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        腦黑質(zhì)單側(cè)注射魚藤酮制備帕金森小鼠模型方法的建立和行為分析

        2018-10-31 09:00:48王普
        健康大視野 2018年15期
        關(guān)鍵詞:魚藤酮帕金森病

        王普

        【摘 要】目的:帕金森是目前醫(yī)學(xué)難題,尚缺乏有效的治愈措施,針對(duì)其相關(guān)研究成為醫(yī)學(xué)重點(diǎn)方向。目的:注射魚藤酮制備帕金森小鼠模型方法探討,并從行為學(xué)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)角度分析模型。本文實(shí)驗(yàn)方法和數(shù)據(jù)參考新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院谷爭(zhēng)、候田田、周度爽、趙二奇、趙營(yíng)在腦黑質(zhì)單側(cè)注射魚藤酮制備帕金森小鼠模型方法的建立和行為分析一文。方法:為了使得實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚯宄恼宫F(xiàn)效果,采取實(shí)驗(yàn)組、溶媒組和正常組來(lái)進(jìn)行。每組各10只清潔級(jí)NIH小鼠。實(shí)驗(yàn)組采用立體定向微量注射法將溶解于二甲基亞砜(DMSO)的魚藤酮注射入小鼠腦右側(cè)黑質(zhì)致密區(qū),溶媒組以同樣的方法僅注射相同體積的DMSO,正常組不做任何處理。結(jié)果:建模后,正常組、溶媒組和實(shí)驗(yàn)組小鼠死亡率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組小鼠體重、爬桿實(shí)驗(yàn)評(píng)分評(píng)分均較對(duì)照組和溶媒組建模后明顯下降(P<0.05)。建模后,實(shí)驗(yàn)組小鼠腦黑質(zhì)TH水平注射側(cè)腦黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元較對(duì)側(cè)明顯減少(P<0.05)。結(jié)論:魚藤酮能選擇性損毀黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元,可較快建立穩(wěn)定的成功率較高的帕金森模型。

        【關(guān)鍵詞】魚藤酮;腦黑質(zhì);多巴胺神經(jīng)元;帕金森病

        【中圖分類號(hào)】R742.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1005-0019(2018)15-0-01

        1 材料與方法

        1.1 材料 本實(shí)驗(yàn)采用的小鼠達(dá)到無(wú)特定病原(SPE)級(jí)且美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(NIH)要求的,由河南省華蘭生物小動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供的體重在22~25g之間。武漢三洹醫(yī)藥化工有限公司生產(chǎn)的魚藤酮,武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)的阿撲嗎啡、兔抗酪氨酸羥化酶、免疫親和素-生物素復(fù)合物(strept avidin-biotin complex,SABC)試劑盒,北京中彬金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的二氨基聯(lián)苯胺(Diaminobenzidine,DAB)顯色試劑盒,成都儀器廠生產(chǎn)的ST-5ND-B型小鼠腦立體定向儀,安徽省淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)的ZH-GSZ型高級(jí)顱骨鉆,還有日本尼康生產(chǎn)的免疫組織化學(xué)成像系統(tǒng)。

        1.2 模型建立及分組

        實(shí)驗(yàn)組、溶媒組和正常組隨機(jī)分得10只小鼠,均同等正常飼養(yǎng),反復(fù)對(duì)其進(jìn)行旋轉(zhuǎn)行為檢測(cè),當(dāng)確定沒(méi)有旋轉(zhuǎn)行為后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(1)實(shí)驗(yàn)組:腹腔注射水合氯醛350 mg·kg-1,將小鼠麻醉后,嚴(yán)格顱平位(使用耳欄在立體框架中穩(wěn)定小鼠頭部,前囟與后囟水平高度相差0.1 mm以下)固定于小鼠腦立體定向儀,注射靶點(diǎn)坐標(biāo)為:前囟門后3.0 mm;外側(cè)向中線1.3 mm;頭骨表面腹側(cè)4.7 mm,微量注射器抽取溶于二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide, DMSO)的魚藤酮1 μL,0.5 g/L,速度為0.2 μL·min-1,緩慢進(jìn)針至靶點(diǎn),注射完畢留針5 min待藥物充分彌散,緩慢勻速拔針。給與碘伏涂抹消毒,撒少量青霉素粉末,縫合傷口。術(shù)后碘伏連續(xù)涂抹3 d/每日二次。(2)溶媒組:小鼠固定方法及注射靶點(diǎn)同實(shí)驗(yàn)組,給予DMSO注射,每只1 μL。(3)正常組:不做任何處理,與實(shí)驗(yàn)組和溶媒組給予相同的飼養(yǎng)方式飼養(yǎng)。

        1.3 行為檢測(cè)及評(píng)分 對(duì)三組小鼠進(jìn)行處理四周后,將阿卟嗎啡注射到三組小鼠的頸后皮下,這可以誘導(dǎo)小鼠進(jìn)行旋轉(zhuǎn)。注射后5分鐘左右,小鼠適應(yīng)環(huán)境了開始進(jìn)行計(jì)時(shí),記錄10分鐘內(nèi)各個(gè)小鼠旋轉(zhuǎn)的圈數(shù)。當(dāng)恒定自發(fā)性左側(cè)旋轉(zhuǎn)且比較穩(wěn)定,每小時(shí)旋轉(zhuǎn)的圈數(shù)超過(guò)210,除此之外,還會(huì)出現(xiàn)震顫、豎尾、活動(dòng)遲緩等異常表現(xiàn),可以判定模型建立成功。

        1.4 爬桿實(shí)驗(yàn) 選取一根直徑為1.5厘米長(zhǎng)為50厘米的木桿,在木桿頂端固定一個(gè)直徑為25厘米的軟木小球,同時(shí)為了防止木桿打滑,在木桿上纏繞紗布。木桿豎直放置,讓小鼠置于小球上面,做如下記錄:(1)小鼠從小球爬下來(lái)的時(shí)間;(2)完成上半段木桿爬行的時(shí)間;(3)完成下半段的爬行時(shí)間。根據(jù)時(shí)間的長(zhǎng)短進(jìn)行評(píng)分,如果3秒內(nèi)完成某一個(gè)過(guò)程記3分,如果3到6秒內(nèi)完成記2分,超過(guò)6秒的記1分。然后統(tǒng)計(jì)各組小鼠的得分情況。

        2 結(jié)果

        2.1 3組小鼠生存情況比較

        溶媒組和正常組小鼠在6周觀察期間均未見死亡,實(shí)驗(yàn)組小鼠在建模2周和3周后死亡。三組建模建模后小鼠的死亡率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        2.2 3組小鼠體質(zhì)量變化比較 結(jié)果如表1顯示,與建模前比較,對(duì)照組、溶媒組和實(shí)驗(yàn)組建模后4周小鼠體質(zhì)量均顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。建模后對(duì)照組、溶媒組小鼠體質(zhì)量明顯高于實(shí)驗(yàn)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組和溶媒組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        2.3 爬桿實(shí)驗(yàn) 結(jié)果如表2所示,建模前,由于P>0.05,這樣針對(duì)三組小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)的得分就失去了統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,沒(méi)有研究?jī)r(jià)值。建模后,只有實(shí)驗(yàn)組的P>0.05,其他兩組P均大于0.05,因此建模后的實(shí)驗(yàn)組小鼠的爬桿實(shí)驗(yàn)得分統(tǒng)計(jì)與建模前有明顯下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        3 討論

        帕金森已經(jīng)成為影響老年人中發(fā)病率逐步升高的一種疾病,嚴(yán)重影響著患者的生活,對(duì)患者家庭也是很大的負(fù)擔(dān)。但是目前為止,對(duì)于帕金森綜合征的發(fā)病機(jī)制還不是十分清楚,因此影響著對(duì)其治療。目前普遍認(rèn)為是選擇性黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元缺失和泛素染色陽(yáng)性的胞質(zhì)中包涵體形成是導(dǎo)致PD的主要原因之一。目前的藥物對(duì)PD還無(wú)法從根本上進(jìn)行治療。因此針對(duì)PD的有效藥物的要發(fā)和篩選成為該領(lǐng)域急需解決的問(wèn)題。目前關(guān)于PD臨床前藥物療效的篩選主要在大鼠上進(jìn)行,在小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的報(bào)道還比較少,但是由于小鼠與人有比較高的基因同源性,因此在小鼠進(jìn)行建模研究,對(duì)PD藥物的研發(fā)具有重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn),魚藤酮定位給藥,會(huì)降低小鼠的死亡率,同時(shí)小鼠的病理學(xué)和行為學(xué)變化與人類帕金森患者比較類似,具有研究的價(jià)值。

        參考文獻(xiàn)

        谷爭(zhēng),候田田,周度爽,趙二奇,趙 營(yíng).腦黑質(zhì)單側(cè)注射魚藤酮制備帕金森小鼠模型方法的建立和行為分析[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2016(02).

        何莉.老年帕金森病患者血漿同型半胱氨酸水平與認(rèn)知障礙相關(guān)性分析[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2014(06)

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