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(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院新生兒遺傳代謝病篩查中心，云南 昆明 650032)

新生兒疾病篩查(neonatal screening)是指對(duì)新生兒群體通過簡易快速準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段，在患兒臨床癥狀未出現(xiàn)之前發(fā)現(xiàn)某些危害嚴(yán)重的先天性遺傳代謝性疾病，避免出現(xiàn)智力、體格發(fā)育障礙甚至死亡[1-2]。為保證新生兒遺傳代謝病篩查結(jié)果的質(zhì)量，應(yīng)對(duì)篩查的全過程進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制并建立完善的質(zhì)量保證體系。昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院新生兒遺傳代謝病篩查中心2013年開始參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心(簡稱臨檢中心)組織的新生兒遺傳代謝病篩查實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(簡稱室間質(zhì)評(píng))活動(dòng)，現(xiàn)對(duì)5年來的質(zhì)評(píng)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)分析。

1資料與方法

1.1研究材料

每年接收衛(wèi)生部臨檢中心分發(fā)的苯丙氨酸(phenylalanine，Phe)、促甲狀腺激素(thyroid-stimulating hormone，TSH)3批次未知濃度的濾紙干血斑室間質(zhì)評(píng)樣本，每批次5份，共計(jì)75份；葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD)在2013年、2014年只有2批次，后面每年3批次，每批次5份，共計(jì)65份。全部質(zhì)評(píng)樣本塑料袋密封保存于-20℃冰箱待檢。

1.2儀器試劑

試劑為芬蘭Wallac公司原裝進(jìn)口的Neo-TSH、Neo-Phe和Neo-G6PD測(cè)定試劑盒，Wallac 1420 VICTOR熒光分析儀、時(shí)間分辨熒光免疫分析(DELFIA)自動(dòng)振動(dòng)器、DELFIA Plate Wash 1296-026 型洗板機(jī)(以上均購自芬蘭Wallac公司)，3mm干血斑手動(dòng)打孔器、DNP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.3方法

1.3.1樣本檢測(cè)

衛(wèi)生部臨檢中心每年發(fā)放3個(gè)批次的Phe和TSH質(zhì)評(píng)樣本，G6PD樣本在2013年、2014年只有2批次，后面每年是3批次，按照要求分別于每年的5月、8月、10月對(duì)質(zhì)評(píng)樣本進(jìn)行檢測(cè)，Phe和G6PD用熒光法，TSH用DELFIA，所有質(zhì)評(píng)樣本和待檢樣本無區(qū)別對(duì)待，同時(shí)同批次檢測(cè)，測(cè)定后按規(guī)定上報(bào)定量檢測(cè)和臨床判斷結(jié)果，質(zhì)評(píng)結(jié)果及得分情況在1個(gè)月內(nèi)反饋到新篩中心。

1.3.2室間質(zhì)評(píng)判斷標(biāo)準(zhǔn)

按照衛(wèi)生部臨檢中心的判斷標(biāo)準(zhǔn)，①定量判斷：所有項(xiàng)目質(zhì)評(píng)樣本值允許范圍是靶值±30%，超過此范圍為失控[3]；②定性判斷：根據(jù)實(shí)驗(yàn)定量結(jié)果，參照實(shí)驗(yàn)室TSH、Phe和G6PD的陽性切值對(duì)每份室間質(zhì)評(píng)樣本進(jìn)行臨床評(píng)估[3]。本篩查中心各項(xiàng)目的定性判斷標(biāo)準(zhǔn)見表1。通過與衛(wèi)生部臨檢中心反饋的定性結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，不符合者判斷為失控。

表1本篩查中心Phe、TSH、G6PD的定性判斷標(biāo)準(zhǔn)

Table 1 Qualitative criteria for Phe, TSH and G6PD in the screening center

1.3.3質(zhì)評(píng)結(jié)果評(píng)分

按照衛(wèi)生部臨檢中心的判斷標(biāo)準(zhǔn)，每次活動(dòng)每一篩查項(xiàng)目未能達(dá)到至少80%得分則稱為該項(xiàng)目本次活動(dòng)不滿意成績。總測(cè)試活動(dòng)未達(dá)到至少80%得分稱為不滿意的成績。未參加測(cè)試活動(dòng)定為不滿意的成績，該次得分為0[4]。對(duì)每一次室間質(zhì)評(píng)，針對(duì)某一項(xiàng)目的得分計(jì)算公式為：該項(xiàng)目的可接受結(jié)果數(shù)/該項(xiàng)目總的測(cè)定樣本數(shù)×100%。對(duì)調(diào)查的全部項(xiàng)目，其得分計(jì)算公式為：全部項(xiàng)目的可接受結(jié)果數(shù)/全部項(xiàng)目總的測(cè)定樣本數(shù)×100%[4]。

2結(jié)果

2.1室間質(zhì)評(píng)樣本偏倚情況

5年內(nèi)共接受Phe和TSH 15批次共計(jì)75份質(zhì)評(píng)樣本，G6PD 13批次共計(jì)65份質(zhì)評(píng)樣本。Phe偏移范圍：-30.00%～45.00%，TSH偏移范圍：-21.41%～34.92%，G6PD偏移范圍：-23.33%～45.83%，各項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果偏倚分布見圖1、圖2、圖3。

Phe相對(duì)偏倚平均值14.00%，TSH相對(duì)偏倚平均值11.56%，G6PD相對(duì)偏倚平均值9.53%，各項(xiàng)目每年相對(duì)偏倚的平均值見表2、表3。

圖1 Phe質(zhì)評(píng)樣本濃度偏倚分布

圖2 TSH質(zhì)評(píng)樣本濃度偏倚分布

2.2定量結(jié)果

75份Phe和TSH質(zhì)評(píng)樣本中，分別有70份Phe和73份TSH樣本測(cè)定結(jié)果通過，符合率分別為93.33%(70/75)和97.33%(73/75)；65份G6PD質(zhì)評(píng)樣本中，60份樣本測(cè)定結(jié)果通過，符合率為92.31%(60/65)，失控樣本、失控結(jié)果及原因分析見表4。

表2 2013—2017年度Phe、TSH相對(duì)偏倚情況

Table 2 Relative bias of Phe and TSH during 2013-2017

年份批次樣本量(份)Phe相對(duì)偏倚平均值(%)TSH相對(duì)偏倚平均值(%)2013年31510.949.562014年31514.0011.122015年31513.8119.812016年31515.928.652017年31515.368.64合計(jì)157514.0011.56

表3 2013—2017年度G6PD相對(duì)偏倚情況

Table 3 Relative bias of G6PD during 2013-2017

年份批次樣本量(份)G6PD相對(duì)偏倚平均值(%)2013年2108.232014年2108.132015年3154.152016年31513.362017年31513.82合計(jì)13659.53

表4 12份定量結(jié)果失控質(zhì)評(píng)樣本及原因分析

2.3定性結(jié)果

75份Phe和TSH質(zhì)評(píng)樣本、65份G6PD質(zhì)評(píng)樣本中，各有1份Phe、TSH和G6PD樣本定性判斷未通過，符合率分別是Phe 98.67%(74/75)、TSH 98.67%(74/75)、G6PD 98.46%(64/65)。

2.4質(zhì)評(píng)結(jié)果評(píng)分

所有項(xiàng)目的質(zhì)評(píng)樣本定量和定性判斷總評(píng)分結(jié)果均≥80%，見表5。

表5各項(xiàng)目定量和定性結(jié)果總評(píng)分[%(n/N)]

Table 5 Total score of quantitative and qualitative results for each item[%(n/N)]

3討論

3.1室間質(zhì)評(píng)結(jié)果分析

衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的Phe和TSH新生兒遺傳代謝病篩查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量評(píng)價(jià)工作始于1998年[4]，G6PD檢測(cè)的室間質(zhì)評(píng)工作從2008年開始。昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院新生兒遺傳代謝病篩查中心成立于2012年，2013—2017年連續(xù)5年參加全國新生兒疾病篩查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量評(píng)價(jià)，共接收Phe和TSH 15批次共75份質(zhì)評(píng)樣本，首次在全國范圍內(nèi)對(duì)參加G6PD室間質(zhì)評(píng)結(jié)果進(jìn)行分析和總結(jié)，5年接收G6PD 13批次共65份樣本，Phe相對(duì)偏倚平均值14.00%，TSH相對(duì)偏倚平均值11.56%，G6PD相對(duì)偏倚平均值9.53%，基于同樣的測(cè)定方法，我中心的Phe和TSH的相對(duì)偏移平均值比其他實(shí)驗(yàn)室小[5-6]，說明實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)操作相對(duì)穩(wěn)定，結(jié)果均一性較好。Phe、TSH和G6PD定量和定性單項(xiàng)評(píng)分和總評(píng)分均≥80%，達(dá)到衛(wèi)生部臨檢中心的質(zhì)評(píng)要求，說明本篩查中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果是可信的。

3.2質(zhì)評(píng)樣本失控原因分析及對(duì)策

所有質(zhì)評(píng)樣本中有5份Phe標(biāo)本、2份TSH標(biāo)本、5份G6PD標(biāo)本定量結(jié)果偏移均≥靶值±30%，判斷為失控。分析原因：2份Phe樣本是隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，3份Phe樣本是新搬遷實(shí)驗(yàn)室溫度過高導(dǎo)致失控；2份TSH樣本是由于沒有定期清洗消毒洗板機(jī)導(dǎo)致失控；2份G6PD樣本是試劑混合不均勻，3份G6PD樣本是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)人員更換，沒有做好交接人為用錯(cuò)實(shí)驗(yàn)板導(dǎo)致失控。3個(gè)項(xiàng)目各有1份樣本定性判斷未通過，Phe和TSH未通過均是因?yàn)槿藶樯蠄?bào)錯(cuò)誤導(dǎo)致，G6PD未通過是因?yàn)闇y(cè)定值剛好為本室的可疑陽性切值2.2IU/gHb，故上報(bào)可疑陽性，而質(zhì)評(píng)判斷標(biāo)準(zhǔn)是陰性，所以未通過?；純捍_診或漏診都是定性判斷決定的，理論上其質(zhì)量的好壞更為重要[7]，特別是針對(duì)G6PD定性判斷失控的情況，要考慮后續(xù)對(duì)我中心的G6PD檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行全面分析，制定符合我中心實(shí)驗(yàn)室的G6PD陽性切值。此外還要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室人員操作規(guī)范培訓(xùn)，減少因人為操作失誤而導(dǎo)致的失控。

3.3展望

新生兒疾病篩查工作的最重要特點(diǎn)是疾病的早期診斷和治療，而診斷的唯一依據(jù)是實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果[8]，假陰性和假陽性結(jié)果都會(huì)對(duì)患兒、患兒家庭及社會(huì)造成不可逆的巨大精神負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)損失[9]，所以加強(qiáng)對(duì)篩查實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量管理和控制必不可少。我篩查中心成立較晚(2012年)，但是實(shí)驗(yàn)室每年的篩查量在15萬左右，如此大的檢測(cè)量更加應(yīng)該重視實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制，其檢測(cè)質(zhì)量是否合格就需要進(jìn)行客觀驗(yàn)證和評(píng)價(jià)。室間質(zhì)評(píng)是臨床實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量管理的重要組成部分，也是實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的重要依據(jù)[6]，新篩實(shí)驗(yàn)室通過參加全國新生兒疾病篩查實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)及嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控制度，能起到自查、自檢、自省的作用，為遺傳代謝病的診斷治療提供準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)信息[10]。我院新篩實(shí)驗(yàn)室2017年開展了先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥的檢測(cè)，并成功申請(qǐng)參加衛(wèi)生部臨檢中心2018年的17α-羥化酶室間質(zhì)評(píng)檢測(cè)活動(dòng)，希望能及時(shí)接受專業(yè)測(cè)評(píng)，為檢測(cè)質(zhì)量保駕護(hù)航。