董文凱，孫啟霞，韓金濤，齊曉雪，王瀅秀，李 磊

（山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250100）

氟唑環(huán)菌胺（sedaxane）是一種新型琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌劑。其通過干擾病原菌線粒體呼吸電子傳遞鏈上的蛋白復(fù)合體Ⅱ（即琥珀酸脫氫酶）來抑制病原菌線粒體呼吸功能，阻礙其能量的代謝，抑制病原菌生長并致其死亡。氟唑環(huán)菌胺適用于谷物、大豆、油菜、玉米、馬鈴薯、甘蔗和果蔬等作物，防治黑粉病、絲黑穗病、黑星病、灰霉病等病害。其常用于種子包衣處理，商品名為Vibrance[1-2]?？┚妫╢ludioxonil）為新型苯基吡咯類觸殺型殺菌劑。其通過干擾與葡萄糖磷?；嘘P(guān)的轉(zhuǎn)運(yùn)，來抑制病原菌菌絲體的生長，并致其死亡?？┚孢m用于谷物、大豆、油菜、玉米、馬鈴薯、甘蔗和果蔬等作物，防治灰霉病、黑星病等病害。其既可用于葉面噴霧，也可用于種子處理，商品名為Celest、適樂時(shí)等[3-5]。氟唑環(huán)菌胺和咯菌腈兩者復(fù)配不僅具有突出的防治病害能力，而且能促進(jìn)作物生根[6]。

氟唑環(huán)菌胺的化學(xué)名稱為N-[2-[1,1'-聯(lián)環(huán)丙基]-2-基苯基]-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺，其有順式和反式2種異構(gòu)體，以反式異構(gòu)體為主[7]?？┚娴幕瘜W(xué)名稱為4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧雜環(huán)戊烯-4-基)-1H-吡咯-3-腈。氟唑環(huán)菌胺和咯菌腈的結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 結(jié)構(gòu)式

關(guān)于氟唑環(huán)菌胺和咯菌腈復(fù)配產(chǎn)品的分析方法目前尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)建立了同一色譜條件下分離測定8%氟環(huán)·咯菌腈懸浮種衣劑中有效成分的方法。方法操作快速、簡便，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200型高效液相色譜儀，帶二極管陣列檢測器和自動(dòng)進(jìn)樣器；Agilent色譜工作站；分析天平；微孔濾膜，0.45 μm有機(jī)膜。

乙腈（色譜純）；新蒸2次蒸餾水；氟唑環(huán)菌胺標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.5%）、咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.8%），由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所提供；8%氟環(huán)·咯菌腈懸浮種衣劑（3.55%氟唑環(huán)菌胺＋4.45%咯菌腈），瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司。

1.2 液相色譜操作條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相：乙腈＋0.1%磷酸水溶液（體積比65∶35）；流量：1.5 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：220 nm；進(jìn)樣體積：5 μL。保留時(shí)間：咯菌腈約為3.4 min，氟唑環(huán)菌胺約為4.2 min（反式）和4.7 min（順式）。

標(biāo)樣溶液及試樣溶液高效液相色譜圖見圖2、圖3。上述操作條件為典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)，對給定的操作參數(shù)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，以獲得最佳效果。

圖2 標(biāo)樣溶液高效液相色譜圖

圖3 8%氟環(huán)·咯菌腈懸浮種衣劑高效液相色譜圖

1.3 測定步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取氟唑環(huán)菌胺標(biāo)準(zhǔn)品0.03 g（精確至0.000 2 g）、咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)品0.04 g（精確至0.000 2 g），置于100 mL容量瓶中，先加入5 mL水，再用乙腈溶解定容，搖勻，過濾備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣0.8 g（精確至0.000 2 g），置于100 mL容量瓶中，先加入5 mL水分散溶解，再用乙腈稀釋至刻度，搖勻，過濾備用。

1.3.3 測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對變化＜1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.3.4 計(jì)算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中氟唑環(huán)菌胺（咯菌腈）峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氟唑環(huán)菌胺（咯菌腈）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w（%）按下式計(jì)算。

式中：A1—標(biāo)樣溶液中氟唑環(huán)菌胺（咯菌腈）峰面積的平均值；A2—試樣溶液中氟唑環(huán)菌胺（咯菌腈）峰面積的平均值；m1—標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，g；m2—試樣的質(zhì)量，g；P—標(biāo)準(zhǔn)品中氟唑環(huán)菌胺（咯菌腈）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動(dòng)相的選擇

選用ZORBAX SB-C18反相柱，根據(jù)氟唑環(huán)菌胺和咯菌腈的理化性質(zhì)，以乙腈為溶劑溶解樣品，并選擇乙腈＋水為流動(dòng)相。以不同比例的乙腈＋水為流動(dòng)相進(jìn)行分離檢測，為了得到更好的分離效果和峰形，在水中加入磷酸制成0.1%磷酸水溶液。結(jié)果顯示，在1.2液相色譜條件下，氟唑環(huán)菌胺、咯菌腈與雜質(zhì)能得到很好的分離，且峰形對稱，基線平穩(wěn)。

2.1.2 檢測波長的選擇

使用高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得氟唑環(huán)菌胺和咯菌腈的紫外吸收譜圖（見圖4、圖5）。試驗(yàn)選擇220 nm為檢測波長，既能保證氟唑環(huán)菌胺和咯菌腈有較強(qiáng)吸收峰，同時(shí)能避免溶劑干擾。

圖4 氟唑環(huán)菌胺紫外吸收譜圖

圖5 咯菌腈紫外吸收譜圖

2.2 線性相關(guān)性測定

采用1.3.1標(biāo)樣溶液配制方法，稱取不同質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)品，配制系列標(biāo)樣溶液。氟唑環(huán)菌胺的質(zhì)量濃度分別為0.120 0、0.180 1、0.300 1、0.480 2、0.600 2 g/L，咯菌腈的質(zhì)量濃度分別為0.160 6、0.240 8、0.401 4、0.642 2、0.802 8 g/L。在1.2色譜條件下，依次進(jìn)樣，以氟唑環(huán)菌胺、咯菌腈質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，響應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線。試驗(yàn)得到氟唑環(huán)菌胺線性方程為y=11 895x＋2.80，相關(guān)系數(shù)為1.000 0；咯菌腈線性方程為y=13 169x＋88.36，相關(guān)系數(shù)為0.999 8。結(jié)果表明，氟唑環(huán)菌胺、咯菌腈在測試質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗(yàn)

在1.2色譜條件下對同一8%氟環(huán)·咯菌腈懸浮種衣劑平行測定5次，結(jié)果見表1。測得氟唑環(huán)菌胺標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01，變異系數(shù)為0.26%；咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01，變異系數(shù)為0.21%。該方法精密度較好。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

在已知含量的8%氟環(huán)·咯菌腈懸浮種衣劑試樣中分別加入一定量的氟唑環(huán)菌胺（咯菌腈）標(biāo)準(zhǔn)品，在1.2色譜條件下測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。由表2可知，該方法回收率較高，可以準(zhǔn)確測定制劑中氟唑環(huán)菌胺（咯菌腈）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立了同時(shí)分離并測定8%氟環(huán)·咯菌腈懸浮種衣劑中有效成分的高效液相色譜分析方法。該方法線性關(guān)系良好，準(zhǔn)確度和精密度較高，且具有快速、簡便的特點(diǎn)，適用于8%氟環(huán)·咯菌腈懸浮種衣劑的質(zhì)量控制。