(zhì)量、平均日增重及平均日采食量(P<0.05)，但對料重比無明顯影響。

2.2 測序結(jié)果

對6個盲腸食糜樣品進(jìn)行測序，結(jié)果顯示(表3)，對照組和乳雙歧桿菌組分別獲得平均原始序列為65 671和68 191條，其中優(yōu)質(zhì)序列數(shù)分別為54 446和58 468條，平均序列長度分別為451.63和457.58 bp，在97%相似水平上分別平均歸類成751和809個操作分類單元。利用R軟件作稀釋性曲線(rarefaction curve)(圖1)，由圖1可知，隨著測序深度的增加，曲線趨于平坦，說明測序具有合理性，各樣本能夠真實反映微生物組成情況。

表1基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

Table1Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)

原料 Ingredients含量Content/%營養(yǎng)水平Nutrient levels含量Content2)玉米 Corn66.5代謝能 Metabolism energy/(MJ·kg-1)11.97豆粕 Soybean meal27.0粗蛋白質(zhì) Crude protein/%19.06魚粉 Fish meal2.0蛋氨酸 Met/%0.47磷酸氫鈣 CaHPO41.7賴氨酸 Lys/%0.89石粉 Limestone1.1鈣 Ca/%0.98蛋氨酸 DL-methionine0.2總磷 Total phosphor/%0.71賴氨酸 L-Lysine0.2食鹽 Salt0.3預(yù)混料 Premix1)1.0合計 Total100.0

1) 預(yù)混料為每千克飼糧提供VA5 000 IU，VD31 500 IU，VE10 IU，VK38 mg，VB18 mg，VB23 mg，VB615 mg，VB129 μg，生物素0.2 mg，葉酸0.5 mg，泛酸鈣45 mg，煙酰胺50 mg，F(xiàn)e 80 mg，Zn 40 mg，Mn 60 mg，I 0.35 mg，Cu 8 mg，Se 0.15 mg。2) 以上均為計算值。

1) The premix provided the following for per kg of diets: VA5 000 IU，VD31 500 IU，VE10 IU，VK38 mg，VB18 mg，VB23 mg，VB615 mg，VB129 μg，Biotin 0.2 mg，F(xiàn)olic acid 0.5 mg，Calcium pantothenate 45 mg，Niactinamide 50 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 80 mg，Zn (as zinc sulfate) 40 mg，Mn (as manganese sulfate) 60 mg，I (as potassium iodide) 0.35 mg，Cu (as copper sulfate) 8 mg，Se (as sodium selenite) 0.15 mg. 2) These are all calculated values.

表2乳雙歧桿菌對雛雞生產(chǎn)性能的影響

Table2Effects ofB.lactison production performance of layer chicks

項目Items對照組Control group乳雙歧桿菌組 B. lactis groupP 值 P-value體質(zhì)量Weight/g536.17±26.77 b569.69±7.87 a0.015平均日增重 Average daily gain/g11.91±0.64 b12.72±0.19 a0.014平均日采食 Average daily intake/g27.47±1.11 b29.24±1.09 a0.019料重比 Feed/gain ratio2.31±0.052.30±0.060.793

同行數(shù)據(jù)后沒有相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，沒有相同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。下同。

In the same row，values with different lowercase letter mean significant difference (P<0.05)，with different capital letter mean extremely significant difference (P<0.01). The same as below.

表3盲腸食糜測序結(jié)果

Table3Sequencing results of cecal chyme

項目Item對照組Control group乳雙歧桿菌組 B. lactis group原始序列數(shù)Raw sequence number6567168191優(yōu)質(zhì)序列數(shù) High quality sequence number5444658468平均長度Mean length/bp452458操作分類單元OTU751809

2.3 盲腸微生物豐度差異

為探究乳雙歧桿菌對雛雞盲腸微生物豐度及多樣性的影響，在門、屬2個分類水平上對不同OTU進(jìn)行分類比較。

2.3.1 門水平

由表4和圖2可知，42 d時，兩組盲腸菌群在門水平上均以擬桿菌門(Bacteroidetes)、厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)、互養(yǎng)菌門(Synergistetes)為主，其中對照組脫鐵桿菌門(Deferribacteres)含量為0，乳雙歧桿菌組有4.22%菌門未被分類。兩組均以Bacteroidetes(擬桿菌門)、Firmicutes(厚壁菌門)、Proteobacteria(變形菌門)為優(yōu)勢菌門，分別占比為61.77%、37.00%、1.03%(累計占99.8%)和39.93%、53.91%、1.13%(累計占95%)。兩組間擬桿菌門(Bacteroidetes)和厚壁菌門(Firmicutes)含量存在顯著差異(P<0.05)，與對照組相比，乳雙歧桿菌組擬桿菌門(Bacteroidetes)顯著降低35.3%，厚壁菌門(Firmicutes)顯著提高45.7%。試驗組Firmicutes∶Bacteroides (F∶B)比值高于對照組。

C1、C2、C3為對照組；T1、T2、T3為乳雙歧桿菌組。C1, C2, C3 are the samples of control group; T1, T2, T3 are the samples of B. lactis group.圖1 稀釋曲線Fig.1 Rarefaction curve

C組為對照組(平均值)；T組為乳雙歧桿菌組(平均值)。Group C is control group (mean); Group T is B. lactis group (mean).圖2 門水平菌群相對豐度Fig.2 Abundance of cecal microorganism in phylum

表4盲腸菌群門水平豐度

Table 4 Abundance of cecal microorganism in phylum %

2.3.2 屬水平

由表5和圖3可知：在屬水平上主要以Alistipes、Barnesiella、Faecalibacterium、擬桿菌屬(Bacteroides)、瘤胃球菌屬(Ruminococcus2)等屬種為主。與對照組相比，乳雙歧桿菌組Barnesiella豐度顯著提高(P<0.05)，Clostridiumsensustricto含量為0，Butyricicoccus、Romboutsia、乳酸桿菌屬(Lactobacillus)豐度顯著提高(P<0.05)，梭菌ⅩⅣa類群(ClostridiumⅩⅣa)豐度有降低的趨勢(P=0.063)，未分類屬豐度有提高趨勢(P=0.057)。另外，埃希氏菌屬-志賀氏菌屬(Escherichia-Shigella)豐度極顯著降低75%，芽孢桿菌屬(Bacillus)豐度含量相同，雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)含量分別為0.01%和0.02%，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

2.4 多樣性分析

本文選用Chao1、Ace、Shannon、Simpson和Coverage指數(shù)來評測樣本中微生物豐度和多樣性。Ace和Chao1指數(shù)用來估計物種豐度；Shannon和Simpson指數(shù)用來估計微生物多樣性，多衡量群落異質(zhì)性，兩者值越大，則說明群落多樣性越高。Coverage指數(shù)表示各樣品文庫的覆蓋率，實際反映了本次測序結(jié)果是否代表樣本的真實情況。

由表6可知：兩組覆蓋率均為0.99，接近于1，說明兩組數(shù)據(jù)結(jié)果能反映真實情況。從Chao1和Ace指數(shù)上看，乳雙歧桿菌組菌群豐度均大于對照組，分別高出10.1%和12.1%。同時，與對照組相比，乳雙歧桿菌組Shannon和Simpson指數(shù)均顯著大于對照組(P<0.05)。

表5盲腸菌群屬水平豐度

Table 5 Abundance of cecal microorganism in genus %

本表列出了屬水平豐度占比相對較高菌屬、部分有益菌屬和有害菌屬。

This table listed the relatively high abundance bacteria，and some beneficial and harmful bacteria in genus.

表6盲腸微生物Alpha多樣性分析

Table6Alpha diversity analysis of cecum microorganism

項目Item對照組 Control group乳雙歧桿菌組 B.lactis groupP 值 P-valueChao1指數(shù) Chao1 index960.13±109.011057.05±232.080.548Ace指數(shù) Ace index991.26±94.531110.91±280.90.523Shannon指數(shù) Shannon index3.63±0.18 b4.04±0.06 a0.023Simpson指數(shù) Simpson index0.92±0.02 b0.95±0.01 a0.049覆蓋率 Coverage0.996±0.0010.996±0.0010.447

綜上得知，添加乳雙歧桿菌后，雛雞盲腸微生物不僅豐度增加，而且菌群多樣性也顯著提高，微生物種類更多，均勻性更高。

本文對不同樣本OTU(基于門水平)進(jìn)行主成分分析，PCA分析將降低數(shù)據(jù)維度，以挖掘復(fù)雜數(shù)據(jù)背后的簡單信息。由圖4可知：第一主成分方差貢獻(xiàn)率為61.0%，第二主成分方差貢獻(xiàn)率為27.5%，累計為88.5%，兩主成分選擇具有合理性。對照組和乳雙歧桿菌組的樣本點分布區(qū)域不同，而各自重復(fù)點相對能夠靠攏在一起，說明處理間群落構(gòu)成存在差異性。

圖3 盲腸微生物heatmap分析圖Fig.3 Heatmap analysis of cecal microorganism

圖4 基于門水平的主成分分析Fig.4 PCA analysis by phylum

3 討論

動物體腸道是腸道物理結(jié)構(gòu)、功能、內(nèi)容物和微生物相互作用的一個動態(tài)平衡的生態(tài)系統(tǒng)。乳雙歧桿菌作為一種益生菌，通過多種機(jī)制影響腸道微生態(tài)系統(tǒng)。雙歧桿菌細(xì)胞上的磷酸能與腸黏膜上皮細(xì)胞特異性結(jié)合，從而占據(jù)腸黏膜表面，阻止各種致病菌的定殖[14]。劉國榮等[15]研究發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌與致病菌對細(xì)胞的作用具有本質(zhì)上的區(qū)別，雙歧桿菌的黏附能減緩致病菌對細(xì)胞所造成的損害。同時，雙歧桿菌能夠發(fā)酵碳水化合物，產(chǎn)生大量乙酸、乳酸等有機(jī)酸，降低腸道pH或Eh值，以抑制病原菌的產(chǎn)生。另外，雙歧桿菌的表面成分也能夠激活腸道模式識別受體(pattern recognition receptors，PRRs)，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生相關(guān)免疫因子，抑制病原菌并加強(qiáng)免疫耐受[16-17]。這些機(jī)制共同創(chuàng)造了一個優(yōu)良的腸道環(huán)境以達(dá)到改善宿主健康的目的。

研究表明，雞盲腸微生物主要由Firmicutes(厚壁菌門)、Bacteroidetes(擬桿菌門)及Proteobacteria(變形菌門)3種門構(gòu)成，這與本研究結(jié)果一致[18-20]。Firmicutes(厚壁菌門)與Bacteroidetes(擬桿菌門)的比值(F/B)與脂肪沉積相關(guān)性強(qiáng)，肥胖個體的Firmicutes含量可能更高，而Bacteroidetes含量相對更低。朱宏斌等[21]用高脂飼料喂養(yǎng)C57BL/6J小鼠后發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，肥胖組厚壁菌門含量顯著升高，擬桿菌門含量顯著下降。Ismail等[22]比較了正常和肥胖人群的腸道微生物差異，發(fā)現(xiàn)肥胖人群Firmicutes與Bacteroidetes比例顯著增加。這可能與Firmicutes促進(jìn)脂肪沉積能力比Bacteroidetes強(qiáng)有關(guān)，高F/B值的腸道擁有更多的編碼裂解多糖起始酶的基因及相關(guān)糖類水解酶，更利于機(jī)體對養(yǎng)分和能量的吸收儲存。本試驗結(jié)果顯示，乳雙歧桿菌組擬桿菌門含量顯著下降，而厚壁菌門含量顯著上升，結(jié)合本試驗雛雞生長性能數(shù)據(jù)，推測乳雙歧桿菌通過提高F/B比例改善脂肪沉積情況，以實現(xiàn)促生長功效。

彭騫騫[7]在研究溫度對肉雞盲腸菌群多樣性的影響時發(fā)現(xiàn)，適溫和偏熱環(huán)境下肉雞盲腸內(nèi)的共性菌群是Alistipestimonensis和Barnesiellaviscericola。Wilkinson等[23]研究發(fā)現(xiàn)，火雞盲腸主要存在Alistipes、Anaerovorax、Bacteroides、Barnesiella等屬，且含量顯著高于其他腸道。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，在屬水平上，主要存在Alistipes、Barnesiella、Faecalibacterium、Bacteroides等屬，這與上述研究結(jié)果相似。Alistipes屬革蘭氏陰性厭氧桿菌，具有抗膽汁性，能產(chǎn)色素，并耐萬古霉素、卡那霉素、多粘菌素，可降解多種寡糖和單糖，產(chǎn)生短鏈脂肪酸，細(xì)菌表型似脆弱類桿菌，條件致病[24]。本試驗中兩組Alistipes屬含量無顯著差異。Barnesiella屬嚴(yán)格厭氧革蘭氏陰性菌，不產(chǎn)色素，無芽孢，無鞭毛，可降解寡糖并產(chǎn)乙酸、琥珀酸等有機(jī)酸[25]。趙瀅[26]報道，Barnesiella是腸道常見優(yōu)勢菌群，當(dāng)腸道菌群平衡被破壞后，Barnesiella大量減少且不易恢復(fù)。同時，Barnesiella對抗生素具有敏感性，Ubeda等[27]發(fā)現(xiàn)，Barnesiella對耐萬古霉素腸球菌引起的感染有治療作用。本試驗結(jié)果顯示，乳雙歧桿菌顯著提高Barnesiella含量。Faecalibacterium屬厚壁菌門，無運動性，能產(chǎn)丁酸、甲酸和乳酸[28]。F.prausnitzii屬于Faecalibacterium，在機(jī)體免疫防護(hù)過程中扮演著重要角色，被證實具有抗炎作用，可通過調(diào)節(jié)白介素IL-17在內(nèi)的炎癥因子的分泌來預(yù)防三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的發(fā)生[29]。本試驗中乳雙歧桿菌組Faecalibacterium含量上升。Bacteroides為革蘭氏陰性專性厭氧小桿菌，正常情況下參與宿主代謝，但在腸道中積聚一定量后對宿主有害，本試驗乳雙歧桿菌組Bacteroides含量下降34.5%，但差異不顯著。同時，本試驗中Butyricicoccus和Romboutsia含量均顯著提高，有報道顯示兩種菌屬均表現(xiàn)出益生性，Romboutsia菌屬與益生菌引起的腸道變化有關(guān)，并可減輕大鼠的急性胰腺炎癥狀[30]。Eeckhaut等[31]研究發(fā)現(xiàn)，炎癥性腸病個體大便中Butyricicoccus含量較低，而口服B.pullicaecorum后，大鼠腸道腫瘤壞死因子TNF-α和白介素IL-12水平降低，對腸道具有明顯保護(hù)作用。另外，腸道存在一定量梭菌，本試驗中乳雙歧桿菌組Clostridiumsensustricto(狹義梭菌屬)、ClostridiumⅩⅣa和ClostridiumⅣ含量不同程度下降。Clostridiumsensustricto屬于嚴(yán)格梭菌屬，許多種可產(chǎn)生外毒素，具有潛在致病性，如產(chǎn)氣莢膜梭菌和破傷風(fēng)梭菌等。ClostridiumⅩⅣa類群和ClostridiumⅣ類群屬于腸道共生菌，大量產(chǎn)酸。

研究顯示，兩梭菌類群含量變化與炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)感染關(guān)系密切，Kabeerdoss等[32]研究發(fā)現(xiàn)，IBD可能導(dǎo)致腸道ClostridiumⅣ含量和多樣性下降。Honda 等[33]研究也表明，兩類群含量上調(diào)可誘導(dǎo)T細(xì)胞的分化增殖，影響腸道Foxp3+CD4+Treg細(xì)胞的數(shù)量和功能，在腸道免疫應(yīng)答過程中表現(xiàn)出積極效應(yīng)，但對免疫細(xì)胞的強(qiáng)誘導(dǎo)性也可能會對機(jī)體產(chǎn)生負(fù)面影響。也有研究報道，梭狀芽孢桿菌衍生抗原可能導(dǎo)致炎癥性反應(yīng)，結(jié)腸炎C3H/He JBir小鼠的血清中發(fā)現(xiàn)了一種CBir1的鞭毛蛋白，這種蛋白包含梭菌ⅩⅣa類群組中產(chǎn)氣莢膜菌相關(guān)的鞭毛蛋白序列，可能引發(fā)結(jié)腸炎[34]。另外，Andersen 等[35]研究發(fā)現(xiàn)，ClostridiumⅣ菌可能受中鏈脂肪酸(MCFA)影響而抑制菌群混合發(fā)酵。后腸發(fā)酵對機(jī)體具有重要意義，糖類物質(zhì)在后腸可被厭氧菌利用，并參與機(jī)體代謝及為腸上皮細(xì)胞提供能量[36-37]。Escherichia(埃希氏菌屬)和Shigella(志賀氏菌屬)具有高同源性，都具有不同血清型，是家禽生產(chǎn)中的一類重要的條件致病源，可引起機(jī)體局部或全身性感染[38]。本試驗中乳雙歧桿菌組Escherichia/Shigella菌屬含量極顯著(P<0.01)降低75%，推測乳雙歧桿菌具有良好的抑菌作用。本試驗也觀察了多種有益菌的含量變化，發(fā)現(xiàn)乳桿菌屬的含量顯著上升，乳桿菌屬具有促進(jìn)腸道屏障發(fā)育、調(diào)節(jié)腸道免疫功能、降低腹瀉風(fēng)險等功能，有研究表明，雙歧桿菌和乳桿菌在加強(qiáng)細(xì)胞免疫、體液免疫功能及NK細(xì)胞活性方面具有協(xié)同效應(yīng)[39]。另外，兩組均檢測到了雙歧桿菌屬和芽孢桿菌屬的存在，但含量極低，無顯著性差異，這可能與個體、腸道、測序誤差等因素有關(guān)，研究表明，即使同一個腸段之中不同的生物學(xué)重復(fù)都會出現(xiàn)不同程度的差別[40]。本試驗中，乳雙歧桿菌組未分類屬含量具有上升趨勢，推測乳雙歧桿菌利于促進(jìn)新的菌種產(chǎn)生。

本試驗研究發(fā)現(xiàn)，在添加乳雙歧桿菌后，盲腸微生物豐度增加，Shannon和Simpson指數(shù)顯著上升，組間存在差異性。腸道菌群的平衡對宿主健康具有重要意義，機(jī)體在疾病或應(yīng)激狀態(tài)下，腸道菌群種類和數(shù)量都會下降[41-42]。這種情況下，機(jī)體對抗不良因素的能力會變?nèi)?，而豐富的菌群含量和種類可加強(qiáng)營養(yǎng)、免疫等多種機(jī)體恢復(fù)機(jī)制，通過調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)、改善生活環(huán)境或喂食藥物等途徑，可重新平衡腸道菌群，加強(qiáng)腸道耐受和免疫機(jī)能，以促進(jìn)宿主健康。