高小坤

(1.福建省林業(yè)科技試驗中心，福建 南靖 363600； 2.福建省鑫閩種業(yè)有限公司，福建 福清 350301)

粗肋草(Aglaonemacommutatun)為天南星科(Araceae)粗肋草屬(Aglaonema)多年生草本植物，原產亞洲東南部的泰國、越南、菲律賓、馬來西亞和我國南部的多雨林地區(qū)。其葉片具有多樣色彩或色斑鑲嵌，美觀大方而又樸素高雅，有較高的觀賞價值；且耐蔭耐濕、病蟲害少，常被作為室內觀賞和切葉植物應用[1-3]。紅吉利(Aglaonemacommutatun′Big Apple′)是目前盆栽花卉市場上最受歡迎的粗肋草品種之一，2017年由泰國引進，與其它粗肋草品種相比，紅吉利莖干粗壯，節(jié)間明顯，葉片寬大且具有大面積顏色濃厚絢麗的紅色斑塊，開發(fā)潛力與市場前景廣闊。粗肋草常規(guī)繁殖方法是分株繁殖和扦插繁殖[3]，但常規(guī)繁殖方法存在母株利用率低、繁殖系數低、受環(huán)境條件限制多、費工費時、成本高等缺點，缺乏市場競爭力。目前粗肋草種苗生產主要通過組織培養(yǎng)技術進行擴繁，現已取得成功的粗肋草品種較少，主要為綠色系，而且不同品種組培技術差異較大，對于紅吉利這一新優(yōu)彩葉品種尚未見報[4-7]。本試驗以紅吉利的莖段為外植體開展組培快繁技術研究，旨在探索紅吉利的高效繁育方法，為其工廠化育苗提供技術支撐，也可為其它彩葉粗肋草高效繁育技術提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為紅吉利優(yōu)良單株上選取的帶腋芽莖段。取自福建省鑫閩種業(yè)有限公司的粗肋草種質資源收集圃 。

1.2 方法

1.2.1 外植體預處理及消毒 選取健壯、無病蟲害植株，從莖基部整株截斷，剝除葉片，清洗莖段污垢。先在飽和洗衣粉溶液中輕輕震蕩20 min，用毛筆刷輕輕刷洗去除表面塵埃，再用自來水沖洗1 h后備用。將清洗干凈的莖段吸干水分后放入經高壓滅菌過的玻璃瓶中，移至超凈工作臺。用75%酒精浸泡60 s后，再用無菌水沖洗3遍，分別置于裝有0.1%HgCl2的玻璃瓶中，不斷搖晃玻璃瓶消毒15、20、25 min，然后用無菌水清洗5～6遍后，將莖段切成帶有1個腋芽的小段(外植體)接入培養(yǎng)基中，每個處理接種60瓶，每瓶1個外植體。

每7 d觀察統(tǒng)計1次，28 d后統(tǒng)計污染率、死亡率、合格率以及生長情況，比較不同消毒時間對外植體的影響，確定最佳消毒時間。其中：污染率(%)=(污染數/接種數)×100%，死亡率(%)=(死亡數/接種數)×100%，合格率(%)=(1-污染率-死亡率)×100%。

1.2.2 腋芽萌發(fā)誘導 根據劉俊仙等[6]的研究結果，粗肋草的誘導采用水平放置接種方式效果最好。將消毒處理過的合格小莖段腋芽朝上分別水平接入誘導培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基分別為MS 、B5、WPM添加6-BA 2.0 mg·L-1和NAA 0.2 mg·L-1，每個處理接種60瓶，每瓶1個外植體。

40 d后觀察和統(tǒng)計外植體腋芽的萌芽率和外植體的形態(tài)變化，篩選出最佳誘導培養(yǎng)基。其中：萌發(fā)率(%)=(萌芽外植體數/外植體接種數)×100%。

1.2.3 芽叢繼代增殖 采用正交試驗L9(34)設計方法研究不同植物生長調節(jié)劑及蔗糖組合對紅吉利芽增殖的影響，以MS+卡拉膠6.8 g·L-1為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA、NAA和蔗糖。將莖段誘導出來的芽叢分成單芽轉接到繼代增殖培養(yǎng)基中，每個處理接種20瓶，每瓶接種1個小芽。

40 d后觀察叢芽的增殖情況和生長狀況，相同培養(yǎng)基連續(xù)轉接3代，繼代周期40 d。

1.2.4 生根壯苗培養(yǎng) 采用正交試驗L9(34)設計研究不同培養(yǎng)基對紅吉利誘導生根的影響，以MS、1/2 MS、1/3 MS為基本培養(yǎng)基，分別添加不同濃度的IBA和蔗糖。切出增殖過程中生長健壯、葉片舒展、苗高2.0 cm以上的單株，分別接入培養(yǎng)基中，每個處理20瓶，每瓶5株，3次重復。

培養(yǎng)30 d后調查生根率、生根數以及生長狀況，確定紅吉利最佳生根培養(yǎng)基。

1.2.5 培養(yǎng)條件 培養(yǎng)溫度為25～27 ℃、光照時間12 h·d-1、光照強度1500～2000 lx。

2 結果與分析

2.1 消毒時間對外植體的影響

由表1可知，HgCl2為消毒劑，在一定范圍內，隨著消毒時間延長，污染率降低，但死亡率明顯升高。HgCl2消毒15 min時，外植體的污染率較高，達到58%。死亡率較低，合格率只有38.3%。當消毒時間為20 min時，污染率明顯下降，但死亡率增加，合格率達到63.3%；當消毒時間為25 min時，污染率進一步降低，但死亡率明顯升高，達到28.3%，合格率為48.3%。因此，從外植體合格率來看，用75%酒精消毒60 s后再用0.1% HgCl2消毒20 min，對于紅吉利外植體消毒效果最好。

表1 HgCl2消毒時間對外植體的影響

2.2 基本培養(yǎng)基對腋芽誘導的影響

將消毒后的紅吉利莖段接入到3種基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10 d后，3種基本培養(yǎng)基中紅吉利莖段上的腋芽開始萌動，20 d后莖段開始膨大，漸漸的形成愈傷組織，隨著腋芽的萌發(fā)，其周邊愈傷組織出現綠色芽點，慢慢長出小芽，說明紅吉利在3種基本培養(yǎng)基中都能萌發(fā)出健壯的腋芽，但是腋芽基部形成的愈傷組織形態(tài)特征以及腋芽萌發(fā)情況存在差異(表2)。在MS培養(yǎng)基中，腋芽萌發(fā)率最高，達到96.7%，腋芽基部形成愈傷是綠色的、致密的，萌發(fā)出的小芽最多，平均達到3.8個；B5培養(yǎng)基次之，腋芽萌發(fā)率為93.3%，愈傷組織呈綠色、黃綠色，平均萌芽2.3個；WPM培養(yǎng)基效果最差，形成的愈傷組織呈黃綠色，較為疏松，萌發(fā)的小芽最少。這說明MS比B5、WPM更適合作為紅吉利腋芽萌發(fā)的誘導培養(yǎng)基。

2.3 不同植物生長調節(jié)劑及蔗糖組合對芽增殖的影響

正交試驗結果(表3)表明，6-BA濃度、NAA濃度、蔗糖濃度3個因素的R值分別為1.49、0.66、0.17，即這3個因素對紅吉利芽增值影響程度依次為6-BA濃度>NAA濃度>蔗糖濃度，說明以MS作為紅吉利繼代增殖基本培養(yǎng)基，6-BA濃度對紅吉利芽增殖起主要作用，其次是NAA濃度，蔗糖濃度對紅吉利芽增值的影響最小。

表2 基本培養(yǎng)基對腋芽萌發(fā)的影響

通過方差分及多重比較(表3)可知，6-BA濃度(F=36.14>F0.05(2，2)=19)對于紅吉利芽增值的影響差異顯著，而NAA濃度(F=7.1

表3 紅吉利叢芽誘導正交試驗

*：ki為水平i的平均值；R為極差；F為方差值；F0.05(2，2)=19，F0.01(2，2)=99；同列數值后小寫字母為差異達0.05顯著水平；下同。

2.4 不同培養(yǎng)基對生根的影響

由表4可知，生根培養(yǎng)基中，IBA濃度、蔗糖濃度以及基本培養(yǎng)基配比這3個因素中對紅吉利生根影響程度依次為：IBA>基本培養(yǎng)基>蔗糖，其中IBA對紅吉利生根影響達極顯著水平(F=784>F0.01(2，2)=99)，蔗糖和基本培養(yǎng)基對紅吉利生根影響不顯著(F=1

表4 紅吉利生根誘導正交試驗

3 結論與討論

本研究以紅吉利帶腋芽的莖段為外植體，對其組織培養(yǎng)技術進行初步探索。試驗結果表明，采用75%酒精消毒60 s后，再用0.1% HgCl2消毒20 min，外植體合格率最高；紅吉利腋芽萌發(fā)的最佳誘導培養(yǎng)基為MS，腋芽萌發(fā)率達到96.7%，萌發(fā)出的小芽生長健壯且數量最多，平均達到3.8個；紅吉利繼代增殖最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1，生根誘導最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 0.2 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1。

外植體消毒是植物離體組織培養(yǎng)所要進行的第一步，是愈傷組織誘導和叢生芽誘導的基礎。本研究外植體消毒合格率最高僅為63.3%?，F有的研究表明，不同種類的滅菌劑組合，對粗肋草外植體的滅菌效果與單一滅菌劑不同[8]。這意味著粗肋草外植體消毒處理方法還有很大的改進和提升空間，可采用多種滅菌劑進行組合配比，然后對消毒效果進行比較，進而篩選出更優(yōu)的消毒方法。培養(yǎng)基種類和生長調節(jié)劑種類與濃度、蔗糖濃度均影響著粗肋草的誘導增殖與生根，也會對粗肋草組織培養(yǎng)過程中的褐化產生影響。生產時，常常通過添加抗壞血酸、L-半胱氨酸等抑制褐化現象的發(fā)生，而抗褐化劑的添加，一定程度上又會影響到粗肋草繼代增殖效果。本試驗所得到的最佳培養(yǎng)基配方是基于誘導、繼代增殖或生根某一特定環(huán)節(jié)的，因此，從試驗得出的最佳培養(yǎng)基配方，應用到生產實踐，還需進一步探索粗肋草組培育苗過程中的各種因素的平衡點，使粗肋草在實現誘導率最高的同時，能順利進入繼代增殖環(huán)節(jié)獲得最高的增殖系數，進入生根培養(yǎng)環(huán)節(jié)能獲得生根較好、個體壯實的組培苗，同時還能兼顧生產成本，實現粗肋草組培育苗生產效益最大化。