張衛(wèi)兵，張 蓉，畢研亮，屠 焰，杜漢昌，田忠紅，刁其玉*

(1. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，奶牛營養(yǎng)學(xué)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100081;2. 山東農(nóng)業(yè)生物免疫技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室，山東銀香偉業(yè)集團(tuán)有限公司，菏澤 274500)

犢牛是奶牛場(chǎng)的未來，犢牛培育是牛場(chǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。但犢牛出生后要經(jīng)歷營養(yǎng)、環(huán)境和心理的轉(zhuǎn)變，由于消化酶分泌不足，胃腸道發(fā)育不全，免疫系統(tǒng)未建立，日糧形態(tài)變化等原因，在轉(zhuǎn)變過程中會(huì)出現(xiàn)一些問題，如腹瀉、呼吸道疾病和高水平氧化應(yīng)激等，為犢牛的培育帶來巨大挑戰(zhàn)。為了應(yīng)對(duì)這個(gè)挑戰(zhàn)，傳統(tǒng)做法是在犢牛培育過程中添加適當(dāng)抗生素作為生長促進(jìn)劑，在維持犢牛健康的情況下又能取得較理想增重。但在動(dòng)物生產(chǎn)中使用抗生素的社會(huì)接受度越來越低，因此尋找經(jīng)濟(jì)、有效、有機(jī)的生長促進(jìn)劑變得異常重要。植物提取物因具有天然性、多功能性、無抗藥性等獨(dú)特性質(zhì)而逐漸成為抗生素作為生長促進(jìn)劑的理想替代品。植物提取物在動(dòng)物營養(yǎng)上已顯示出具有提高飼料轉(zhuǎn)化效率、促進(jìn)動(dòng)物生長、抗氧化應(yīng)激、提高免疫力和調(diào)控瘤胃發(fā)酵等特性。白藜蘆醇和血根堿就是兩種天然的植物提取物。白藜蘆醇(resveratrol, RES)是一種非黃酮類多酚物質(zhì)，廣泛存在于葡萄、花生及中藥虎杖等植物中，RES及其衍生物具有許多生物活性和藥理作用，包括抗氧化活性，神經(jīng)保護(hù)活性，心保護(hù)能力[1]。血根堿(sanguinarine, SAG)是一種苯菲啶異喹啉類生物堿，主要存在于博落回、白屈菜、血水草以及紫堇中，具有抗菌、抗氧化以及抗炎癥作用，也用來控制血吸蟲，此外還具有抗腫瘤特性[2]。

RES和SAG作為飼料添加劑在單胃動(dòng)物上進(jìn)行了一些研究[3-6]，但在反芻動(dòng)物上的研究很少[7-10]，尤其是在幼齡反芻動(dòng)物的生長性能方面。因此，本試驗(yàn)研究了RES和SAG對(duì)2～6月齡荷斯坦?fàn)倥ＩL性能和血清指標(biāo)的影響，為RES和SAG在犢牛生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)于2015年11月—2016年2月在山東省菏澤市曹縣銀香偉業(yè)第二牧場(chǎng)進(jìn)行。平均氣溫和相對(duì)濕度分別為5～30 ℃和30%～60%。

1.2 試驗(yàn)飼糧與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

代乳粉(milk replacer, MR)，專利編號(hào)ZL 02128844.5，來自北京精準(zhǔn)動(dòng)物營養(yǎng)研究中心。

血根堿(sanguinarine, SAG)，純度>99%；白藜蘆醇(resveratrol, RES)，純度>98%。二者均來自湖南美可達(dá)生物資源有限公司。

犢牛開食料來自牛場(chǎng)的飼料廠。

選用飼喂合格初乳、具有相似遺傳背景、體重一致、健康的5日齡中國荷斯坦母犢牛54頭，先在犢牛島內(nèi)飼養(yǎng)，每個(gè)犢牛島(1.2 m×2.0 m，墊料為鋸末)飼養(yǎng)1頭犢牛。按照體重和日齡一致原則，將犢牛隨機(jī)分為3組，每組18頭。分別記為：MR組、RES組和SAG組。MR組為對(duì)照組單獨(dú)飼喂MR；SAG組在飼喂MR的基礎(chǔ)上每千克體重添加0.05 mg SAG；RES組在飼喂MR的基礎(chǔ)上每千克體重添加4 mg RES。犢牛60～63日齡斷奶，斷奶后相同處理的犢牛放在同一牛圈，直到180日齡。SAG和RES在犢牛斷奶前添加到代乳粉液體中飼喂?fàn)倥?，斷奶后RES和SAG添加到犢牛料里面飼喂?fàn)倥?。隨著犢牛體重增加，SAG和RES添加量每2周調(diào)整1次。

Vieira等[3]對(duì)博落回提取物(主要以SAG為主，其中SAG含量≥1.5%)在肉雞日糧中的使用劑量范圍為0.01～0.045 mg·(kg BW)-1，并且在0.035 mg·(kg BW)-1時(shí)飼料轉(zhuǎn)化率和增重最好。饒華等[11]在8～25 kg仔豬飼糧中添加SAG量為0.021～0.023 mg·(kg BW)-1，本試驗(yàn)考慮到犢?？赡苡胁糠值拇榉垡后w進(jìn)瘤胃，選擇SAG的添加量為0.05 mg·(kg BW)-1。RES的添加量來自本實(shí)驗(yàn)室在綿羊上的推薦量。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)開始前，用強(qiáng)力消毒靈溶液對(duì)整個(gè)圈舍進(jìn)行全面的噴霧消毒，之后每周對(duì)所有欄位重復(fù)消毒1次，每隔2周用10%生石灰消毒牛舍。

MR中不添加抗生素等生長促進(jìn)劑或抗球蟲藥物。斷奶前所有犢牛均采食代乳粉，14日齡開始給所有犢牛提供0～3月齡開食料直到3月齡；斷奶后提供優(yōu)質(zhì)粗飼料(苜蓿草和燕麥草)，4月齡開始由0～3月齡開食料換成4～6月齡開食料直到180日齡。開食料和干草以及清潔飲水均自由采食，MR的營養(yǎng)成分，開食料組成和營養(yǎng)水平見表1。

表1基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

1.預(yù)混料為每kg飼糧提供：維生素A 15 000 IU；維生素D35 000 IU；維生素E 50 mg；銅 12.5 mg；鐵 90 mg；鋅 90 mg；錳60 mg；碘 1.0 mg；硒 0.3 mg；鈷 0.5 mg。2. 數(shù)據(jù)為實(shí)測(cè)值

1. The premix provided the following per kg of diets: VA 15 000 IU; VD35 000 IU; VE 50 mg; Cu 12.5 mg; Fe 90 mg; Zn 90 mg; Mn 60 mg; I 1.0 mg; Se 0.3 mg; Co 0.5 mg.2. Data are measured values

1.4 樣品采集及分析方法

1.4.1 飼料樣品采集 每天進(jìn)行代乳粉和開食料的樣品采集，正試期內(nèi)的樣品混勻后儲(chǔ)存在自封袋里，-20 ℃冷凍保存待測(cè)。

1.4.2 血液樣品的采集 犢牛60、180日齡時(shí)采集血樣。每組選取10頭牛，在早晨第1次飼喂前，由頸靜脈采血約10 mL，傾斜放置至析出血清為止，3 000 r·min-1離心10 min，收集血清于試管中，-20 ℃保存，待測(cè)。

1.4.3 生長性能指標(biāo)測(cè)定 56、90、120、150和180日齡在晨飼前稱重，并在同日齡測(cè)量體高、胸圍、體長、十字部高和十字部寬。

1.4.4 樣品分析測(cè)定 顆粒料中營養(yǎng)水平的測(cè)定：總能(GE)、干物質(zhì)(DM)、粗蛋白質(zhì)(CP)、粗脂肪(EE)、粗灰分、鈣(Ca)、磷(P)和中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量參照張麗英[12]的測(cè)定方法進(jìn)行。

血清指標(biāo)包括血清生化指標(biāo)、血清激素指標(biāo)和血清免疫指標(biāo)。游離脂肪酸(FFA)、免疫球蛋白A (IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、總抗氧化力(T-AOC)、過氧化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)用全自動(dòng)生化分析儀(日立7160，日本)分析，試劑盒來自北京華英生物技術(shù)研究所。血清尿素氮(SUN)用全自動(dòng)生化分析儀(日立7160，日本)分析，試劑盒來自中生北控股份有限公司。胰島素(INS)、去甲腎上腺素(NE)用全自動(dòng)放免計(jì)數(shù)儀(r-911，中國)測(cè)定，試劑盒來自北京華英生物技術(shù)研究所。皮質(zhì)醇(COR)、白介素-1β (IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、γ干擾素(γ-IFN)、生長激素(GH)、類胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-1)、表皮生長因子(EGF)用全自動(dòng)酶標(biāo)儀(STAT FAX 2100，美國)檢測(cè)，試劑盒來自北京華英生物技術(shù)研究所。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析

數(shù)據(jù)表示為“平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)誤(standard error of mean, SEM)”。數(shù)據(jù)采用SAS9.4統(tǒng)計(jì)軟件中的MIXRD模型分析，犢牛個(gè)體作為誤差項(xiàng)分析主效應(yīng)，時(shí)間以及時(shí)間與主效應(yīng)的交互作為殘差。當(dāng)主效應(yīng)之間有交互作用時(shí)用最小顯著差數(shù)法(least significant difference, LSD)比較平均數(shù)的差異。P<0.05表示統(tǒng)計(jì)差異顯著，0.05≤P≤0.10表示有統(tǒng)計(jì)顯著差異的趨勢(shì)。

統(tǒng)計(jì)分析模型：Yijk=μ+Ti+Dj+TDij+C(T)ik+εijk，

式中，Yijk為因變量；μ為總體均值；Ti為處理(i=1,2,3)，固定效應(yīng)；Dj為日齡(j=56、60、90、120、150、180),固定效應(yīng)；TDij為處理和日齡的交互作用；C(T)ik(i=1,2…54)為受試犢牛，隨機(jī)效應(yīng)；εijk為殘差。

2 結(jié) 果

2.1 RES和SAG對(duì)犢牛生長性能的影響

由表2可以看出，試驗(yàn)開始時(shí)各組犢牛體重之間差異不顯著(P>0.05)。RES和SAG組犢牛120和150日齡的體重均高于MR組，有達(dá)到顯著水平的趨勢(shì)(P=0.085 6和P=0.050 4)。RES顯著提高180日齡犢牛體重(P=0.019 9)，SAG對(duì)180日齡犢牛體重提高也有達(dá)到顯著的趨勢(shì)(P=0.081 2)，3個(gè)組犢牛體重分別為182.14、196.28和192.70 kg。組間總增重差異不顯著(P>0.05)，但RES組犢牛180日齡體重比MR組提高了14.14 kg。

體尺方面，日糧添加SAG促進(jìn)犢牛體高和十字部高的增加，SAG對(duì)150和180日齡犢牛體高有顯著的增加作用(P=0.029 5和P=0.012 3)，對(duì)180日齡犢牛十字部高也有顯著的增加作用。RES有提高犢牛十字部寬增量的趨勢(shì)(P=0.070 4)。RES和SAG對(duì)56～180日齡犢牛體長和胸圍沒有顯著影響(P>0.05)。

2.2 RES和SAG對(duì)犢牛血清指標(biāo)的影響

從表3可以看出，RES和SAG對(duì)60日齡犢牛血清FFA、INS、GH、EGF和IGF-1濃度產(chǎn)生顯著影響(P<0.05)。與MR組相比，60日齡時(shí)RES和SAG顯著降低血清FFA和INS濃度(P=0.001 0和P=0.007 0)，180日齡時(shí)差異消失(P>0.05)。RES顯著提高60日齡犢牛血清GH、EGF和IGF-Ⅰ濃度(P=0.000 7、P<0.000 1和P=0.000 1)，180日齡時(shí)差異消失(P>0.05)。SAG顯著降低60日齡犢牛血清EGF濃度(P<0.000 1)。RES和SAG對(duì)犢牛血清SUN、COR和NE濃度沒有顯著影響(P>0.05)。

由表4可知，體液免疫指標(biāo)方面，與MR組相比SAG顯著降低60日齡犢牛血清IgA(P=0.014 8)和180日齡IgM濃度(P=0.009 3)，對(duì)IgG影響不顯著(P>0.05)。免疫因子中，60日齡SAG組犢牛血清TNF-α濃度顯著低于RES組(P=0.031 3)，但與MR組無顯著差異(P>0.05)。血清γ-IFN和IL-1β濃度不受RES和SAG影響(P>0.05)。RES和SAG對(duì)犢牛血清ALT和AST沒有顯著影響(P>0.05)?？寡趸笜?biāo)方面，60日齡時(shí)SAG組犢牛血清MDA濃度顯著高于MR組(P=0.001 1)，180日齡時(shí)組間無顯著差異(P>0.05)；SAG組60日齡犢牛血清CAT濃度顯著低于RES組(P=0.034 9)，但與MR組無顯著差異(P>0.05)；RES和SAG對(duì)犢牛血清SOD、GSH-PX和T-AOC無顯著影響(P>0.05)。

表2RES和SAG對(duì)犢牛生長性能的影響

Table2EffectsoftheRESandSAGongrowthperformanceofcalves

項(xiàng)目Item日齡Days of age處理TreatmentMRRESSAGSEMP值P-value處理Treatment日齡Days of age處理×日齡Treatment× Days of age體重/kg5667.0368.6469.414.0390.677 2<0.000 10.060 9Body weight9089.3394.3790.324.2820.392 5120114.32124.72121.204.4270.085 6150142.86153.21154.734.4270.050 4180182.14b196.28a192.70ab4.4270.019 9總增重Total weight gain114.73127.83123.815.0210.154 9體長/cm5687.5087.3787.591.3220.904 5<0.000 10.615 3Body length9090.9891.9393.781.6850.200 6120102.97104.29104.601.4970.421 0150112.02112.27114.971.4970.144 3180119.11120.51121.821.4970.181 8增長 Growth31.2333.4734.201.3620.230 6體高/cm5682.1183.5083.120.8930.261 2<0.000 10.011 8Body height9089.4789.3689.290.9300.888 012093.8694.8395.390.9620.244 515098.27b99.45ab101.17a0.9800.029 5180103.86b105.45ab107.17a0.9620.012 3增長 Growth21.9522.2724.060.8800.111 2胸圍/cm 5694.2895.7296.471.3910.455 8<0.000 10.604 9Heart girth90106.97106.68107.241.5270.773 2120111.64114.74114.861.5080.118 8150118.28120.44120.551.5080.270 3180129.19131.54131.991.5080.174 6增長 Growth34.7036.5735.691.3670.534 0十字部高/cm5686.9288.8488.410.9220.138 9<0.000 10.086 1Hip height9094.9594.8395.020.9680.878 612099.6999.95100.851.0160.398 6150104.23105.45106.761.0170.067 8180109.86b111.42ab112.60a0.9990.045 7增長 Growth23.2022.9224.250.9670.475 5十字部寬/cm5623.6823.3123.650.4060.513 6<0.000 10.778 3Hip width9025.1125.6025.760.4610.285 812028.3728.4928.430.4500.841 215030.1130.0230.610.4610.329 118031.5232.2232.130.4610.259 0增長 Growth7.91b9.14a8.53ab0.5170.070 4

不同處理間，同行無字母或數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference between the treatments (P>0.05), values with different small letter superscripts mean significant difference between the treatments (P<0.05). The same as the following tables

表3RES和SAG對(duì)犢牛血清營養(yǎng)物質(zhì)代謝以及內(nèi)分泌指標(biāo)的影響

Table3EffectsoftheRESandSAGonlevelsofnutrientmetabolismandendocrineindexesintheserumofcalves

項(xiàng)目Item日齡Days of age處理TreatmentMRRESSAGSEMP值P-value處理Treatment日齡Days of age處理×日齡Treatment× Days of age血清尿素氮/ (mmol·L-1)607.747.927.502.3650.899 50.646 00.969 8Serum urea nitrogen, SUN1806.787.087.330.4280.375 8平均值 Mean7.267.507.411.1770.989 9游離脂肪酸/(mmol·L-1) 600.44a0.36b0.38b0.0150.001 00.803 40.100 5Free fatty acids, FFA 1800.410.400.390.0140.503 0平均值 Mean0.42a0.38b0.39b0.0090.003 5皮質(zhì)醇/(ng·mL-1)6016.2316.2317.052.2340.799 00.803 50.544 5Cortisol, COR 1808.9216.8420.655.3140.126 3平均值 Mean12.58b16.53ab18.85a1.9550.083 3胰島素/(uIU·mL-1)6015.29a8.61b10.12b1.2530.007 00.210 00.209 6Insulin, INS18013.8212.7712.381.5580.516 4平均值 Mean14.56a10.69b11.25b0.8710.008 2去甲腎上腺素/ (pg·mL-1)60398.74430.10370.6028.4720.592 80.713 50.269 3Norepinephrine, NE180411.55398.01409.5317.6870.151 1平均值 Mean405.15424.06390.0618.1020.643 0生長激素/(ng·mL-1)603.94b4.55a3.95b0.1120.000 70.879 70.388 0Growth hormone, GH1803.984.254.140.2360.416 4平均值 Mean3.964.404.050.1350.066 1表皮生長因子/(ng·mL-1)600.81b0.88a0.64c0.020<0.000 10.593 40.013 7Epidermal growth factor, EGF1800.870.730.800.0620.119 9平均值 Mean0.84a0.80ab0.72b0.0310.030 1類胰島素樣生長因子-Ⅰ/(ng·mL-1)60167.44b213.37a168.57b7.2090.000 10.517 20.036 9Insulin-like growth factor-I, IGF-I180195.43174.65203.1419.7320.316 3平均值 Mean181.44194.01185.8610.5210.695 7

表4RES和SAG對(duì)犢牛血清免疫和抗氧化指標(biāo)的影響

Table4EffectsoftheRESandSAGonlevelsofimmunityandantioxidantindexesintheserumofcalves

項(xiàng)目Item日齡Days of age處理TreatmentMRRESSAGSEMP值P-value處理Treatment日齡Days of age處理×日齡Treatment× Days of age免疫球蛋白A/(g·L-1) 600.70a0.63b0.65b0.0180.014 8<0.000 10.130 3Immunoglobulin A, IgA 1800.740.740.720.0100.193 2平均值 Mean0.72a0.69b0.68b0.0100.022 0免疫球蛋白G/(g·L-1)6010.1210.049.720.3050.365 50.026 50.222 1Immunoglobulin G, IgG18010.1210.5310.490.1570.071 1平均值 Mean10.1210.2910.110.1870.746 6免疫球蛋白M/ (g·L-1)602.432.532.320.0740.054 70.047 60.814 5Immunoglobulin M, IgM1802.59a2.66a2.39b0.0690.009 3平均值 Mean2.51a2.60a2.35b0.0500.006 4腫瘤壞死因子-α/(pg·mL-1)6054.80ab57.90a51.55b1.9760.031 30.032 20.116 8Tumor necrosis factor α, TNF-α18053.1850.8551.151.5600.299 1平均值 Mean53.9954.3851.351.3500.243 7γ干擾素/(pg·mL-1)6034.0235.4233.640.9070.176 10.332 80.475 1γ interferon, γ-IFN 18037.9934.1836.172.8300.349 2平均值 Mean36.0134.8034.901.4320.805 1白介素-1β/(pg·mL-1) 6020.7721.1720.060.5640.369 10.679 80.888 4Interleukin-1β, IL-1β18020.6820.6720.080.4800.175 6平均值 Mean20.7320.9220.070.3400.200 9谷丙轉(zhuǎn)氨酶/(U·L-1)6016.5422.5224.393.1540.089 90.615 40.344 4Alanine aminotransferase, ALT (U/L)18019.0021.8519.541.3780.156 2 平均值 Mean17.7722.1821.971.7010.137 8 谷草轉(zhuǎn)氨酶/ (U·L-1)6054.0158.2362.945.7950.285 70.510 60.455 7Aspartate aminotransferase, AST18059.2650.5056.124.0500.137 7平均值 Mean56.6454.3659.532.9620.476 1超氧化物歧化酶/(U·mL-1)6049.3250.5948.261.7530.355 70.996 80.441 1Superoxide dismutase, SOD18052.6247.3648.163.1950.254 1平均值 Mean50.9748.9748.211.8640.563 7谷胱甘肽過氧化物酶/(U·mL-1)601 136.471 166.731 123.9758.5350.609 70.996 40.996 0Glutathione peroxidase, GSH-Px1801 129.881 172.811 125.2686.8610.701 7平均值 Mean1 133.181 169.771 124.6254.1110.822 8總抗氧化力/(U·mL-1)6010.8510.7810.860.4390.896 10.989 40.887 1Total antioxidant capacity, T-AOC18010.7411.1510.620.8480.663 3平均值 Mean10.7910.9610.740.4940.946 2過氧化氫酶/(U·mL-1)6042.68ab43.55a42.03b0.4840.034 90.997 40.253 2Catalase, CAT18036.5046.2345.514.3020.121 7平均值 Mean39.5944.8943.772.1010.189 9丙二醛/(nmol·mL-1)6037.61b35.06b44.87a1.9040.001 1<0.000 10.027 5Malondialdehyde, MDA1807.046.268.070.9610.194 0平均值 Mean22.33b20.66b26.47a1.0970.002 7

3 討 論

3.1 RES和SAG對(duì)犢牛生長性能的影響

RES和SAG用于反芻動(dòng)物促生長劑的研究不多，其對(duì)單胃動(dòng)物的促生長效果也未取得一致結(jié)果[12-15]。本試驗(yàn)中，添加RES提高了6月齡荷斯坦?fàn)倥ｓw重。這與Zhang等[13]在肉雞上添加RES得到的結(jié)果相同。在應(yīng)激條件下畜禽生產(chǎn)性能會(huì)降低，但是在熱應(yīng)激或者注射疫苗的情況下添加RES能提高生長性能[14]。此外，在豬和鵪鶉上添加RES對(duì)豬的體增重和采食量以及對(duì)鵪鶉的產(chǎn)蛋量影響不顯著[4,15]，與本試驗(yàn)結(jié)論不一致。RES是有效的植物雌激素[16]，與雌二醇在結(jié)構(gòu)上極為相似，都具有多酚結(jié)構(gòu)，可通過下丘腦-垂體激素軸影響GH分泌，GH在直接促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)合成的同時(shí)促進(jìn)生長激素受體發(fā)育，通過提高IGF-1分泌水平，發(fā)揮其對(duì)肌肉組織促生長作用，最終使動(dòng)物生長速度加快[17]。這可能是RES促進(jìn)動(dòng)物生長性能的一個(gè)原因。RES提高動(dòng)物生長性能，在不同動(dòng)物表現(xiàn)形式不一樣，可能是由于動(dòng)物種類不同造成的。SAG或者類似物顯著提高斷奶仔豬[5]和鯉魚[18]的生長性能，這與本試驗(yàn)結(jié)果趨勢(shì)一致，但本試驗(yàn)條件下沒有達(dá)到顯著水平。在熱應(yīng)激條件下， SAG或者類似物也可提高綿羊的生長性能[9]。有研究報(bào)道，在產(chǎn)奶牛上添加博落回提取物(主要成分為SAG)，不影響奶牛增重、產(chǎn)奶量以及采食量[19]。盡管SAG對(duì)犢牛體重增加沒有達(dá)到顯著水平，但在180日齡時(shí)顯著提高犢牛的體高和十字部高?？赡苁荢AG具有一定的調(diào)控作用，使得更多的營養(yǎng)物質(zhì)用于四肢骨骼發(fā)育，這為奶牛成年后具有優(yōu)秀生產(chǎn)性能奠定了一定的基礎(chǔ)。也有人認(rèn)為是由于SAG在胃腸道內(nèi)不可逆的抑制了L-氨基酸脫羧酶活性，減少芳香族氨基酸降解，提高了動(dòng)物對(duì)色氨酸、苯丙氨酸在小腸中的利用效率和蛋白質(zhì)的存留率，進(jìn)而提高了動(dòng)物生長性能[20]。也可能是由于RES和SAG都具有抗菌作用，保證了犢牛健康，促進(jìn)了犢牛生長。

3.2 RES和SAG對(duì)犢牛血清指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)經(jīng)常用來反映動(dòng)物機(jī)體健康狀態(tài)，這些參數(shù)是動(dòng)物生理、病理和營養(yǎng)狀態(tài)的良好指標(biāo)，并有可能用于闡明營養(yǎng)因素和飲食中添加劑對(duì)血清指標(biāo)的影響。FFA是動(dòng)物機(jī)體中重要的能量代謝物質(zhì)，其代謝可以敏感地反映脂質(zhì)代謝，并且其濃度變化反映機(jī)體的營養(yǎng)狀況和體力活動(dòng)[21]。Rivera等[22]在肥胖Zucker大鼠上的研究發(fā)現(xiàn)，RES導(dǎo)致FFA濃度顯著降低，此外丁亞南等[23]在雄性SD大鼠上添加RES也顯著降低血清FFA濃度，與本試驗(yàn)結(jié)論一致。Sergent等[24]在模擬腸脂肪消化的體外模型中，添加RES可以通過抑制三酰甘油消化降低腸細(xì)胞對(duì)脂肪酸的吸收，降低血清FFA的含量。Cho等[25]在倉鼠高能日糧中添加RES不影響血清FFA的含量，但是顯著降低總膽固醇和三酰甘油的含量。SAG對(duì)動(dòng)物血清FFA的影響尚未見報(bào)道，但是在蛋雞[6]日糧中添加SAG對(duì)三酰甘油含量沒有影響；而在蛋雞[6]和豬[26]的研究中顯著降低血清膽固醇含量，這種降低血清膽固醇的原因可能與通過肝HMG-COA還原酶抑制(膽固醇生物合成的限速酶)以及刺激肝膽固醇-7-羥化酶將膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸的過程來刺激藥用植物的低膽固醇血癥活性有關(guān)[6]。此外，在比利時(shí)藍(lán)牛公牛((131±3.5) kg)日糧中添加植物提取物香芹酚、肉桂醛和辣椒素的混合物，顯著降低犢牛血清FFA濃度[27]。

胰島素是營養(yǎng)物質(zhì)分配穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中的關(guān)鍵合成代謝激素，可以抑制脂肪酶的活性，減少體內(nèi)脂肪的分解與動(dòng)員，使血液中FFA減少，酮體生成減少[27-28]。在小鼠的高脂肪日糧中添加RES，顯著降低血漿INS濃度[29-30]。RES改善人胰島素敏感性，可能是由于RES誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激減少，導(dǎo)致通過蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)途徑產(chǎn)生更有效的胰島素信號(hào)有關(guān)[31]。INS和FFA的變化一致也說明RES和SAG對(duì)INS和FFA的影響在正常范圍內(nèi)。

皮質(zhì)醇是一種由腎上腺皮質(zhì)分泌的類固醇激素，當(dāng)動(dòng)物處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，它對(duì)動(dòng)物體的松弛反應(yīng)起作用；另外，動(dòng)物體內(nèi)皮質(zhì)醇過量會(huì)引起血壓升高，降低免疫力，炎癥反應(yīng)[32]。因此，維持皮質(zhì)醇的最佳水平對(duì)于動(dòng)物的生長非常關(guān)鍵。Balaji等[33]指出，體弱豬只免疫力低，血液中皮質(zhì)醇濃度高。本試驗(yàn)在日糧中添加RES和SAG不影響犢牛血清皮質(zhì)醇濃度。這也說明犢牛在該階段的生長過程中沒有遭受應(yīng)激。GH是由腦垂體分泌的合成代謝關(guān)鍵激素，控制動(dòng)物生長及營養(yǎng)物質(zhì)代謝，促進(jìn)機(jī)體核酸、蛋白質(zhì)合成和脂肪分解[34]。IGF-I在反芻動(dòng)物的體液內(nèi)廣泛存在，促進(jìn)機(jī)體、器官、組織的生長發(fā)育，GH的合成代謝作用是通過在肝和骨骼肌中誘導(dǎo)IGF-I來實(shí)現(xiàn)的[35]。RES顯著提高60日齡犢牛血清GH和IGF-I濃度，這可能是促進(jìn)犢牛生長的原因，以至于在180日齡時(shí)RES組犢牛體重顯著高于MR組。Zhang等[36]指出，添加桑葉黃酮能顯著提高80日齡犢牛血清GH和IGF-I濃度。添加RES顯著提高EGF濃度，這可能是因?yàn)榘邹继J醇是有效的植物雌激素[16]，通過上調(diào)EGF及其受體，激活磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)胃腸道上皮細(xì)胞的增殖與分化，修復(fù)受損的黏膜，具有提高營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的作用[37]。

在動(dòng)物機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)和防御感染中起重要作用的免疫球蛋白主要包括IgM、IgG和IgA。IgG是血清中主要的抗體部分，也是血清中主要的免疫球蛋白，在體液免疫中發(fā)揮重要作用；IgM是動(dòng)物機(jī)體初次免疫應(yīng)答早期階段所產(chǎn)生的主要免疫球蛋白；IgA由動(dòng)物腸系膜淋巴組織中的漿細(xì)胞產(chǎn)生，是機(jī)體防止病原微生物入侵的第一道防線[38]。本試驗(yàn)中，添加SAG對(duì)IgG濃度沒有影響，但是顯著降低IgM和IgA濃度。這與前人在仔豬[39]上添加主要成分為SAG的博落回提取物的結(jié)論不一致，他們都得出添加后顯著提高IgG濃度的結(jié)論。但李會(huì)智等[40]在斷奶仔豬上添加主要成分為SAG的博落回提取物顯著降低IgG和IgA濃度，他認(rèn)為是由于博落回提取物的添加產(chǎn)生了免疫抑制，也有可能是添加量不同，產(chǎn)生的結(jié)論也不一致。本研究結(jié)果表明，RES和SAG對(duì)犢牛免疫系統(tǒng)激活影響不大。

細(xì)胞因子是一種由造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)激活，細(xì)胞產(chǎn)生的具有高活性的功能性肽、蛋白質(zhì)或糖蛋白類物質(zhì)[41]。細(xì)胞因子如IL-1β和TNF-α介導(dǎo)并在炎癥反應(yīng)中起作用[42]，并與營養(yǎng)物質(zhì)吸收和利用改變有關(guān)[35]。Broussard等[43]報(bào)道，促炎性細(xì)胞因子誘導(dǎo)肝GH受體的抗性，導(dǎo)致具有促進(jìn)人成肌細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成作用的血漿IGF-I顯著降低。本試驗(yàn)中，SAG在60日齡顯著降低血清的TNF-α濃度，但是不影響IL-1β和γ-IFN血清濃度，說明RES和SAG沒有引起犢牛炎癥的發(fā)生。

谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)是反映心功能的重要指標(biāo)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性則是反映肝完整性以及功能的重要指標(biāo)。當(dāng)肝組織受到破壞時(shí)大量的轉(zhuǎn)氨酶逸入血清，于是血清中的轉(zhuǎn)氨酶活性增高。SAG和RES不影響這兩種酶的活性，這說明在本試驗(yàn)條件下添加RES和SAG不影響犢牛的心和肝機(jī)能。給大鼠口服RES不影響這兩種酶的活性[44]。此外在黃羽肉雞日糧中添加主要成分為SAG的博落回提取物，也不影響這兩種酶的活性[45]，這表明RES和SAG不會(huì)給機(jī)體代謝帶來不良影響，也不會(huì)損傷肝細(xì)胞。

動(dòng)物在正常生理過程中產(chǎn)生自由基，但過量自由基會(huì)破壞糖、蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子和膜的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致功能和代謝紊亂。T-AOC是衡量抗氧化物質(zhì)總抗氧化能力的指標(biāo)，MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，可用作生物氧化應(yīng)激的一般生物標(biāo)志物[46]。GSH-PX被認(rèn)為是防止氧化損傷的第一道細(xì)胞防御；作為生物體的主要抗氧化酶，CAT和SOD具有較強(qiáng)的自由基清除能力。自由基的形成和消除處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)[47]。從本試驗(yàn)結(jié)果可以看出，60日齡時(shí)，SAG組血清MDA濃度顯著高于其余兩組，這與Bavarsadi等[6]在蛋雞日糧中添加SAG降低血清中的MDA濃度的結(jié)論不一致。這可能是由于動(dòng)物品種和添加量不一致造成的，因?yàn)锽avarsadi等[6]在蛋雞上添加的SAG低于一倍的量時(shí)對(duì)血清MDA濃度沒有影響。前人認(rèn)為，血根堿的抗炎和抗氧化活性與抑制直接清除活性氧引起的多形核中性粒細(xì)胞的氧化裂解和炎性因子的產(chǎn)生有關(guān)[48]或者與抑制細(xì)胞受體、G蛋白、磷脂酶C、胞漿Ca2+水平和蛋白激酶C的活性氧形成的信號(hào)通路有關(guān)[49]。SAG處理組犢牛血清CAT濃度顯著低于RES處理組，與MR處理組相比，添加RES后也沒有顯著影響犢牛的血清抗氧化指標(biāo)，這也與以前的研究結(jié)果不一致[4, 14-15, 50]，可能是由于動(dòng)物品種和添加量不一致造成的。

4 結(jié) 論

RES和SAG均可提高犢牛出生到180日齡的體重；SAG對(duì)犢牛體高和十字部高增加作用顯著；RES和SAG對(duì)60日齡犢牛血清FFA、INS、GH、EGF和IGF-1濃度產(chǎn)生顯著的影響；對(duì)免疫指標(biāo)影響不顯著。結(jié)果表明RES和SAG可以作為生長促進(jìn)劑用于動(dòng)物生產(chǎn)。