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        龍眼葉不同極性部位對(duì)2型糖尿病小鼠的降血糖作用研究

        2018-09-10 23:54:38梁潔金青青黃團(tuán)心徐暉麥嘉妮信晨曦
        中國藥房 2018年7期
        關(guān)鍵詞:降血糖龍眼血糖值

        梁潔 金青青 黃團(tuán)心 徐暉 麥嘉妮 信晨曦

        中圖分類號(hào) R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408(2018)07-0950-05

        DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.07.21

        摘 要 目的:優(yōu)選龍眼葉對(duì)2型糖尿病小鼠降血糖的活性部位,為龍眼葉的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供參考。方法:龍眼葉經(jīng)95%乙醇滲漉提取得到總提物,在確定總提物的降血糖作用后,將總提物浸膏用水混懸,然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得相應(yīng)部位提取物(分別記為ST、YT、ZT和WT)。采用高糖高脂飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素法復(fù)制2型糖尿病小鼠模型。將成模小鼠隨機(jī)分為模型組(蒸餾水),陽性對(duì)照組(二甲雙胍,0.1 g/kg),ST低、中、高劑量組(22.2、29.6、44 g/kg,以生藥計(jì),下同),YT低、中、高劑量組(10.7、16、32 g/kg),ZT低、中、高劑量組(10.5、15.8、31.6 g /kg)和WT低、中、高劑量組(18.5、24.6、37 g/kg),每組10只;并另選10只正常小鼠作為正常組(蒸餾水)。各組小鼠均每天灌胃給藥1次,連續(xù)給藥28 d。觀察并記錄小鼠的生長情況及體質(zhì)量變化,檢測小鼠空腹血糖值,對(duì)小鼠進(jìn)行葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn),并測定小鼠血清中總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的含量。結(jié)果:與正常組比較,模型組小鼠的體質(zhì)量和血清中HDL-C含量降低,空腹血糖值和給予葡萄糖0.5、1、2 h后小鼠的血糖值以及糖耐量曲線下面積升高,且血清中TC、TG和LDL-C含量升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較,給藥28 d后YT高劑量組小鼠體質(zhì)量升高,YT各劑量組和ZT中、高劑量組小鼠空腹血糖值降低(P<0.05或P<0.01),給予葡萄糖1 h后YT中、高劑量組和ZT高劑量組小鼠血糖值以及給予葡萄糖2 h后YT高劑量組小鼠血糖值均降低,YT各劑量組和ZT高劑量組小鼠糖耐量曲線下面積以及血清中TC含量均降低、血清中HDL-C含量均升高,YT高劑量組和ZT高劑量組小鼠血清中TG、LDL-C含量以及YT中劑量組小鼠血清中TG含量均降低,ZT中劑量組小鼠血清中HDL-C含量升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論:龍眼葉乙酸乙酯部位和正丁醇部位對(duì)2型糖尿病小鼠有較好的降血糖作用。

        關(guān)鍵詞 龍眼葉;2型糖尿病;降血糖;不同極性部位;小鼠

        ABSTRACT OBJECTIVE: To optimize the hypoglycemic active parts from the leaves of Dimocarpus longan for type 2 diabetes mellitus mice, and to provide reference for material basis study of it. METHODS: Total extract was obtained from the leaves of D. longan with 95% ethanol percolation extraction. After confirming hypoglycemic effect of total extract, extract was suspended with water. Relevant extract was obtained by using petroleum ether, ethyl acetate and n-butanol in turn (respectively marked as ST, YT, ZT and WT). The model of type 2 diabetes mellitus mice was established by high glucose and high fat diet combined with STZ. Model mice were randomly divided into model group (distilled water), positive control group (metformin, 0.1 g/kg), ST low-dose, medium-dose and high-dose groups (22.2, 29.6, 44 g/kg, calculated by crude drug, similarly hereinafter), YT low-dose, medium-dose and high-dose groups (10.7, 16, 32 g/kg), ZT low-dose, medium-dose and high-dose groups (10.5, 15.8, 31.6 g /kg), WT low-dose, medium-dose and high-dose groups (18.5, 24.6, 37 g/kg), with 10 mice in each group. Other 10 normal mice were included in normal group (distilled water). Those groups were given relevant medicine intragastrically, once a day, for consecutive 28 d. The growth of mice and the change of body weight were observed and recorded. Fasting blood glucose (FBG) of mice was detected, and glucose tolerance test of mice was conducted. The contents of TC, TG, HDL-C and LDL-C in serum of mice were also determined. RESULTS: Compared with normal group, body weight and serum content of HDL-C in model group were decreased; FBG and the blood sugar after giving glucose for 0.5, 1, 2 h and area under glucose tolerance curve of mice were increased, and serum contents of TC, TG and LDL-C were alse increased, with statistical significance (P<0.01). compared with model group, body weight of mice in YT high-dose group after administration of 25 d was increased, FBG of mice in YT groups and ZT medium-dose, high-dose groups were decreased (P<0.05 or P<0.01); blood sugar of mice in YT medium-dose, high-dose groups and ZT high-dose group after giving glucose for 1 h as well as blood sugar of mice in YT high-dose group after giving glucose for 2 h were all decreased; area under glucose tolerance curve of mice and serum content of TC were decreased in YT groups and ZT high-dose group, while serum content of HDL-C was increased. Serum content of TG and LDL-C in YT high-dose group and ZT high-dose group as well as serum content of TG in YT medium-dose group were all decreased, serum content of HDL-C in ZT medium-dose group was increased, with statistical significance (P<0.05 or P<0.01). CONCLUSIONS: The ethyl acetate part and n-butanol part from the leaves of D. longan show good hypoglycemic effect on type 2 diabetes mellitus mice.

        KEYWORDS Leaves of Dimocarpus longan; Type 2 diabetes mellitus; Hypoglycemic; Different polar part; Mice

        2型糖尿病具有明顯內(nèi)分泌代謝紊亂的特點(diǎn),是臨床上較為常見的慢性病之一。目前,臨床上有不少治療糖尿病療效較好的藥物,但因其對(duì)人體的副作用較大,不能有效控制各類并發(fā)癥的發(fā)生,某些治療糖尿病的藥物甚至在降血糖的同時(shí)還具有誘導(dǎo)β細(xì)胞凋亡的副作用[1],在一定程度上限制了此類藥物在臨床上的長期使用。傳統(tǒng)中醫(yī)藥在治療糖尿病時(shí)具有顯著改善臨床癥狀、不良反應(yīng)少且輕等優(yōu)勢(shì),引起了人們?cè)絹碓蕉嗟年P(guān)注[2]。

        龍眼葉是一味具有廣西民族特色的中藥材,最早記載于《滇南本草圖說》,為著名的亞熱帶水果——龍眼(Dimocarpus longan Lour.)樹的葉子或嫩芽[3-4],具有發(fā)表清熱、利濕解毒等功效,主要用于治療感冒發(fā)熱、瘧疾、疔瘡、濕疹等[5-6]。本課題組前期研究考察了龍眼葉對(duì)四氧嘧啶小鼠糖尿病模型、腎上腺素小鼠高血糖模型及正常小鼠的降血糖活性,發(fā)現(xiàn)龍眼葉正丁醇部位和95%乙醇部位具有明顯的降血糖活性[7-8],但考察的指標(biāo)過于單一,只選擇了空腹血糖值作為檢測指標(biāo)。故在本研究中,筆者對(duì)另一種糖尿病模型(高糖高脂飼料聯(lián)合鏈脲佐菌素制備2型糖尿病小鼠模型)繼續(xù)深入考察龍眼葉不同極性提取物對(duì)2型糖尿病小鼠的降血糖作用,通過對(duì)小鼠體質(zhì)量、血糖值、糖耐量和血脂等指標(biāo)的測定,系統(tǒng)探尋龍眼葉降血糖的活性部位,為龍眼葉的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        1 材料

        1.1 儀器

        BGMS-1血糖儀(長沙三諾生物傳感技術(shù)股份有限公司);EYELAN-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司);JCS-A電子天平(浙江凱豐集團(tuán)有限公司);HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司);5430R離心機(jī)[艾本德(中國)有限公司];DWP-9162電熱恒溫箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);M200 PR全波長酶標(biāo)儀[帝肯(上海)貿(mào)易有限公司]。

        1.2 藥材、藥品與試劑

        龍眼葉藥材于2016年10月采自廣西賀州市,經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)滕建北副教授鑒定為Dimocarpus longan Lour.的葉;鏈脲佐菌素(STZ,美國Sigma公司,批號(hào):S0130-1g);檸檬酸(天津市北辰方正試劑廠,批號(hào):20160225);檸檬酸鈉(天津市大茂化學(xué)試劑廠,批號(hào):20160103);葡萄糖(廣西梧州制藥股份有限公司,批號(hào):1601010);鹽酸二甲雙胍片(中美上海施貴寶制藥有限公司,批號(hào):AAH5779,規(guī)格:0.5 g/片);總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)測試盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào)分別為:20161008、20161008、20161013、0161013);乙醇為95%的食用級(jí)乙醇,其余試劑均為分析純。

        1.3 動(dòng)物

        SPF級(jí)KM小鼠,♀♂各半,體質(zhì)量18~22 g,購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(湘)2011-0003。本實(shí)驗(yàn)所有動(dòng)物生活環(huán)境一致,實(shí)驗(yàn)前3 d為適應(yīng)期,期間自由攝食與飲水,適應(yīng)期內(nèi)所有小鼠的飼料與飲用水完全相同。

        2 方法

        2.1 龍眼葉總提物降血糖活性考察

        2.1.1 龍眼葉總提物的制備 將龍眼葉藥材陰干后,取10 kg經(jīng)乙醇滲漉提取,得龍眼葉總提物浸膏3 150 g(得膏率為31.5%)。

        2.1.2 2型糖尿病小鼠模型的建立 取小鼠連續(xù)飼喂4周高糖高脂飼料,然后腹腔注射STZ制備2型糖尿病模型。造模前,小鼠禁食不禁水12 h,將STZ溶解于檸檬酸-檸檬酸鈉溶液中,給藥劑量為120 mg/kg,一周后測定小鼠空腹血糖值,當(dāng)空腹血糖值≥9 mmol/L時(shí)判定為造模成功[9-10]。

        2.1.3 分組與給藥 將造模成功的小鼠隨機(jī)分為5組,分別為模型組(蒸餾水)、陽性對(duì)照組(二甲雙胍,0.1 g/kg,根據(jù)成人臨床常用劑量換算而得)和龍眼葉總提物低、中、高劑量組(12.5、25、50 g/kg,以生藥計(jì)),每組10只;并另選10只正常小鼠作為正常組(蒸餾水)。各組小鼠均每天灌胃給藥1次,連續(xù)給藥28 d,給藥期間正常組小鼠飼喂正常飼料,其余各組小鼠均繼續(xù)飼喂高糖高脂飼料。

        2.1.4 指標(biāo)檢測 (1)一般情況。每天定時(shí)觀察鼠籠內(nèi)墊料的臟、濕情況,并觀察小鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)、進(jìn)食和飲水量等變化。(2)體質(zhì)量。小鼠開始灌胃給藥前1天,各組小鼠禁食不禁水8 h,稱量小鼠空腹體質(zhì)量;給藥期間每7天稱量小鼠空腹體質(zhì)量1次,觀察小鼠體質(zhì)量變化。(3)空腹血糖值。給藥28 d后,小鼠禁食不禁水8 h,然后進(jìn)行尾靜脈取血,用血糖儀測定小鼠的空腹血糖值。(4)糖耐量。以“(3)”測定的空腹血糖值作為0 h的血糖值,然后每只小鼠灌胃2 g/kg的葡萄糖溶液,并于給予葡萄糖溶液0.5、1、2 h后尾靜脈取血,測血糖值,觀察各組小鼠在各時(shí)間點(diǎn)的血糖值變化,并繪制血糖-時(shí)間曲線,計(jì)算小鼠糖耐量曲線下面積(Area under the curve,AUC)。

        2.2 龍眼葉不同極性部位降糖活性考察

        2.2.1 龍眼葉不同極性部位的制備 取2 810 g總提物浸膏,用5倍量水混懸后,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,剩下為水部位,濃縮干燥即得龍眼葉石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位提取物(分別記為ST、YT、ZT和WT),其中得到ST 514 g(1 g浸膏相當(dāng)于生藥材17.36 g),龍眼葉YT 504.7 g(1 g浸膏相當(dāng)于生藥材17.67 g),ZT 677.4 g(1 g浸膏相當(dāng)于生藥材13.17 g)和WT 552 g(1 g浸膏相當(dāng)于生藥材16.16 g)。樣品使用前加水研磨制備成不同質(zhì)量濃度的混懸液。

        2.2.2 分組、造模與給藥 按照“2.1.2”項(xiàng)下方法制備糖尿病小鼠模型。將造模成功的小鼠隨機(jī)分為14組,分別為模型組(蒸餾水),陽性對(duì)照組(二甲雙胍,0.1 g/kg),ST低、中、高劑量組(22.2、29.6、44 g/kg,以生藥計(jì),下同),YT低、中、高劑量組(10.7、16、32 g/kg),ZT低、中、高劑量組(10.5、15.8、31.6 g/kg)和WT低、中、高劑量組(18.5、24.6、37 g/kg),每組10只;并另選10只正常小鼠作為正常組(蒸餾水)。各組小鼠均每天灌胃給藥1次,連續(xù)給藥28 d,給藥期間正常組小鼠飼喂正常飼料,其余各組小鼠均繼續(xù)飼喂高糖高脂飼料。

        2.2.3 指標(biāo)檢測 除按照“2.1.3”項(xiàng)下方法檢測相關(guān)指標(biāo)外,還檢測小鼠的血脂四項(xiàng)指標(biāo):給藥28 d后,取給藥干預(yù)之后血糖值明顯下降的相應(yīng)部位組別的小鼠,參照試劑盒說明書操作測定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。

        2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以x±s表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        3 結(jié)果

        3.1 龍眼葉總提物降血糖活性考察結(jié)果

        3.1.1 一般情況觀察結(jié)果 小鼠造模前生長正常;造模后小鼠逐漸消瘦,飲食量和排泄量逐漸加大,出現(xiàn)明顯的“三多一少”癥狀;在給藥一段時(shí)間后,陽性對(duì)照組和龍眼葉總提物高劑量組小鼠的上述情況有所改善。

        3.1.2 體質(zhì)量測定結(jié)果 與正常組比較,模型組小鼠體質(zhì)量顯著降低(P<0.01);與模型組比較,各給藥組小鼠體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明龍眼葉總提物對(duì)2型糖尿病小鼠的體質(zhì)量無明顯改善效果,結(jié)果見表1。

        3.1.3 空腹血糖值測定結(jié)果 與正常組比較,各造模組小鼠給藥前的空腹血糖值均顯著升高(P<0.01);給藥28 d后,陽性對(duì)照組和龍眼葉總提物高劑量組小鼠的空腹血糖值較同組給藥前以及給藥28 d后的模型組均顯著降低(P<0.05或P<0.01),這表明高劑量龍眼葉總提物對(duì)2型糖尿病模型小鼠具有一定的降血糖作用,結(jié)果見表2。

        3.1.4 糖耐量測定結(jié)果 與正常組比較,模型組小鼠在給予葡萄糖0.5、1、2 h后的血糖值均顯著升高(P<0.01),AUC顯著增大(P<0.01)。與模型組比較,陽性對(duì)照組小鼠在給予葡萄糖0.5、1、2 h后的血糖值均顯著降低(P<0.05或P<0.01), AUC顯著減?。≒<0.01);龍膽葉總提取高劑量組小鼠在給予葡萄糖1、2 h后的血糖值顯著降低(P<0.05或P<0.01),AUC顯著減?。≒<0.01),這提示高劑量龍眼葉總提物能夠有效地改善2型糖尿病小鼠的糖耐量,具有較好的降血糖活性,結(jié)果見表3。

        3.2 龍眼葉不同極性部位的降血糖作用考察結(jié)果

        3.2.1 一般情況觀察結(jié)果 小鼠造模前生長正常;造模后逐漸消瘦,飲食量和排泄量加大,出現(xiàn)明顯的“三多一少”癥狀;在給藥干預(yù)一段時(shí)間后,陽性對(duì)照組、YT各劑量組和ZT各劑量組小鼠的狀態(tài)有所好轉(zhuǎn)。

        3.2.2 體質(zhì)量測定結(jié)果 與正常組比較,模型組小鼠體質(zhì)量均顯著降低(P<0.01);與模型組比較,YT中劑量組小鼠在給藥14、21 d后的體質(zhì)量以及YT高劑量組小鼠在給藥7、14、21、28 d后的體質(zhì)量均顯著升高(P<0.05或P<0.01),其余各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),結(jié)果見表4。

        3.2.3 空腹血糖值測定結(jié)果 給藥前,與正常組比較,其余各組小鼠的空腹血糖值均顯著升高(P<0.01)。給藥28 d后,與正常組比較,模型組大鼠空腹血糖值升高(P<0.01);陽性對(duì)照組、YT各劑量組以及ZT中、高劑量組小鼠與模型組比較,空腹血糖值均顯著降低(P<0.05或P<0.01);且陽性對(duì)照組、YT各劑量組以及ZT高劑量組小鼠與給藥前比較,空腹血糖值顯著降低(P<0.05或P<0.01);ST、WT各劑量組小鼠空腹血糖值與模型組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),可見ST和WT無明顯將血糖活性,故在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中不考察這兩個(gè)部位對(duì)糖耐量和血脂四項(xiàng)的影響,結(jié)果詳見表5。

        3.2.4 糖耐量測定結(jié)果 與正常組比較,模型組小鼠在給予葡萄糖0.5、1、2 h后的血糖值均顯著升高(P<0.01),AUC顯著增大(P<0.01)。與模型組比較,陽性對(duì)照組小鼠在給予葡萄糖0.5、1、2 h后的血糖值均顯著降低(P<0.05或P<0.01),AUC顯著減?。≒<0.01);YT中、高劑量組和ZT高劑量組小鼠在給予葡萄糖1 h后小鼠的血糖值均顯著降低(P<0.01), AUC均顯著減?。≒<0.01),且YT高劑量組小鼠在給予葡萄糖2 h后的血糖值均顯著降低(P<0.05或P<0.01),結(jié)果提示YT和ZT均能在一定程度上改善糖耐量,具有較好的降血糖活性,結(jié)果見表6。

        3.2.5 血脂4項(xiàng)測定結(jié)果 與正常組比較,模型組小鼠血清中TC、TG、LDL-C含量顯著升高(P<0.01),HDL-C含量顯著降低(P<0.01)。與模型組比較,陽性對(duì)照組、YT高劑量組和ZT高劑量組小鼠血清中TC、TG、LDL-C含量均顯著降低(P<0.05或P<0.01),HDL-C含量顯著均升高(P<0.01);YT低劑量組小鼠血清中TC含量顯著降低(P<0.05),HDL-C含量顯著升高(P<0.05);YT中劑量組小鼠血清中TC、TG含量顯著降低(P<0.05),HDL-C含量顯著升高(P<0.01);ZT中劑量組小鼠血清中HDL-C含量顯著升高,結(jié)果見表7。

        4 討論

        前期急性毒性實(shí)驗(yàn)[11]研究結(jié)果顯示,WT對(duì)小鼠具有明顯毒性,采用改良寇氏法計(jì)算其半數(shù)致死量(LD50)為740 g/kg (以生藥計(jì),下同),在本研究中將其LD50的 1/20、1/30、1/40分別設(shè)置為WT的高、中、低給藥劑量。龍眼葉總提取物、ST、YT和ZT均未見明顯毒性,根據(jù)各部位最大耐受量(MTD)確定給藥劑量,龍眼葉總提取物的MTD為101.4 g/kg,將其MTD的1/2、1/4、1/8分別設(shè)置為高、中、低給藥劑量;ST的MTD為888.8 g/kg,將其MTD的1/20、1/30、1/40分別設(shè)置為高、中、低給藥劑量;YT的MTD為320 g/kg,ZT的MTD為316 g/kg,皆將其MTD的1/10、1/20、1/30分別設(shè)置為高、中、低給藥劑量。

        本研究結(jié)果顯示,龍眼葉總提物能降低2型糖尿病模型小鼠的血糖并能增強(qiáng)葡萄糖耐受能力,對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響不大。YT能較好地降低2型糖尿病模型小鼠的血糖,改善其體質(zhì)量變化,增強(qiáng)小鼠的葡萄糖耐受能力,并對(duì)小鼠的血脂紊亂具有較好的調(diào)節(jié)作用;ZT對(duì)小鼠具有降血糖作用,但其效果不如YT明顯;ST和WT未見有明顯的降血糖作用。研究結(jié)果表明,龍眼葉對(duì)2型糖尿病小鼠降血糖的活性部位為龍眼葉乙酸乙酯部位和正丁醇部位,但有關(guān)其發(fā)揮降糖作用的具體化學(xué)成分及降糖的相關(guān)機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

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        (收稿日期:2017-10-28 修回日期:2018-01-08)

        (編輯:林 靜)

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