劉開(kāi)明，王壯波，謝農(nóng)村，朱立軍*

（1.桃源青林回族維吾爾族鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)和農(nóng)村經(jīng)營(yíng)管理服務(wù)站，湖南桃源415700；

2.桃江縣畜牧水產(chǎn)局，湖南 桃江413400；3.湖南佳牛牧業(yè)科技有限公司，湖南 長(zhǎng)沙410131）

0 引言

家禽的精液是由精子和精清組成。公雞有射精量少、精子密度大、在高溫條件下體外存活時(shí)間短等特點(diǎn)。有文獻(xiàn)報(bào)道母雞每次輸精，如果精子活力在0.6以上，則0.2×108個(gè)精子就足夠［1］。公雞每次交配可射出 15×108～80×108個(gè)精子［2］。在公雞使用的早期和晚期，易出現(xiàn)精液缺乏現(xiàn)象，雞精液稀釋技術(shù)可有效解決這種問(wèn)題。如果采用自然交配，公雞母雞比例為1∶10。如果采用人工輸精，則為1∶30左右。若將原精稀釋2～3倍，則可將公母比例擴(kuò)大到1∶60～1∶90，能更好地發(fā)揮種雞的繁殖性能，取得更高的經(jīng)濟(jì)效益。

在實(shí)踐生產(chǎn)中使用雞精液稀釋后再等量輸精，盡管輸入精子總數(shù)減少，種蛋受精率與原精水平持平，有一部分種雞場(chǎng)受精率和孵化率還有所提高，一方面可能是原精的輸精量本來(lái)就超出獲得最佳受精率的精子總量，另一方面可能是稀釋后精子活力升高［3］。

1 器具的準(zhǔn)備

1.1 器具

20倍便攜式視屏溫控顯微鏡，冷藏箱，恒溫干燥箱，輸精器，2 mL、10 mL離心管，載玻片、蓋玻片，衛(wèi)生紙，雞精液稀釋液或0.9%生理鹽水，10μL、1 mL移液器及配套槍頭等。

1.2 器具清洗與消毒

需要重復(fù)使用的載玻片、蓋玻片、2 mL離心管、移液器槍頭等，使用后立即用清水浸泡（新購(gòu)器具添加洗滌液浸泡，再用毛刷清洗），清洗干凈，最后100℃沸水煮30 min消毒。包裝后置70℃烘箱或者消毒柜中備用。

2 雞精液稀釋液保存方法

可以選用雞專用精液稀釋液，如HF雞精液稀釋液（發(fā)明專利號(hào) ZL201510660641.4，生產(chǎn)許可批文號(hào) Q／OCKA017-2016），將5 mL／支的稀釋液在采精前一晚提前從-20℃的冷凍室移入冰箱冷藏室解凍備用，稀釋液保存必須防止污染，用干凈塑料袋密封好，尤其是管口保持干凈，再放入冰箱冷凍室保存?zhèn)溆?。如用生理鹽水作稀釋液，則為常溫保存。

3 種公雞采精方法

多采用背腹按摩采精法，具體操作因種雞場(chǎng)設(shè)備和技術(shù)人員而異，常采用雙人站立式和坐式兩種方法?，F(xiàn)以雙人站立式背腹部按摩采精方法介紹如下。

1人保定公雞，1人按摩采精同時(shí)接取精液。首先公雞保定者從種公雞籠中用一只手抓住公雞的雙腳，將公雞腹部置于雞籠門沿上，尾部稍抬高。采精者站在保定者左側(cè)，用右手食指與中指或無(wú)名指夾住采精杯，采精杯口朝向手背防止雞身上灰塵掉進(jìn)杯中。采精者左手大拇指和食指自然分開(kāi)微彎曲，手掌心向下從公雞的背鞍部向尾羽方向由輕到重來(lái)回?fù)崮?shù)次，同時(shí)持采精杯的右手大拇指和其余四指分開(kāi)，從公雞的腹部向肛門方向緊貼雞體作同步按摩［4］，左右手配合默契。按摩幾次后，公雞很快出現(xiàn)性反射動(dòng)作，尾部向上翹起，肛門也向外翻，看到生殖器勃起時(shí)，左手迅速轉(zhuǎn)向尾下方，用左手拇指和食指迅速跨捏在泄殖腔上兩側(cè)，順勢(shì)將泄殖腔周圍羽毛向后壓（這種方法可以避免剪毛），輕輕擠壓，使肛門更明顯地向外翻出，當(dāng)露出乳狀突起時(shí)，一松一緊地施加適當(dāng)壓力，看到公雞射出乳白色如牛奶樣精液時(shí)，右手迅速將集精杯口接外流的精液。如此反復(fù)地按摩采精2次，至公雞排完精液為止［4］，每采完一次精后，采精者用吸管將精液吸入集精杯中（也可將采精杯當(dāng)集精杯進(jìn)行連續(xù)采精），而抓公雞的保定助手將公雞關(guān)入籠中，接著換另一羽公雞采精。

建議使用帶喇叭口的集精杯，一旦有污染的精液，可趁其在邊沿處時(shí)用棉簽擦掉，有效防止糞便污染。

4 精液質(zhì)量檢測(cè)

4.1 精液的外觀檢測(cè)

正常公雞精液的顏色為乳白色，不透明，精液略帶腥味。如果精液顏色混有血液則呈粉紅色，混有糞便呈黃褐色，混有尿酸鹽呈白色棉絮狀，混有大量透明液的呈清水狀［4］，有病無(wú)精子的呈黃水狀，精液顏色異常者均不宜輸精。

種公雞射精量在0.2～1.0 mL，平均射精量為 0.4 mL，主要因雞的品種、年齡、生理狀況、光照制度、飼養(yǎng)與管理?xiàng)l件而不同，同時(shí)與公雞使用制度和采精的熟練程度有關(guān)。

4.2 顯微鏡檢測(cè)方法

4.2.1 原精液檢測(cè)

用2 mL離心管采集公雞精液，每輪采集（5～10）只公雞，控制在30 min內(nèi)檢測(cè)完，檢測(cè)完一批后再繼續(xù)下一輪采集。取載玻片置于32℃顯微鏡恒溫板上預(yù)熱至恒溫［5］，吸7～12 μL于載玻片上，選取5個(gè)不同部位的視野進(jìn)行密度與活力評(píng)定，判定標(biāo)準(zhǔn)如下。

活力評(píng)定分3級(jí)：“A”，即大群精子像開(kāi)水煮沸，或呈云霧狀旋窩、波浪狀翻滾；“B”，即大群精子呈快速直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，形成許多條抖動(dòng)的S形曲線；“C”，即大群精子游動(dòng)速度較慢，或者呈旋轉(zhuǎn)、轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)［5］?！癇”以上等級(jí)精液判定為合格。

密度評(píng)定也分3級(jí)：“密”，指在顯微鏡下，整個(gè)視野完全被精子沾滿，幾乎看不到精子間的空隙和單個(gè)精子個(gè)體的運(yùn)動(dòng)情況，此時(shí)精子的密度為40億／mL以上；“中”，指視野中精子之間有相當(dāng)于1個(gè)精子長(zhǎng)度的明顯空隙，可見(jiàn)到單個(gè)精子的活動(dòng)，此時(shí)精子密度為20億～40億／mL；“稀”，指視野內(nèi)精子之間的空隙很大，稀疏分散，能容納2個(gè)或者2個(gè)以上精子，精液密度為20億／mL以下。

4.2.2 稀釋精液檢測(cè)

根據(jù)待檢公雞數(shù)量，準(zhǔn)備含稀釋液的2 mL離心管，并根據(jù)公雞所在欄舍位置在管上標(biāo)記對(duì)應(yīng)編號(hào)，置于室溫。手緊握含稀釋液（0.5 mL）的2 mL離心管，每只公雞單獨(dú)采集精液（0.5 mL左右），采完后搖勻，放入冷藏箱，依次采完所有公雞，帶入顯微鏡室集中檢測(cè)。

為了不影響正常輸精，也可以在每只公雞采完精（這時(shí)采集正常量）的2 mL離心管內(nèi)只留下一定量（如0.2 mL）稀釋后精液并冷藏，其余抽取到集精杯中用于輸精。從冷藏箱中拿出稀釋精液，輕輕搖勻，按以上方法進(jìn)行檢測(cè)，密度按原精方法判斷，活力在0.7以上為合格，具體判定方法參照表1［6］。

表1 雞精子活力等級(jí)判定表［6］

種公雞開(kāi)始采精時(shí)，即25周齡左右檢測(cè)1次；使用至中期，即60周齡左右檢測(cè)1次；或者根據(jù)生產(chǎn)需要隨時(shí)檢測(cè)。對(duì)于原精液檢測(cè)不合格的，應(yīng)稀釋后檢測(cè)，如果稀釋后檢測(cè)仍不合格的，應(yīng)隔天稀釋后復(fù)檢。對(duì)于復(fù)檢不合格的，應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理或淘汰處理。

5 精液稀釋程序

5.1 預(yù)熱方法

精液稀釋的原則是“等溫及時(shí)溫和稀釋”。采用34℃水浴或者恒溫箱預(yù)熱20～30 min，或者提前至少30 min將稀釋液放入貼膚口袋中預(yù)熱（冬天上身貼近皮膚口袋，夏天為貼近皮膚褲袋），稀釋液越貼近皮膚接近體溫越好，稀釋時(shí)稀釋液與雞精液的溫差不超過(guò)3℃［8］。稀釋后就沒(méi)有必要保溫了。

5.2 稀釋液用量

輸精工作人員應(yīng)根據(jù)當(dāng)天需要進(jìn)行人工輸精的母雞數(shù)，按原精與稀釋液1∶（1～2）的比例計(jì)算稀釋液量進(jìn)行。

5.3 精液稀釋方法

可以采用以下兩種方式進(jìn)行稀釋。

（1）先加稀釋液后采精。按指定稀釋倍數(shù)，先將已經(jīng)預(yù)的稀釋液倒入容量為10 mL的集精管中，再逐步采集相應(yīng)體積的精液，精液與稀釋液自然混勻［6］。

（2）先采精再加稀釋液。用10 mL離心管采集4 mL精液后，再緩緩倒入相應(yīng)體積的稀釋液（一般就是一支稀釋液，免去定量操作）［6］，用集精管蓋蓋住管口，輕輕顛倒混勻6次左右，觀察混合精液顏色是否均勻，如不均勻要繼續(xù)顛倒混勻。

5.4 稀釋精液品質(zhì)要求與注意事項(xiàng)

稀釋后活力，不低于0.8。輸精量，采用稀釋精液輸精時(shí)，一次輸精有效精子數(shù)不低于0.43億，1∶1稀釋的輸精量不低于0.03 mL，1∶2稀釋的輸精量不低于0.035 mL。

如果種場(chǎng)雞場(chǎng)采用異地或遠(yuǎn)距離輸精時(shí)，應(yīng)將稀釋后精液密閉于離心管中，管中留有約1／3空間，5℃左右冷藏運(yùn)輸，途中避免劇烈顛簸，4 h內(nèi)完成輸精。

6 母雞輸精技術(shù)

6.1 輸精方法

母雞輸精操作一般為兩人協(xié)作完成，一人抓雞并翻肛，一人輸精。兩人輸精操作時(shí)，負(fù)責(zé)抓雞員用左手握住母雞的雙腳，將雙腳拉至籠門外，使雞的胸部貼于籠門下緣，以增加母雞腹腔內(nèi)壓力。抓雞員用右手大拇指和食指橫跨泄殖腔上下兩側(cè)，用大拇指擠壓腹部使母雞產(chǎn)生腹壓［7］，肛門會(huì)自然外翻，當(dāng)看到粉紅色陰道時(shí)（輸卵管的開(kāi)口在泄殖腔的左側(cè)），就可將吸有一定量精液的吸管插入陰道約1.5 cm深［7］，并迅速輸入精液，隨即讓翻肛的手離開(kāi)，抽出輸精管即可。抓雞人員松開(kāi)右手，左手將母雞推回籠內(nèi)。輸精后的吸嘴用脫脂棉擦拭消毒，再吸入精液等待給下一只母雞輸精。

6.2 輸精時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng)

（1）輸精過(guò)程中要保持雞舍環(huán)境安靜，降低公雞和母雞的驚恐，減少應(yīng)激。

（2）在給種雞輸精時(shí)人員要固定。翻肛用力不能太猛，輸精時(shí)動(dòng)作要輕緩，插入輸精管不要用力過(guò)大，損傷母雞和造成輸卵管發(fā)炎。

（3）輸精時(shí)遇到子宮內(nèi)有硬殼蛋時(shí)動(dòng)作要輕，而且要將輸精管偏向一側(cè)緩慢插入輸精。防止將輸卵管內(nèi)的蛋擠破，造成輸卵管炎或腹膜炎。

（4）由于稀釋的精液黏稠性降低，很容易造成精液倒流，輸精時(shí)助手要放松對(duì)母雞腹部壓力，防止稀釋精液倒流。

（5）母雞每間隔4～5 d輸精1次，如果母雞是首次輸精，那么建議第2天重復(fù)輸精1次，輸精后48 h收集種蛋。每次輸精應(yīng)在大部分母雞產(chǎn)完蛋后進(jìn)行，適宜時(shí)間為15∶00—17∶00。因?yàn)檫@段時(shí)間母雞基本都已產(chǎn)蛋，子宮內(nèi)無(wú)蛋時(shí)輸精才會(huì)得到較高的受精率。如提前輸精，因子宮里有硬殼蛋，會(huì)影響精子在輸卵管逆向運(yùn)動(dòng)，使種蛋受精率明顯下降。

7 結(jié)語(yǔ)

種雞場(chǎng)采用稀釋精液進(jìn)行人工輸精時(shí)，盡量進(jìn)行公雞精液顯微鏡檢測(cè)，保證每只公雞精液都是合格的。采用文章中的精液檢測(cè)方案，可以檢測(cè)原精，不影響正常輸精，一天檢測(cè)幾百只公雞精液。采用精液稀釋技術(shù)，比原精輸精節(jié)約公雞飼養(yǎng)量，同時(shí)降低采精勞動(dòng)強(qiáng)度，減少公雞育成費(fèi)用，又增加母雞籠位，還可提高種受精率；一輪使用4 mL一支的稀釋液，再采集4 mL精液［6］，免去了繁瑣的定量吸液操作，也更容易混勻；采用體溫預(yù)熱稀釋液［8］，免去繁瑣的水浴加熱等，這些改進(jìn)可以達(dá)到種雞場(chǎng)推廣精液稀釋技術(shù)不需額外增加人員的目的。