王 楠，劉 杰，周 軼，牛艷昕

(金華市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，浙江 金華 321000)

卵巢癌是女性生殖道常見的惡性腫瘤，發(fā)病率較高，臨床癥狀以月經(jīng)不調(diào)、消瘦最常見[1]。相關(guān)研究表明，大部分卵巢癌患者在初診時即處于晚期，5年生存率大約在30%[2-3]。采取有效的檢查方式對早期卵巢癌患者進行準(zhǔn)確診斷，可及早確立患者病情進展程度，并針對患者疾病嚴重程度開展相應(yīng)的治療，在臨床中具有重要意義。目前，臨床中針對卵巢癌的診斷主要采用糖類抗原125(carbohydrate antigen125，CA125)標(biāo)志物，長期的臨床研究發(fā)現(xiàn)，該標(biāo)志物雖具有一定檢出率，但采用該標(biāo)志物進行診斷特異性較低，相應(yīng)的假陽性率較高[4]。近期，我們參考諸多學(xué)者相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，血清nidogen-2、人附睪蛋白4(human epididymisprotein 4，HE4)和胸苷激酶1(thymidine kinase1，TK1)等標(biāo)志物應(yīng)用于卵巢癌患者臨床診斷中具有較高的診斷價值[5]。為探討上述三種標(biāo)志物與卵巢癌疾病進展的關(guān)系以及其在卵巢癌患者發(fā)病過程中的具體表現(xiàn)，本次研究選取我院近期收治的多例卵巢癌患者、良性卵巢疾病患者以及近期于我院進行體檢的健康女性作為研究對象，就血清nidogen-2、HE4和TK1聯(lián)合檢測在卵巢癌診斷中的應(yīng)用價值進行分析，報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

本次研究選取金華市人民醫(yī)院2015年10月至2017年10月期間收治的74例卵巢癌患者作為卵巢癌組，選同期于我院治療的48例良性卵巢作為良性組，另選同期于我院體檢的45例健康女性作為對照組。卵巢癌組中，患者最大年齡77歲，最小年齡35歲，平均年齡(54.68±6.43)歲，74例患者均參考國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)手術(shù)病理分期，其中早期卵巢癌(Ⅰ～Ⅱ期)患者共27例，晚期卵巢癌(Ⅲ期)患者共47例，參考分化程度可分為：52例低分化、18例中分化，4例高分化；良性組中，患者最大年齡75歲，最小年齡32歲，平均年齡(52.17±6.41)歲，其中漿液性囊腺瘤9例，卵巢巧克力囊腫14例，畸胎瘤12例，子宮內(nèi)膜異位癥5例；對照組中，體檢人群最大年齡73歲，最小年齡34歲，平均年齡(53.41±6.34)歲。三組受檢人員在各項基本資料上無顯著差異(P>0.05)，可進行后續(xù)多組間對比研究。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

卵巢癌組入選所有患者均符合《卵巢癌診治指南》[6]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者在入院后經(jīng)多項常規(guī)檢查后初步診斷，后經(jīng)手術(shù)病理檢查確診。所有患者在入院后均表現(xiàn)出不同程度月經(jīng)不調(diào)、消瘦等癥狀。卵巢癌患者均為首發(fā)，未經(jīng)任何治療，排除入院前于他院進行放療與化療方式進行治療的患者；排除合并有機體多項器官嚴重功能障礙的患者；排除其他系統(tǒng)性腫瘤病史的患者；排除多項臨床病案資料不齊全的患者。對照組體檢人群均未出現(xiàn)冠心病、糖尿病及高血壓疾病。所有患者及家屬均對本研究知情，并簽署知情同意書，本研究已獲金華市人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.3檢驗方法

進行標(biāo)本采集時，所有受檢對象均處于非月經(jīng)期，在對所有研究對象進行血液樣本采集時均需空腹8h以上，樣本為5mL肘靜脈血液，將所得樣本置于紅色試管中，后于4℃恒溫環(huán)境下靜置1h，在3 000r/min離心機下進行離心處理，離心操作時間為15min，取得上層血清置入無菌EP管中，并將最終樣本放置于-20℃的恒溫環(huán)境中待測。針對血清HE4、血清TK1的檢測主要采用酶聯(lián)吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法，具體操作方法參考檢測試劑盒說明書中相關(guān)要求規(guī)范進行，血清中nidogen-2采用化學(xué)免疫增強發(fā)光法，檢測儀器為UniCelDxl 800型化學(xué)發(fā)光儀(Beckman Coulter)。組織中nidogen-2的檢驗主要采用免疫組化檢測(SP試劑盒)。nidogen-2判定的標(biāo)準(zhǔn)為：上皮下基底膜組織未被染成黃色或棕褐色為陰性反應(yīng)(-)；染色部位呈點狀為陰性反應(yīng)(-)；上皮下基底膜呈現(xiàn)棕褐色不連續(xù)狀為陽性反應(yīng)(+)，上皮下基底膜呈現(xiàn)棕褐色毛細線狀為陽性反應(yīng)(++)，呈深棕色粗線狀為陽性反應(yīng)(+++)。陽性表達率=陽性患者例數(shù)/總例數(shù)×100%。血清HE4值正常范圍在0～150pmol/L之間，若所檢測值超過150pmol/L則可認為呈陽性反應(yīng)。血清TK1正常范圍在2pmol/L之間，若所檢測值超過2pmol/L則可認為呈陽性反應(yīng)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1三組檢測指標(biāo)結(jié)果比較

三組間nidogen-2、HE4和TK1水平比較有顯著性差異(均P<0.05)，進一步每兩組之間比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)卵巢癌組nidogen-2、HE4和TK1等指標(biāo)表達量顯著高于良性組、對照組(t值分別為21.36、26.97、15.22、23.69、29.55、16.01，均P<0.05)，但良性組與對照組上述指標(biāo)比較無顯著性差異(t值分別為1.41、1.85、1.22、1.08，均P>0.05)，見表1。

組別例數(shù)(n)nidogen-2(μg/L)HE4(pmol/L)TK1(pmol/L)卵巢癌組7461.30±6.48481.47±69.383.16±1.03良性組4815.36±3.74*67.12±23.33*0.47±0.12*對照組4514.91±3.20*#60.89±23.14*#0.40±0.11*#F1 725.231 469.80318.88P0.0000.0000.000

注：*表示與卵巢癌組對比，良性組與對照組nidogen-2、HE4和TK1等數(shù)據(jù)差異P<0.05；#表示與良性組對比，對照組nidogen-2、HE4和TK1等數(shù)據(jù)差異P>0.05。

2.2陽性情況分析

卵巢癌組74例患者中，共檢出nidogen-2陽性表達66例，HE4陽性表達56例，TK1陽性表達57例；良性組48例患者中，共檢出nidogen-2陽性表達3例，HE4陽性表達2例，TK1陽性表達0例；對照組45例健康人群中，共檢出nidogen-2陽性表達0例，HE4陽性表達0例，TK1陽性表達0例(圖1)。卵巢癌組nidogen-2、HE4和TK1陽性表達率均高于良性組與對照組(χ2值分別為8.991、7.695，均P<0.05)，良性組與對照組nidogen-2、HE4和TK1陽性表達率無顯著差異(均P>0.05)，見表2。

注：圖A卵巢癌組；圖B良性組；圖C對照組。

圖1不同組別nidogen-2檢測結(jié)果(×200)

Fig.1 Nidogen-2 detecting results of different groups (×200)

表2三組陽性表達率對比[n(%)]

Table 2 Comparison of positive expression rates among three groups[n(%)]

注：*表示與卵巢癌組對比，良性組與對照組nidogen-2、HE4和TK1等數(shù)據(jù)陽性表達率差異P<0.05；#表示與良性組對比，對照組nidogen-2、HE4和TK1等數(shù)據(jù)陽性表達率差異P>0.05。

2.3聯(lián)合檢測結(jié)果分析

以卵巢癌組患者作為后續(xù)研究對象，不同檢測方法敏感性、特異性、準(zhǔn)確率均有顯著性差異(χ2值分別為29.321、98.129、31.941，均P<0.05)，三聯(lián)檢測均最高，見表3。

表3聯(lián)合檢測結(jié)果對比(%)

Table 3 Comparison of combined detecting results(%)

檢測方法敏感性特異性準(zhǔn)確性nidogen-286.4983.3389.19HE472.9747.4575.68TK160.8134.6862.16三聯(lián)檢測94.5990.9195.95χ229.32198.12931.941P<0.01<0.01<0.01

3討論

3.1腫瘤標(biāo)志物在臨床中的應(yīng)用

腫瘤標(biāo)志物可對患者疾病機體內(nèi)腫瘤生長情況及疾病進展情況進行一定程度的反饋，Xu等[7]在研究中提出，同一腫瘤可能存在多種不同的腫瘤標(biāo)志物，而不同的腫瘤組織類型中也可能存在相同的腫瘤標(biāo)志物。腫瘤標(biāo)志物對各類腫瘤疾病的篩選與診斷均具有一定的準(zhǔn)確性，且利用腫瘤標(biāo)志物對患者患病情況及病情進展程度進行預(yù)測時，對患者機體造成的創(chuàng)傷較小，且檢測方式較為簡單[8]，現(xiàn)已在臨床中被廣泛推薦應(yīng)用。針對卵巢腫瘤的診斷，目前臨床中最為常用的腫瘤標(biāo)志物為CA125，Goff 等[9]在研究中證實，CA125腫瘤標(biāo)志物在對化療藥物的敏感性、腫瘤復(fù)發(fā)情況及其他盆腔腫瘤的鑒別均具有重要臨床價值。另有學(xué)者在上述研究基礎(chǔ)上提出，卵巢癌患者在患病期間，其血液中血清CA125水平顯著升高，且CA125腫瘤標(biāo)志物在對漿液性卵巢癌患者進行臨床診斷時敏感性最高。但我們在以往類似的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，CA125在對卵巢癌患者進行臨床診斷時雖具有一定的敏感性，但診斷特異性較低，對假陽性患者不能較好的排除，對患者后期治療有較為嚴重的影響[10-11]。

3.2 nidogen-2、HE4、TK1對卵巢癌的診斷價值分析

上個世紀至今，不斷有學(xué)者對nidogen-2進行相關(guān)分析，研究提出nidogen-2可能成為新的具有較高價值的卵巢癌腫瘤標(biāo)志物[12]。本次研究中通過對卵巢癌患者、良性卵巢疾病患者、正常健康女性進行分組分析，其中卵巢癌組nidogen-2表達水平顯著高于良性組與對照組(P<0.05)，說明其對卵巢腫瘤與卵巢疾病的鑒別有顯著效果，可作為一種新型血清腫瘤標(biāo)志物。而HE4則是近期出現(xiàn)的一種對卵巢癌具有較高診斷敏感性與特異性的腫瘤標(biāo)志物，程喜鋒等[13]在研究中指出，HE4基因的激活可被用于卵巢癌靶向性基因治療，本次研究同樣通過卵巢癌組患者HE4表達水平顯著高于良性組與對照組(P<0.05)，證實了其在卵巢癌臨床診斷的可行性。除此之外，本次研究結(jié)果還表明了，TK1在正常組織中的含量較低，而在腫瘤組織中的含量較高，結(jié)合相關(guān)學(xué)者研究報告，推測其原因為：惡心腫瘤內(nèi)部細胞增殖速度較快，因而TK1在其中表現(xiàn)了累積增加狀態(tài)，其表現(xiàn)水平不斷升高。本次研究還通過對上述三種腫瘤標(biāo)志物陽性表達率的檢測證實了它們在卵巢癌疾病臨床診斷中的應(yīng)用價值[14]。表明了上述三種腫瘤標(biāo)志物在健康女性中不具備陽性表達，而在卵巢良性疾病中僅具有極地的陽性表達，在卵巢癌患者中具有較高的陽性表達。通過該項結(jié)果可對疑為卵巢癌疾病的患者進行初步診斷，并通過后續(xù)對敏感性、特異性診斷結(jié)果對患者疾病狀態(tài)進行細致分析[15]。本次研究中，我們發(fā)現(xiàn)nidogen-2、HE4和TK1在單項診斷上敏感性、特異性無顯著差異，但均低于三聯(lián)診斷(P<0.05)，初步推斷采用上述腫瘤標(biāo)志物對患者進行三聯(lián)診斷更有利于腫瘤疾病的檢出，臨床中可考慮使用，但具體結(jié)論還有待后續(xù)大樣本數(shù)據(jù)進一步研究。

綜上所述，在針對卵巢癌患者臨床診斷時，采用血清nidogen-2、HE4和TK1聯(lián)合檢測可有效提高診斷敏感性、特異性及診斷準(zhǔn)確率，可考慮臨床推廣應(yīng)用。