連曉春,蔣烈戈
(1.新疆兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站,新疆 烏魯木齊 830000;2.新疆兵團(tuán)第九師畜牧科學(xué)研究所,新疆 額敏 834601)
超純水是應(yīng)用預(yù)處理、電滲析、紫外線殺菌、反滲透、離子交換、超濾和各種膜過(guò)濾等技術(shù),將水中的導(dǎo)電介質(zhì)幾乎完全去除,同時(shí)將水中不離解的膠體物質(zhì)、氣體及有機(jī)物均去除至很低程度的水。超純水的電阻率大于18 MΩ.cm,這種水中除了水分子(H2O)外,幾乎沒(méi)有什么雜質(zhì)。隨著超純水生產(chǎn)技術(shù)的提高,它被應(yīng)用到電子、實(shí)驗(yàn)室、食品、等領(lǐng)域。蒸餾水是指用蒸餾方法制備的純水,可分一次和多次蒸餾水,通過(guò)蒸餾,一次蒸餾可將不揮發(fā)的礦物質(zhì)鹽類(lèi)除去。我們?cè)谂渲凭d羊人工授精稀釋液時(shí)運(yùn)用一次蒸餾水,利用的就是蒸餾水無(wú)電解質(zhì),無(wú)游離離子。目前的蒸餾水機(jī)多為在環(huán)型冷卻管結(jié)構(gòu),靠水流量冷卻,大都存在結(jié)構(gòu)落后、浪費(fèi)水資源、能耗高(4~20 KW)、生產(chǎn)效率低(5~20 L/H)、手動(dòng),需專(zhuān)人看管,易干燒,易結(jié)垢,難清洗,運(yùn)行成本高,易中斷使用等缺陷,而超純水機(jī)隨用隨取,造水及時(shí),生產(chǎn)時(shí)一鍵式操作,全自動(dòng)制水,安全、可靠,無(wú)需專(zhuān)人值守,出水率高(1~100 L/H),超純水機(jī)的功率在50~200 W,能耗大大降低,超純水機(jī)還具有自動(dòng)清洗功能,便于維護(hù),運(yùn)行成本低。針對(duì)當(dāng)今社會(huì)提倡環(huán)保、節(jié)能、減排的基礎(chǔ)上,提倡使用超純水替代蒸餾水。
傳統(tǒng)綿羊精液葡卵檸稀釋液用蒸餾水制作,基層綿羊配種站在配制葡卵檸稀釋液時(shí),蒸餾水多在上級(jí)單位購(gòu)買(mǎi),而目前縣級(jí)以上家畜品種改良站多已配備了超純水機(jī),蒸餾水的使用量越來(lái)越少,蒸餾水機(jī)已逐步淘汰。通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn),在家禽中的雞[1]、家畜中的豬[2]、牛[3]等畜禽均使用傳統(tǒng)的稀釋液,劉威、孫計(jì)富在羊的人工授精技術(shù)研究進(jìn)展中提出,要繼續(xù)積極推廣改進(jìn)人工授精操作技術(shù)[4],應(yīng)開(kāi)展稀釋液改良方面的研究。也有人使用注射用水[5],基本沒(méi)有大的差異。因此本次實(shí)驗(yàn)旨在探討應(yīng)用超純水替代蒸餾水制作綿羊精液葡卵檸稀釋液,以簡(jiǎn)化稀釋液配制程序,加快綿羊品種改良推廣工作進(jìn)程。
本次實(shí)驗(yàn)于2016年11月10日-12月5日在新疆兵團(tuán)第九師161團(tuán)育種站進(jìn)行,試驗(yàn)?zāi)秆驗(yàn)轶w重45~50 kg的成年經(jīng)產(chǎn)母羊,2017年4月1日-5月10日統(tǒng)計(jì)產(chǎn)羔結(jié)果。
1.2.1 超純水
采用美國(guó)熱電公司BARNSTEAD TⅡ型超純水機(jī)制作,它通過(guò)反滲透單元將自來(lái)水轉(zhuǎn)化為RO純水的水質(zhì),接近于國(guó)標(biāo)實(shí)驗(yàn)室三級(jí)用水標(biāo)準(zhǔn)與一次蒸餾水,故沖洗器皿等一般實(shí)驗(yàn)室分析用水均可使用。
1.2.2 蒸餾水
采用蘇州江東精密儀器YAZD-5型蒸餾水機(jī)制作,功率4.5 KW,每小時(shí)出水量5 L。
1.2.3 稀釋液的配制
用分析天平(精度0.001 g)稱取葡萄糖3.0 g,檸檬梭鈉1.4 g,用量桶量取蒸餾水或超純水100 mL,卵黃20 mL,按葡萄糖-卵黃-檸檬梭鈉稀釋液配制要求,進(jìn)行配制。
1.3.1 精液采集
采用161團(tuán)育種站飼養(yǎng)的德國(guó)美利奴、薩??朔N公羊進(jìn)行采精,種公羊要求:體質(zhì)外貌達(dá)到品種要求,達(dá)到中等以上種用體況,并有旺盛的性欲,精液品質(zhì)優(yōu)良。將采取的精液在300-600倍的顯微鏡下進(jìn)行鏡檢,外觀正常、密度中等以上、活力在0.8以上的精液方可進(jìn)行稀釋處理。
綜上所述,建筑工程管理專(zhuān)業(yè)教育是向社會(huì)輸送高素質(zhì)建筑管理人才的重要渠道,近些年來(lái),建筑行業(yè)的迅猛發(fā)展帶動(dòng)了我國(guó)建筑工程管理專(zhuān)業(yè)的發(fā)展,同時(shí)也使得其中存在的一些問(wèn)題逐漸突顯出來(lái)。對(duì)此,我國(guó)各高校應(yīng)該積極吸收國(guó)外辦學(xué)經(jīng)驗(yàn),結(jié)合自身優(yōu)勢(shì)做好專(zhuān)業(yè)建設(shè),為我國(guó)建筑行業(yè)發(fā)展提供更強(qiáng)的推動(dòng)力。
1.3.2 精液稀釋
將收集的精液一分為二,按精液稀釋要求,分別用蒸餾水與超純水制作的稀釋液進(jìn)行2倍稀釋。
1.3.3 密度檢查
稀釋后用紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法對(duì)精液進(jìn)行密度檢查,計(jì)算單位輸精量(0.1 mL)內(nèi)的有效精子數(shù),鏡檢合格的稀釋精液每份留下0.5 mL左右,其余的送去輸精,間隔2 h、4 h,再次對(duì)置于常溫環(huán)境(25℃左右)下稀釋精液進(jìn)行密度檢查。
1.3.4 輸精
按綿羊人工授精程序,對(duì)輸精用具消毒后,進(jìn)行輸精,輸精部位:子宮頸內(nèi)0.5~1.0 cm處,輸精量0.1 mL,輸完精后對(duì)精液進(jìn)行回檢;間隔8~10 h進(jìn)行第二次輸精。
輸精時(shí),對(duì)母羊進(jìn)行標(biāo)記,記錄。
1.4.1 精子密度
用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行。先用紅細(xì)胞稀釋管吸取稀釋精液到0.5刻度處,用紗布擦去吸管頭沾附的精液,再吸取3%的氯化鈉溶液到刻度101處,用拇指和中指按住吸管的兩端,搖勻,使氯化鈉溶液與稀釋精液充分混勻,這樣將稀釋精液再次稀釋到200倍,吹掉管內(nèi)最初的幾滴液體,然后將吸管尖放在計(jì)算板中部的邊緣處,輕輕滴入一小滴,讓其自然流入計(jì)算室內(nèi),這時(shí)在600倍顯微鏡下計(jì)算精子,計(jì)數(shù)5大方格精子總數(shù)乘以1千萬(wàn)即為稀釋后1 mL稀釋精液的精子數(shù)[6]。每個(gè)樣本,至少要重復(fù)檢查兩次,取其平均值,若兩次結(jié)果偏差在10%以上,則需做第三次,取第三次結(jié)果與前兩次中與第三次結(jié)果相近的一次的平均值,作為最后結(jié)果。
1.4.2 返情率
發(fā)情配種后,間隔17~18 d,統(tǒng)計(jì)已配羊只的返情情況,計(jì)算試驗(yàn)組與對(duì)照組的返情率[7]。返情率%=已配母羊返情羊只數(shù)/參配母羊數(shù)×100%。
1.4.3 受胎率
間隔145~155 d,統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)組與對(duì)照組綿羊產(chǎn)羔情況,計(jì)算受胎率[8]。其中產(chǎn)羔母羊數(shù)包括流產(chǎn)母羊數(shù)。
以稀釋后0、2、4 h的精液密度、第一情期受胎率、受胎率參數(shù)為檢驗(yàn)對(duì)象,進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。
稀釋工作完成后,分稀釋后、2 h、4 h用血細(xì)胞計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)精液中的精子數(shù),精液稀釋2 h內(nèi)后,通過(guò)顯著性檢驗(yàn)(P<0.05),試驗(yàn)處理對(duì)結(jié)果沒(méi)有影響或無(wú)效,蒸餾水組與超純水組之間沒(méi)有較為明顯的差異,均能達(dá)到綿羊人工授精精子數(shù)要求。由于配種工作在新疆兵團(tuán)第九師161團(tuán)冬牧場(chǎng)進(jìn)行,在11月份,這里外界氣溫已達(dá)零下15℃左右,因此室內(nèi)溫度也極難控制,稀釋后4 h,此時(shí)精子數(shù)量也明顯降低,這與精液品質(zhì)、稀釋液無(wú)關(guān),此時(shí)兩種稀釋液稀釋出的精子數(shù)也沒(méi)有大的差異,見(jiàn)表1。
表1 精子密度億
與配母羊標(biāo)記后,同群放牧,間隔18 d后,統(tǒng)計(jì)返情羊數(shù),再次進(jìn)行人工授精,蒸餾水組與超純水組返情羊數(shù)分別只數(shù)為48只、46只,占總試驗(yàn)羊數(shù)的16.8%、17.2%,二者沒(méi)有明顯的差異,見(jiàn)表2。
表2 返情率統(tǒng)計(jì)只、%
2015年4月1日至5月15日,登記標(biāo)記母羊產(chǎn)羔情況,蒸餾水組產(chǎn)羔母羊數(shù)265只,超純水組產(chǎn)羔母羊數(shù)249只(二者均包括流產(chǎn)母羊),母羊總受胎率達(dá)到了93%、93.3%,二者之間沒(méi)有大的差異,見(jiàn)表3。
表3 受胎率統(tǒng)計(jì)表只、%
稀釋前后的精液密度用紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)算,最小相差0.02億,為總數(shù)的0.28%,最大相差0.23億,在稀釋后、稀釋后2 h、稀釋后4 h,這幾個(gè)階段來(lái)看,無(wú)較大的偏差。
綿羊的鮮精人工授精技術(shù)由多個(gè)因素影響[9,10],在基層,最容易觀測(cè)、使用的方法是對(duì)綿羊返情率和受胎率的記錄[11],這種方法操作簡(jiǎn)單。使用超純水代替蒸餾水配置綿羊人工授精稀釋液,通過(guò)我們記錄的552只母羊的對(duì)比,超純水組返情率17.2%,傳統(tǒng)蒸餾水組16.8%,二者相差0.04%,超純水組母羊總受胎率達(dá)到了93.3%、傳統(tǒng)蒸餾水組93%,這兩個(gè)指標(biāo)之間均沒(méi)有大的差異,對(duì)綿羊總體受胎率沒(méi)有影響。
影響綿羊人工授精稀釋液品質(zhì)的因素很多,使用蒸餾水,主要因素是考慮稀釋液與精液為等滲溶液,低滲溶液或高滲溶液都會(huì)因滲透壓的緣故造成精子死亡,超純水與蒸餾水相比,均為無(wú)電解質(zhì),無(wú)游離離子,故均能達(dá)到稀釋液配制要求。使用超純水相比蒸餾水而言,具有隨用隨取,造水及時(shí),生產(chǎn)時(shí)一鍵式操作,全自動(dòng)制水,安全、可靠,無(wú)需專(zhuān)人值守,出水率高(10~100 L/H),能耗低,可自動(dòng)清洗,便于維護(hù),運(yùn)行成本低的特點(diǎn),因此使用超純水制作綿羊人工授精精液稀釋液,可簡(jiǎn)化稀釋液配制程序,加快綿羊品種改良推廣工作進(jìn)程,值得推廣。