王世貴，談國倉，許生琪

（1.青海省互助縣農(nóng)業(yè)綜合執(zhí)法大隊(duì)，青?；ブ?10500；2.青海省湟源縣和平鄉(xiāng)獸醫(yī)站，青海 湟源812199；3.青海省互助縣西山鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，青?；ブ?10500）

0 引言

酯酶同工酶是一類具有催化體內(nèi)酯鍵水解化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的酶類，往往受一個(gè)或幾個(gè)等位基因控制，常做為較為穩(wěn)定的遺傳標(biāo)記［1］。王民［2］藍(lán)馬雞和藏馬雞血清淀粉酶和酯酶同工酶酶譜進(jìn)行了分析，馬建崗等［3］對(duì)家雞血清酯酶同工酶進(jìn)行了研究。王克華等［4］對(duì)部分烏骨雞血漿酯酶（ES-1）多態(tài)性研究，以確定雞的品種來源和親緣關(guān)系。七彩山雞、黑鳳雞和珍珠雞是國家于2003年首批批準(zhǔn)的54種可進(jìn)行商業(yè)性經(jīng)營利用和馴養(yǎng)繁殖的陸生野生動(dòng)物。了解3種禽類生化遺傳結(jié)構(gòu)，有利于保護(hù)和利用其種質(zhì)資源，并為人工飼養(yǎng)繁殖提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

七彩山雞和珍珠雞來源于青海省湟源縣和平鄉(xiāng)誠信特種珍禽養(yǎng)殖場，黑鳳雞來源于康達(dá)養(yǎng)殖有限公司。

1.2 血液采集和制備

被檢動(dòng)物經(jīng)保定后，以肝素鈉抗凝真空管采集翅下靜脈血樣3～5 mL，立即送實(shí)驗(yàn)室，離心（2 500 r／min，分離10 min）后，分離血漿，備用。

1.3 樣本制備

在反應(yīng)板滴加0.1%溴酚藍(lán)20 uL、40%蔗糖20 uL和0.1 mL血漿，充分混勻，其保存方法參照張淑君［5］。

1.4 方法

（1）同工酶酶譜：酯酶同工酶酶譜采用聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳法，電泳操作參考文獻(xiàn)［6］略作修改。

（2）酯酶顯色方法：將α-醋酸萘脂先用少量丙酮溶解，在加入無水乙醇，之

后混入pH 6.4磷酸緩沖液與混合好的堅(jiān)固蘭B鹽的混合溶液。將電泳完成的膠片置于染色盤中倒入染液置于37℃水浴箱中孵育至出現(xiàn)條帶為止。

（3）判型方法：酯酶的判型方法參照盧黎［7］的方法進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 3種禽類酯酶同工酶酶譜

由電泳圖譜（見圖4）可見，在3種雞的血漿酯酶同工酶中發(fā)現(xiàn)，ES-1和ES-3均發(fā)現(xiàn)有多態(tài)性。其中黑鳳雞的ES-1有3種類型即AB、BB和AC，而野雞的ES-1卻由3個(gè)變異體A、B、C構(gòu)成4種表現(xiàn)型，即AB、BB、BC和 AC，最后珍珠雞的ES-1只出現(xiàn)了AB、BB和 BC這3種表型；在3種雞的ES-3中，黑鳳雞和珍珠雞只出現(xiàn)了BB和AB 2種表型，而野雞的ES-3卻出現(xiàn)了3種類型即AB、BC和BB。ES-2在本次試驗(yàn)中始終呈單態(tài)。

圖1 黑鳳雞酯酶同工酶酶譜

圖2 七彩山雞酯酶同工酶酶譜

圖3 珍珠雞酯酶同工酶酶譜

圖4 3種雞血漿酯酶電泳模式圖

2.2 3種雞的基因型和基因頻率

表1 3種雞的基因型和基因頻率

2.3 3種雞的基因雜合度、平均基因雜合度以及多態(tài)位點(diǎn)百分?jǐn)?shù)

表2 3種雞的基因雜合度、平均基因雜合度以及多態(tài)位點(diǎn)百分?jǐn)?shù)

3 討論

3.1 3種雞血漿ES同工酶

酯酶的種類很多，在家雞中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了11種不同的多態(tài)性酯酶。程光潮等［8］對(duì)我國11個(gè)地方雞種ES-1位點(diǎn)上共檢測到AC、BC和CC 3種表現(xiàn)型，而王克華等［4］對(duì)部分烏骨雞血漿酯酶多態(tài)性研究時(shí)，ES-1位點(diǎn)上共檢測到AA、BB、AB、BC、AC 5種表現(xiàn)性。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，珍珠雞、野雞、黑鳳雞血清酯酶同工酶上ES-1均有不同的表現(xiàn)型而呈現(xiàn)多態(tài)性，其中以BB型純合子的比例較高，且ES-1B為優(yōu)勢基因，這與張細(xì)權(quán)［9］等研究的結(jié)果一致，但與劉坤凡等［10］研究結(jié)果不一致，這可能與不同品種、判型方法有較大的關(guān)系，還有待于進(jìn)一步探究。

3.2 平均基因雜合度和多態(tài)位點(diǎn)百分?jǐn)?shù)

平均基因雜合度的大小直接反映了物種內(nèi)遺傳變異的范圍，可以客觀地反映出群體遺傳變異的水平，平均基因雜合度與變異水平成正比。此次試驗(yàn)中珍珠雞、野雞、黑鳳雞3種雞的平均基因雜合度分別是0.356 4、0.341 7、0.463 6，多態(tài)位點(diǎn)百分?jǐn)?shù)為0.714 3，表明3種雞的遺傳多樣性程度高，選擇的潛力較大，具有開發(fā)利用的價(jià)值。