谷俐媛，梁萬文 ，施 君，韋英益，胡庭俊

（1.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530005；2.廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究院，廣西 南寧 530021）

“三黃連”合劑是一種中獸藥復(fù)方新制劑，主要用于羅非魚鏈球菌病的防治。其主要組分黃芩為唇形科黃芩屬植物黃芩的干燥根，味苦、性寒，歸肺、膽、脾、大腸和小腸經(jīng)，具有清熱燥濕、涼血、解毒、保胎、安胎等功效，是常用的傳統(tǒng)中藥材之一，用于治療肺熱咳嗽、發(fā)熱煩渴、濕熱黃疸、胎動(dòng)不安、瘡癰腫毒和瀉痢熱淋等癥狀。近年來隨著對(duì)中藥研究的不斷深入，黃芩中的化學(xué)成分也被逐步探明和分離。黃芩的化學(xué)成分主要包括黃酮類化合物，如黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素和千層紙素A等［1］。近代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃芩的主要化學(xué)成分具有多種藥理作用，包括抗菌、抗病毒、抗驚厥、抗腫瘤、解熱、保胎、安胎、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等，其作用機(jī)制也被逐漸揭示?！叭S連”合劑的另一組分連翹是木犀科連翹屬植物連翹的果實(shí)，性微寒，味苦，入肺、心、膽經(jīng)，有清熱解毒、消癰散結(jié)的功效，具有“瘡家圣藥”之稱。連翹常用于外感風(fēng)熱、咽喉腫痛、癰腫瘡癤、瘰疬等癥狀。連翹的化學(xué)成分復(fù)雜，主要發(fā)現(xiàn)有木脂素類，如牛蒡苷元、馬太樹脂酚苷和連翹苷元等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究也證實(shí)連翹具有廣泛的藥理學(xué)作用，如抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化等。

穩(wěn)定性研究是藥學(xué)研究中的重要組成部分，通常以質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項(xiàng)目對(duì)制劑進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)價(jià)，制劑中質(zhì)控成分的含量變化及其趨勢(shì)是穩(wěn)定性研究的重點(diǎn)［2-3］。該研究在“三黃連”合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，通過光加速試驗(yàn)、加速試驗(yàn)考查在溫度、濕度、光照的影響下制劑的理化性質(zhì)變化規(guī)律，評(píng)價(jià)“三黃連”合劑的穩(wěn)定性，以期為新獸藥申報(bào)、生產(chǎn)、包裝、貯存和運(yùn)輸條件提供必要的資料。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

“三黃連”合劑3批供試品 （批號(hào)分別為：130629、130702、130705， 廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室自制）；黃芩苷對(duì)照品 （批號(hào)：110715-201117，購于中國(guó)食品藥品檢定研究院）；連翹苷對(duì)照品（批號(hào)：110821-201112，購于中國(guó)食品藥品檢定研究院）；黃芩、連翹標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照藥材（購于中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）；乙腈（色譜純，TEDIA）；超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

藥品強(qiáng)光照射試驗(yàn)箱（型號(hào)：SHH-100GD，重慶永生實(shí)驗(yàn)儀器廠）；藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱 （型號(hào)：SHH-250SD，重慶永生實(shí)驗(yàn)儀器廠）；pH值計(jì)（型號(hào)：PHS-3C，上海雷磁儀器廠）；通風(fēng)柜（型號(hào)：FF-09056-16，科藝科技有限公司）；電熱恒溫干燥箱（型號(hào)：DHG-9071A，上海精宏）；三用紫外儀（型號(hào)：ZF-2，上海安亭電子儀器廠）；硅膠H板（100mm×100mm，青島海洋化工廠分廠）；硅膠G板（100mm×100mm，青島海洋化工廠分廠）；展開缸；毛細(xì)點(diǎn)樣管；電子天平（型號(hào)：FA2004N，上海精密科學(xué)儀器有限公司）；Waters 2695分離單元、Waters 2998二極管陣列檢測(cè)器 （美國(guó)Waters公司）；Empower色譜工作站。

1.3 光加速試驗(yàn)

參照農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的 “獸藥穩(wěn)定性試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范（試行）”，取“三黃連”合劑3批分別裝入無色透明容器內(nèi)，置于藥品強(qiáng)光照射試驗(yàn)箱，于照度（4500±500）lx條件下放置10 d，在第5天和第10天定時(shí)取樣，按照口服液的穩(wěn)定性重點(diǎn)考查項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，分別檢測(cè)合劑的性狀、主要有效成分含量、色澤、澄清度、pH值、密度等。pH值、密度等的測(cè)定方法參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》一部附錄［4］操作要求進(jìn)行。黃芩苷和連翹苷的定性檢測(cè)采用薄層色譜法，定量檢測(cè)采用高效液相色譜法。

1.4 加速試驗(yàn)

參照農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的 “獸藥穩(wěn)定性試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范（試行）”，取“三黃連”合劑3批，按照市售包裝，置于藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱，在溫度（40±2）℃、相對(duì)濕度 （75±5）%的條件下放置6個(gè)月，每個(gè)月取樣1次，按照口服液的穩(wěn)定性試驗(yàn)重點(diǎn)考查項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，分別檢測(cè)合劑的性狀、主要有效成分含量、色澤、澄清度、pH值、密度等。pH值、密度等的測(cè)定方法參照《中華人民共和國(guó)獸藥典》一部附錄［4］操作要求進(jìn)行。黃芩苷和連翹苷的定性檢測(cè)采用薄層色譜法，定量檢測(cè)采用高效液相色譜法。

2 結(jié)果與分析

2.1 光加速試驗(yàn)

光加速試驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可知，“三黃連”合劑在照度（4 500±500）lx的條件下放置 10 d，其性狀均為棕褐色澄明液體，味感均為苦味并略帶甜味，TLC法鑒別黃芩和連翹均在相同位置顯示與標(biāo)準(zhǔn)品同色的斑點(diǎn)，pH值、密度以及黃芩苷、連翹苷的含量均在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，說明 “三黃連”合劑對(duì)光穩(wěn)定，貯存過程中對(duì)避光無要求，可用透明容器進(jìn)行包裝。

2.2 加速試驗(yàn)

3批“三黃連”合劑的加速試驗(yàn)結(jié)果見表2～表4。由表2～表4可知，“三黃連”合劑在溫度（40±2）℃、相對(duì)濕度（75±5）%的條件下放置 6 個(gè)月，其性狀均為棕褐色澄明液體，味感均為苦味并略帶甜味，TLC法鑒別黃芩和連翹均在相同位置顯示與標(biāo)準(zhǔn)品同色的斑點(diǎn)；第0～2個(gè)月無沉淀，第3個(gè)月及以后均出現(xiàn)了少量沉淀，但振蕩后可溶解，其密度、pH值均在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)；黃芩苷、連翹苷含量隨觀察時(shí)間延長(zhǎng)整體呈下降趨勢(shì)，但仍在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。

3 討論

環(huán)境因素是影響藥物穩(wěn)定性的重要因素之一。部分藥物在強(qiáng)光、高溫、高濕作用下，可能會(huì)發(fā)生變質(zhì)、成分分解等，進(jìn)而使藥效降低甚至產(chǎn)生毒性成分，因此，對(duì)藥品穩(wěn)定性的考查是非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的是為了考查藥物在溫度、濕度、光照的影響下隨時(shí)間變化的規(guī)律，從而為藥品包裝、貯存和運(yùn)輸條件提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)也為產(chǎn)品有效期的制定提供依據(jù)。穩(wěn)定性試驗(yàn)包括影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)等，其中，影響因素試驗(yàn)適用于原料藥穩(wěn)定性的考查，加速試驗(yàn)與長(zhǎng)期試驗(yàn)適用于藥物制劑穩(wěn)定性的考查。

薄層色譜法是對(duì)藥物有效成分進(jìn)行快速分離、定性分析的一項(xiàng)重要技術(shù)，其屬于色譜技術(shù)，具有微量、快速、分離效率高、靈敏度高、設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果直觀、不易被污染等優(yōu)點(diǎn)［4］。高效液相色譜法具有靈敏度高、選擇性好、分離性能好、分析速度快、適用范圍廣、樣品量少、容易回收等優(yōu)點(diǎn)，在化學(xué)、醫(yī)藥、食品、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，是最常用的藥物分離和檢測(cè)方法［5-7］。該研究對(duì)“三黃連”合劑進(jìn)行了光加速試驗(yàn)和加速試驗(yàn)，分別考查了該制劑的性狀、pH值、密度和有效成分含量。在光加速試驗(yàn)中，3批“三黃連”合劑在強(qiáng)光照射試驗(yàn)箱中放置10 d，在第5天和第10天時(shí)取樣檢測(cè)，結(jié)果表明各項(xiàng)指標(biāo)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，“三黃連”合劑對(duì)強(qiáng)光不敏感，市售包裝可以采用透明玻璃瓶。光加速試驗(yàn)中，“三黃連”合劑的黃芩苷含量在第10天時(shí)略有增加，這可能是由于試驗(yàn)條件并不能保持完全一致造成的實(shí)驗(yàn)誤差以及一些人為因素造成的操作誤差，如高效液相色譜儀運(yùn)行時(shí)間的差異、流動(dòng)相配制時(shí)的誤差等，這還需要進(jìn)一步的探索和研究。

表1 “三黃連”合劑光加速試驗(yàn)結(jié)果

表2 批號(hào)為130629的“三黃連”合劑加速試驗(yàn)結(jié)果

表3 批號(hào)為130702的“三黃連”合劑加速試驗(yàn)結(jié)果

表4 批號(hào)為130705的“三黃連”合劑加速試驗(yàn)結(jié)果

在加速試驗(yàn)中，取“三黃連”合劑按照市售包裝置于藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱6個(gè)月，每個(gè)月取樣檢測(cè)。在3～6個(gè)月時(shí)，3批“三黃連”合劑均出現(xiàn)了沉淀，但振蕩后可以溶解，仍然符合要求。其余各項(xiàng)指標(biāo)，包括性狀、密度、pH值和有效成分含量等均沒有明顯變化，符合“三黃連”合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。藥品質(zhì)量直接關(guān)系到廣大養(yǎng)殖戶的利益，對(duì)于獸藥的質(zhì)量必須嚴(yán)格把關(guān)，因此，還需要對(duì)該藥進(jìn)一步留樣觀察進(jìn)行長(zhǎng)期檢測(cè)，對(duì)其沉淀的產(chǎn)生、有效成分的含量等繼續(xù)檢測(cè)，并進(jìn)行多次重復(fù)試驗(yàn)，以確保其穩(wěn)定性。

加速試驗(yàn)中檢測(cè)到的黃芩苷、連翹苷含量在3批“三黃連”合劑中均呈下降趨勢(shì)，可見在長(zhǎng)期的貯存過程中，該藥的有效成分含量有所下降，這可能會(huì)影響藥品的藥效。因此，在穩(wěn)定性試驗(yàn)尤其是長(zhǎng)期試驗(yàn)過程中要注意對(duì)藥品有效成分含量的檢測(cè)，同時(shí)，應(yīng)該通過臨床試驗(yàn)對(duì)供試品進(jìn)行藥效學(xué)考查，這樣才能使有效期的制定更加科學(xué)。另外，長(zhǎng)期的貯存中“三黃連”合劑也出現(xiàn)了沉淀，雖然振蕩后可溶解，但在長(zhǎng)期貯存過程中沉淀可能會(huì)進(jìn)一步增加，這也可能會(huì)對(duì)藥效和性狀產(chǎn)生一定的影響。提示“三黃連”合劑的制備過程尚待優(yōu)化，可以從調(diào)節(jié)合劑的 pH 值［8］、加入助溶劑［9-10］和穩(wěn)定劑［11］等方向考慮，使“三黃連”合劑更加穩(wěn)定，從而保證藥效。

4 結(jié)論

該研究通過光加速試驗(yàn)、加速試驗(yàn)檢測(cè)了“三黃連”合劑的穩(wěn)定性，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)“三黃連”合劑性狀穩(wěn)定，各項(xiàng)指標(biāo)符合規(guī)定?！叭S連”合劑對(duì)光不敏感，在生產(chǎn)、貯存和運(yùn)輸過程中不必考慮避光，可以采用透明容器進(jìn)行包裝。