李雅麗

摘要：霉菌毒素具有很多種類，并在自然界中廣泛分布，往往會(huì)污染飼料。當(dāng)霉菌污染飼料后就會(huì)導(dǎo)致其含有大量的霉菌毒素，從而能夠?qū)е滦笄莅l(fā)生中毒死亡，或者導(dǎo)致畜禽的免疫機(jī)能降低，長(zhǎng)時(shí)間處于亞健康狀態(tài)，生產(chǎn)性能下降，引起免疫失敗，并經(jīng)常發(fā)病，還可經(jīng)由肉、蛋、奶等食物鏈危害人類健康，應(yīng)注意檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：飼料；霉菌毒素；肉眼觀測(cè)；顯微鏡檢測(cè)；酶聯(lián)免疫吸附法；熒光檢測(cè)法；薄層層析法

中圖分類號(hào)：S816

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：2095-9737（2018）06-0052-01

1 霉菌毒素種類

飼料、油籽、谷物以及加工的糧食容易污染霉菌，特別是在溫度超過25℃，相對(duì)濕度達(dá)到80%以上時(shí)，通風(fēng)較差以及陰雨季節(jié)，更容易污染。在飼料原料或者飼料中常見的霉菌主要是曲霉菌、鐮刀菌和青霉菌。這些霉菌通?？僧a(chǎn)生黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素、單端孢霉烯（T- 2毒素）、嘔吐霉素、腐馬菌素、串珠鐮刀菌素等。這些霉菌及其產(chǎn)生的毒素往往會(huì)導(dǎo)致飼料中的常用原料被污染，如曲霉菌分泌的黃曲霉毒素Bl（ AFBl）、黃曲霉毒素B2（ AFBl）、黃曲霉毒素Gl（ AFGl）以及黃曲霉毒素G2（ AFG2），是導(dǎo)致大部分?jǐn)?shù)動(dòng)物發(fā)生霉菌毒素中毒的主要原因；青霉菌屬中的多個(gè)菌種分泌的赭曲霉毒素，對(duì)家禽具有十分強(qiáng)的毒力，且往往與黃曲霉毒素一起污染飼料。

2 常用檢測(cè)方法

肉眼觀測(cè)。在畜禽飼養(yǎng)過程中，如果出現(xiàn)減少采食，飼料結(jié)塊谷物和飼料發(fā)熱，顏色變暗，以及散發(fā)出較小異味等情況，就可懷疑飼料發(fā)生霉變。飼料及其污染霉菌的菌絲體能夠縱橫交織，編織成菌絲蛛網(wǎng)狀物，這種結(jié)構(gòu)導(dǎo)致飼料形成結(jié)塊。在肉眼觀察發(fā)現(xiàn)這些菌絲網(wǎng)狀物之前，菌絲體就已經(jīng)在飼料中大量生長(zhǎng)繁殖，由此說明其中已經(jīng)含有霉菌毒素。因此判斷飼料發(fā)生霉變一種最簡(jiǎn)易實(shí)用的方法就是飼料存在結(jié)塊。

顯微鏡檢測(cè)。不同霉菌菌落會(huì)形成的特有形態(tài)，并具有不同的生物學(xué)特征，通過光學(xué)顯微鏡觀察能夠進(jìn)一步確認(rèn)?，F(xiàn)列舉幾種常見的霉菌菌落的特征：曲霉屬菌落可呈多種顏色，表面通常呈絨毛狀，開始時(shí)呈灰白色或者白色，但形成孢子后就會(huì)呈現(xiàn)不同顏色，通常不同菌種有所不同；青霉屬菌落通常呈灰綠色，且菌落呈四種不同形態(tài)，即束狀、絨狀、繩狀、絮狀等，部分菌落會(huì)存在放射性皺褶，能夠形成同心輪紋，部分在基質(zhì)表面存在滲出液，且在顯微鏡下能夠看到特殊的帚狀體結(jié)構(gòu)；鐮刀菌屬菌落通常呈白色絨毛狀，可分泌可溶性色素，能夠形成兩種類型的分生孢子，在顯微鏡下可見小型分生孢子主要呈圓形、柱形、卵形以及梨形等，而大型分生孢子通常都呈鐮刀形。

酶聯(lián)免疫吸附法（ ELISA）。該法是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)原理，先在酶標(biāo)板上加入已知抗原，再加入酶標(biāo)記抗體以及樣品提取液，完全混合，經(jīng)過充分反應(yīng)再加入去離子水將多余的抗體洗去，接著加入酶的底物就會(huì)形成有色物質(zhì)，然后加入終止液來終止反應(yīng)，之后即可使用酶標(biāo)儀對(duì)酶底物的降解量進(jìn)行測(cè)定，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的抗原量。例如，常用ELISA法檢測(cè)黃曲霉毒素Bl、煙曲霉毒素。該法能夠?qū)悠愤M(jìn)行凈化處理，能夠快速檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用低，在對(duì)大批量樣品進(jìn)行快速篩選時(shí)使用。

熒光檢測(cè)法（FLD）。該法一般同免疫親和柱配合應(yīng)用，也是美國(guó)AOAC規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，我國(guó)國(guó)標(biāo)（GB/T18979-2003）也使用該法檢測(cè)黃曲霉毒素的含量。FLD方法是先對(duì)樣品用甲醇或水提取，接著進(jìn)行過濾稀釋，之后再使用免疫親和柱層析（存在黃曲霉毒素特異抗體）進(jìn)行凈化，然后使用超純水將雜質(zhì)除去，同時(shí)洗去甲醇，最后再添加溴溶液，洐生后使用熒光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。一般來說，通常使用該法來檢測(cè)玉米中赤霉烯酮的含量。該法操作快捷、費(fèi)用較低，不需要使用霉菌毒素的標(biāo)準(zhǔn)品，避免傷害工作人員，一般是快速篩選霉菌毒素使用的方法。

薄層層析法（TLC）。該法是測(cè)定飼料以及食品中霉菌毒素含量的一種國(guó)際規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)方法，其主要原理是對(duì)不同的樣品使用相同的提取溶劑對(duì)其中所含的霉菌毒素進(jìn)行提取，接著使用柱層析進(jìn)行純化，再在薄層板上進(jìn)行展開分離，最后根據(jù)不同霉菌毒素會(huì)產(chǎn)生特有的熒光，再結(jié)合熒光斑點(diǎn)大小以及強(qiáng)弱同標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，由此確定霉菌毒素的具體含量。該法使用設(shè)備比較簡(jiǎn)單，且容易普及推廣，因此已經(jīng)在國(guó)內(nèi)外普遍應(yīng)用，但該方法需要對(duì)樣品進(jìn)行比較復(fù)雜的前處理，且提取和凈化效果相對(duì)較差，特別是提取液中如果存在較多雜質(zhì)，就會(huì)影響其在展開時(shí)的熒光斑點(diǎn)強(qiáng)度，盡管雙向展開能夠避免雜質(zhì)干擾，但會(huì)導(dǎo)致操作步驟復(fù)雜，所需時(shí)間延長(zhǎng)。

3 控制措施

確保飼料、墊料、環(huán)境以及用具等干燥、清潔，避免飼料、飼草發(fā)生霉變。飼料的貯存溫度必須在25℃以下，同時(shí)相對(duì)濕度要小于85%，避免飼料受潮、發(fā)熱。飼料要定期進(jìn)行檢查，如果發(fā)生霉變要立即挑除，避免霉菌蔓延。目前，飼料加工行業(yè)中防止飼料發(fā)生霉變的一種比較普遍的方式是在飼料中加人防霉劑，這是一種比較直接且有效地方法?，F(xiàn)在一般選擇使用的防霉制劑主要是丙酸、乙酸、苯甲酸、山梨酸及其鹽類，特別是在飼料加工處理中通常使用丙酸和丙酸鹽類，一般每1000 kg飼料加入1—2 kg。