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        基于指紋圖譜結(jié)合多指標(biāo)成分定量用于麻黃湯的質(zhì)量評價

        2018-09-10 02:11:03黃英蘭楊芳
        世界中醫(yī)藥 2018年5期
        關(guān)鍵詞:麻黃湯指紋圖譜質(zhì)量評價

        黃英蘭 楊芳

        摘要目的:分析和評價指紋圖譜和多指標(biāo)成分定量結(jié)合用于麻黃湯主要成分的定量和質(zhì)量。方法:采用線性范圍試驗(yàn)和加樣回收率實(shí)驗(yàn)考察高效液相色譜法(HPLC)指紋圖譜分析方法的嚴(yán)謹(jǐn)性,由2個廠家各提供6個不同批次麻黃湯藥材,共12批次,以鹽酸麻黃堿對照品、桂皮醛對照品、苦杏仁苷對照品、甘草酸對照品,多指標(biāo)成分定量HPLC測定,分別計(jì)算各批次麻黃湯中這4種成分的含量;同時進(jìn)行指紋圖譜HPLC分析評價麻黃湯的質(zhì)量。結(jié)果:麻黃湯中的有效成分鹽酸麻黃堿、桂皮醛、苦杏仁苷、甘草酸在各自濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好,且這4種成分的平均回收率分別是1000%、1001%、9939%、9904%,RSD分別是17%、13%、11%、099%。D廠中的麻黃湯藥材樣品質(zhì)量波動較大,相似度較低,而B廠中麻黃湯藥材質(zhì)量波動較小,相似度較高,一致性較好。結(jié)論:麻黃湯的主要成分是鹽酸麻黃堿、桂皮醛、苦杏仁苷和甘草酸,B廠麻黃湯的藥材質(zhì)量優(yōu)于D廠。

        關(guān)鍵詞指紋圖譜;成分;定量;麻黃湯;質(zhì)量評價

        Quantitative Evaluation of Mahuang Decoction Based on Fingerprint and Multi Index Components

        Huang Yinglan1, Yang Fang2

        (Department of Pharmacy, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China)

        AbstractObjective:To analyze the quantitative and qualitative evaluation of the main components of Mahuang Decoction by quantitative analysis of fingerprint and multi index components. Methods:The linear range test and recovery test were used on high performance liquid chromatography (HPLC) analysis method for the rigor of the fingerprint. Two manufacturers provided 6 different batches of Mahuang Decoction, with a total of 12 batches, and with ephedrine hydrochloride, cinnamaldehyde, bitter apricot kernel, licorice glycoside reference acid as control products. Quantitative determination of HPLC content in the 4 components of each batch in Mahuang Decoction was calculated; at the same time, fingerprint HPLC was used to evaluate the quality of Mahuang Decoction. Results:1) In Mahuang Decoction, the effective ingredients including ephedrine, cinnamaldehyde, amygdalin and glycyrrhizic acid had good linear relationship within the scope of concentration was good, and the average recovery rate of 4 components were 100%, 1001%, 9939%, 9904%, with RSD of 17%, 13%, 11%, 099%. 2) The quality fluctuation of Mahuang Decoction samples from D manufactures was larger and the similarity was lower, while the quality fluctuation was lower, with high similarity and good consistency in B manufacture. Conclusion:The main components of Mahuang Decoction are ephedrine hydrochloride, cinnamic aldehyde, amygdalin and glycyrrhizic acid. The quality of Mahuang Decoction of B manufacture was better than that of D manufacture.

        Key WordsFingerprint; Quantitative analysis; Mahuang Decoction; Quality evaluation

        中圖分類號:R284文獻(xiàn)標(biāo)識碼:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.052

        麻黃湯出自醫(yī)圣張仲景《傷寒論》,由麻黃、桂枝、杏仁、甘草4味藥組合而成,主治外感風(fēng)寒表實(shí)證,癥見惡寒發(fā)熱,頭痛身疼,無汗而喘?,F(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究顯示,麻黃湯具有抗流行性感冒、急性支氣管炎、支氣管哮喘的功效,具有明顯消炎抗菌作用[16]。國內(nèi)外諸多醫(yī)家經(jīng)過長期臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn),療效確切。該藥方化學(xué)成分較為復(fù)雜,指紋圖譜技術(shù)可從整體上綜合分析湯方的化學(xué)物質(zhì)內(nèi)涵,是目前國際公認(rèn)的控制中藥質(zhì)量的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)模式[710],我們利用高效液相色譜法(HPLC)技術(shù)全面分析麻黃湯的化學(xué)物質(zhì)信息,以期為中藥湯劑使用提供客觀依據(jù),現(xiàn)報道如下。

        1儀器與試藥

        11儀器Agilent 1100型高效液相色譜儀;精密電子秤(蘇州奇樂電子科技有限公司,型號:FA2004C)。

        12試劑購于中國食品藥品生物制品鑒定院的桂皮醛對照品(批號:111595200604)、苦杏仁苷對照品(批號:110777200406)、甘草酸對照品(批號:11075220012)、鹽酸麻黃堿對照品(批號:1107382000501)。

        13分析樣品麻黃湯采用《傷寒論》中配伍比例3∶2∶2∶1,麻黃藥用部位為麻黃科植物草麻黃的干燥草質(zhì)莖,桂枝藥用部分為樟科植物肉桂的干燥嫩枝,杏仁藥用部分為薔薇科植物山杏的干燥成熟種子,甘草藥用部分為豆科植物甘草的干燥根和根莖。

        2方法與結(jié)果

        21色譜條件精密量取20 μL的樣品進(jìn)樣量或?qū)φ掌啡芤海捎?50 mm×46 mm,4 μm的色譜柱(Agilent ZORBAX XDBC18柱),在乙腈和01%磷酸的流動相中,流速為1 mL/min,柱溫為25 ℃,根據(jù)高效液相色譜(HPLC)(Agilent 1100型高效液相色譜儀)多指標(biāo)成分定量測定色譜條件和指紋圖譜的梯度洗脫程序進(jìn)行試驗(yàn)。見表1、表2。

        23供試品溶液制備麻黃藥用部位為麻黃科植物草麻黃的干燥草質(zhì)莖,桂枝藥用部分為樟科植物肉桂的干燥嫩枝,杏仁藥用部分為薔薇科植物山杏的干燥成熟種子,甘草藥用部分為豆科植物甘草的干燥根和根莖,麻黃湯采用《傷寒論》中配伍比例3∶2∶2∶1,采用回流法煎煮,于敞口藥盆中稱取9 g麻黃,加400 mL水,浸泡30 min,煮沸后文火45 min,去沫減200 mL再加入6 g桂枝和杏仁、3 g甘草取煮沸文火20 min,取100 mL藥液,在60 ℃下減壓濃縮,定容至50 mL,折合麻黃湯濃度未04 g/ mL。取5 mL柴胡黃芩濃縮液用100%甲醇定容10 mL,混合均勻,取2 mL離心取上清液在045 μm超微膜濾過即可。

        24專屬性試驗(yàn)取同一供試品溶液根據(jù)23制備的供試品溶液,采用薄層層析的方法對麻黃湯進(jìn)行專屬性試驗(yàn),結(jié)果顯示專屬性良好。

        25線性關(guān)系考察根據(jù)11制備的對照品溶液,精密取01 μL、05 μL、1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、20 μL,分別編號17并連續(xù)進(jìn)樣,以峰面積為Y軸,5 μL進(jìn)樣濃度為X軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并根據(jù)對照品的回歸方程計(jì)算各有效成分在各自濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系。

        26中間精密度試驗(yàn)精密吸取10 μL同一供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,結(jié)果顯示相對標(biāo)注偏差RSD是092%,精度度良好。

        27供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取10 μL同一供試品溶液,配置后分別放置0、2、4、8、16、24、48 h后進(jìn)樣檢測,結(jié)果顯示48 h內(nèi)供試品溶液基本穩(wěn)定,RSD是095%。

        28重復(fù)性試驗(yàn)精密吸取10 μL同一供試品溶液,在相同色譜條件,相同液相分析儀上檢測5次,結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為089%,重復(fù)性良好。

        29加樣回收率試驗(yàn)取6份同一供試品溶液根據(jù)11制備的供試品溶液,編號AF并分別加入鹽酸麻黃堿對照品、桂皮醛對照品、苦杏仁苷對照品、甘草酸對照品,計(jì)算各有效成分在HPLC中的加樣回收率。

        麻黃湯中的有效成分鹽酸麻黃堿、桂皮醛、苦杏仁苷、甘草酸在各自濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好,且這4中成分的平均回收率分別是1000%、1001%、9939%、9904%,RSD分別是17%、13%、11%、099%。見表3、表4。

        210樣品測定結(jié)果

        2101多指標(biāo)成分定量東莞仁濟(jì)大藥房(簡稱D廠)提供6個不同批次麻黃湯藥材,根據(jù)11制備供試品溶液,分別編號S1、S2……S6中國北京同仁堂(集團(tuán))有限責(zé)任公司(簡稱B廠)提供6個不同批次麻黃湯藥材,根據(jù)11制備供試品溶液,分別編號S7、S8……S12,根據(jù)12中表1的色譜條件,以鹽酸麻黃堿對照品、桂皮醛對照品、苦杏仁苷對照品、甘草酸對照品,分別計(jì)算各批次麻黃湯中這4種成分的含量。

        12批麻黃湯HPLC多指標(biāo)成分定量分析各批次麻黃湯中的主要成分是鹽酸麻黃堿、桂皮醛、苦杏仁苷、甘草酸和其定量分析結(jié)果。見圖1、表5。

        2102指紋圖譜同上12個批次麻黃湯藥材,制備成供試品溶液后精密吸取5 μL,根據(jù)12中表2的色譜條件依次測定并記錄12批麻黃湯的色譜圖。

        根據(jù)《中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A》中相似度的評價方法,選用夾角余弦法,由圖2、3顯示D廠中的麻黃湯藥材樣品質(zhì)量波動較大,相似度較低,而B廠中麻黃湯藥材質(zhì)量波動較小,相似度較高,一致性較好。

        3討論

        本研究利用梯度洗脫方法對麻黃湯中標(biāo)志性指標(biāo)鹽酸麻黃堿、桂皮醛、苦杏仁苷、甘草酸進(jìn)行含量測定,并對12批次的麻黃湯藥材進(jìn)行含量測定。在流動相選擇時本團(tuán)隊(duì)曾經(jīng)嘗試使用流動相相同梯度方法進(jìn)行洗脫,結(jié)果存在部分峰拖尾嚴(yán)重的現(xiàn)象,而曾經(jīng)我們亦嘗試使用乙腈與01%甲酸、乙腈與01%乙酸為流動相用相同梯度進(jìn)行洗脫,結(jié)果發(fā)現(xiàn)基線無法實(shí)現(xiàn)平穩(wěn),我們認(rèn)為產(chǎn)生這一結(jié)果的原因可能與甲酸、乙酸在270 nm出出現(xiàn)吸收現(xiàn)象有關(guān)。最終研究中我們將乙腈及01%磷酸最終設(shè)定為流動相的成分,結(jié)果顯示此流動相設(shè)置下所得的圖譜基線具有明顯平穩(wěn)性,且波峰結(jié)果理想,分離效果理想,保留時間適中。

        圖312批不同批次的麻黃湯指紋圖譜的相似度結(jié)果

        在所選擇的色譜柱條件下我們發(fā)現(xiàn)各成分分離度高,色譜峰尖銳,分離時間亦理想,實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分可靠。該研究采用各地的不同批次進(jìn)行指紋圖譜檢查分析,結(jié)果顯示不同批次的圖譜結(jié)果基本一致,在相似度檢測中各批藥材的相似度尚可,這說明經(jīng)過國家藥物質(zhì)量監(jiān)督部分的努力,現(xiàn)中藥藥材市場上的藥材質(zhì)量較前明顯改善。我們采用最大吸收波長作為不同有效成分的檢測指標(biāo),此類方法不但減少了實(shí)驗(yàn)誤差,且可提高檢測靈敏度。

        本研究我們將2個廠家的12批次藥材的指紋圖譜利用MATLAB軟件進(jìn)行主要成分統(tǒng)計(jì),結(jié)果發(fā)現(xiàn)D廠中的麻黃湯藥材樣品質(zhì)量波動較大,相似度較低,而B廠中麻黃湯藥材質(zhì)量波動較小,相似度較高,一致性較好。說明不同廠家藥材化學(xué)成分存在一定差異,我們認(rèn)為不同廠家所選藥材可能因產(chǎn)地、種屬等差異,此外生產(chǎn)工藝亦存在一定差異,所以導(dǎo)致藥材產(chǎn)品質(zhì)量訊在一定差異。在成分測定中我們看出麻黃堿吸收最大波長在250 nm,桂皮醛吸收最大波長為290 nm,苦杏仁苷及甘草酸分別為270 mm及278 nm,因?yàn)榭嘈尤受占案什菟岢龇宓拈g隔時間較短,來不及變換明顯波長,而在250 nm波長麻黃堿有較強(qiáng)的吸收,在290mm桂皮醛有明顯吸收,這一結(jié)果與國內(nèi)外諸多文獻(xiàn)[1116]數(shù)據(jù)一致。因此,對于檢測組方中不同成分盡量采用其最大吸收波長作為檢測波長,即可提高檢測靈敏度,又可減少誤差。

        HPLC完整體現(xiàn)了麻黃湯的組方特征,同時驗(yàn)證了該藥對產(chǎn)生最大藥物效價,以期指導(dǎo)臨床運(yùn)用。

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        職業(yè)(2016年10期)2016-10-20 21:38:59
        金銀花SSR指紋圖譜的構(gòu)建及遺傳多樣性分析
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