李文東，梅雪，趙玉璽，魏瑩，李紅君，幸婷婷，劉福

(1.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，四川 南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥物研究所，四川 南充 637000)

中藥配方顆粒，是指以符合炮制規(guī)范的單味中藥飲片為原料，經(jīng)現(xiàn)代工藝提取、精制而成的一種粉末或顆粒狀制劑[1]。它改變了傳統(tǒng)中成藥粗、大、黑形式，使傳統(tǒng)中藥湯劑擺脫了煎煮麻煩、攜帶不便、口服量大等缺點，使之轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N快捷、簡單、方便、衛(wèi)生的劑型，是中藥湯劑的改革[2]。陳皮來源于蕓香科植物橘CitrusReticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮，具有理氣健脾，燥濕化痰的功效，用于治療胸脘脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多等[3]。陳皮配方顆粒是以符合炮制規(guī)范的陳皮飲片為原料，經(jīng)現(xiàn)代工藝提取、濃縮、干燥、制粒而成的純中藥產(chǎn)品，其性味、歸經(jīng)、功效、成分與原中藥飲片基本一致，具有服用量小、攜帶保存方便、衛(wèi)生安全等特點。目前，對陳皮飲片質(zhì)量控制報道很多，包括性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別、含量測定等；但未見對陳皮配方顆粒含量測定的相關(guān)報道?；瘜W(xué)成分是中藥產(chǎn)生生物效應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，陳皮[4-6]中的主要活性成分橙皮苷[7]、川陳皮素[8]和橘皮素。本實驗采用HPLC 法同時測定其中橙皮苷、川陳皮素和橘皮素的含量，為陳皮配方顆粒質(zhì)量的有效控制提供參考方法和科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器十萬分之一電子天平(Mettle AE 240)；Agilent-1260型高效液相色譜儀，包括：四元泵，在線脫氣機，紫外檢測器等；KQ-500型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，500 W，40 kHz)。

1.2試藥中藥配方顆粒陳皮(0.5 g相當(dāng)于飲片6 g；四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司；批號：1604027、1603026、1609028)；橙皮苷、川陳皮素和橘皮素(自制，1H-NMR和13C-NMR、ESI-MS鑒定，含量采用HPLC峰面積歸一化法計算不低于98%)；乙腈(HPLC級，賽默飛世爾科技，批號152833)；水為純水(Millipore水純化儀自制)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1混合對照品溶液的制備分別精密稱取減壓干燥至恒重的對照品橙皮苷、川陳皮素和橘皮素適量，置同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得含橙皮苷、川陳皮素和橘皮素232.00、15.56、15.40 mg·L-1的混合對照品溶液。

2.2供試品溶液的制備取陳皮配方顆粒約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲(500 W，40 kHz)提取1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過0.45 μm濾膜，取續(xù)濾液作供試品溶液，即得。

2.3色譜條件色譜柱為Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈(A)-0.1%醋酸水(B)，二元梯度洗脫：0～6 min，15%A→20%A；6～16 min，20%A→34%A；16～20 min，34% A→52%A；20～28 min，52% A；28～30 min，52%A→100%A；30～32 min，100%A→15%A，流速:1.0 mL·min-1，波長切換(0～16 min，在283 nm波長下檢測橙皮苷；16～32 min，在330 nm波長下檢測川陳皮素和橘皮素)，柱溫:30 ℃；進樣量10 μL。色譜圖見圖1。

2.4定量限和檢測限因樣品中川陳皮素和橘皮素兩個成分的含量較低，故對其最低定量限和檢測限進行考察，按上述色譜條件用對照品溶液稀釋，結(jié)果當(dāng)S/N=10時，川陳皮素和橘皮素的定量限分別為：8.46、10.13 ng；當(dāng)S/N=3時，檢測限分別為2.36、3.04 ng。

2.5線性關(guān)系考察分別精密稱取對照品適量，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得含橙皮苷、川陳皮素和橘皮素120.18、9.883、4.72 mg·L-1的混合對照品溶液。分別進樣1、4、8、10、16、20 μL，按上述色譜條件測定，以對照品的量(ng)為橫坐標(biāo)(X)，色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。其線性范圍、標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)(n=6)結(jié)果見表1。

注：A為混合對照品溶液；B為供試品溶液；1為橙皮苷；2為川陳皮素；3為橘皮素

圖1 HPLC色譜圖

2.6精密度試驗精密吸取混合對照品(橙皮苷、川陳皮素和橘皮素232、15.56、15.4 mg·L-1)溶液10 μL，在上述相同色譜條件下重復(fù)進樣6次，測定峰面積。橙皮苷、川陳皮素和橘皮素的峰面積的RSD值分別為2.2%、1.9%、1.7%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7重復(fù)性試驗稱取陳皮配方顆粒(批號1604027)共5份，每份約0.5 g，精密稱定，按“2.2”項下制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算含量，結(jié)果橙皮苷的平均含量為1.182%，RSD為1.03%；川陳皮素的平均含量為0.072%，RSD為1.29%；橘皮素的平均含量為0.013%，RSD為1.61%；表明重復(fù)性良好。

2.8穩(wěn)定性試驗取陳皮配方顆粒約0.5 g，精密稱定，按“2.2”項下制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，分別在0、2、4、6、8、10、12 h注入液相色譜儀，按照上述色譜條件測定峰面積，橙皮苷、川陳皮素和橘皮素的峰面積的RSD分別為1.2%、1.1%、1.9%，結(jié)果表明供試品溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9準(zhǔn)確度試驗精密稱取已測含量(橙皮苷、川陳皮素和橘皮素的含量分別為1.182%、0.071 8%、0.013 1%)陳皮配方顆粒(批號1604027)的樣品共6份，每份約0.25 g，分別精密加入混合對照品溶液(橙皮苷、川陳皮素和橘皮素的濃度分別為2.955、0.179 5、0.032 75 g·L-1)1 mL，按“2.2”項下制備供試品溶液，再按“2.3”項下色譜條件測定，計算樣品含量及加樣回收率，結(jié)果為見表2。

2.10樣品含量測定精密稱取3批樣品各0.5 g，分別按“2.2”項下制備供試品溶液，“2.1”項下色譜條測定，計算含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果/(%,n=3)

3 討論

3.1檢測波長的選擇取橙皮苷、川陳皮素和橘皮素的對照品溶液置UV-1750紫外可見分光光度計下，于200～700 nm 波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果橙皮苷在283 nm處有最大吸收，川陳皮素和橘皮素綜合考慮在330 nm有較大吸收。結(jié)合色譜圖，將波長設(shè)定為0～16 min時283 nm，16～ 32 min時 330 nm。

3.2色譜條件的選擇樣品中待分離的3個成分極性不同，等度洗脫難以實現(xiàn)同時分離，故采用梯度洗脫的方法。根據(jù)參考文獻[9-10]，試驗考察了多種流動相系統(tǒng)(甲醇-0.1%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸水、甲醇-0.1%醋酸水、乙腈-0.1%醋酸水)結(jié)果顯示，乙腈-1%醋酸水能達到分離度的要求，分離時間合適，最后確定流動相為乙腈(A)-0.1%醋酸水(B)，二元梯度洗脫：0～6 min，15%A→20%A；6～16 min，20%A→34%A；16～20 min，34%A→52%A；20～28 min，52% A；28～30 min，52%A→100%A；30～32 min，100%A→15%A。

3.3提取條件的選擇本試驗考察了超聲提取法和水浴加熱回流法不同提取時間(0.5、1、1.5 h)的提取效果，結(jié)果表明，超聲提取和水浴加熱回流提取0.5 h(提取回收率在90%左右，且提取不完全)；兩法提取1、1.5 h，提取回收率均在98%。超聲提取操作簡便，故本實驗采用超聲提取的方法提取1 h。

3.4含量測定通過對川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院不同批次樣品中橙皮苷、川陳皮素和橘皮素進行含量測定，結(jié)果表明，同一廠家不同批次陳皮配方顆粒3個成分的含量基本相同。2015版《中國藥典》的規(guī)定，陳皮飲片中橙皮苷的含量不得低于3%；現(xiàn)檢測出陳皮配方顆粒中橙皮苷的含量為1.2%左右。可以為陳皮配方顆粒質(zhì)量的有效控制提供參考。

表2 準(zhǔn)確度試驗結(jié)果(n=6)

4 小結(jié)

陳皮配方顆粒失去原飲片的形態(tài)特征(如，外表面的顏色及油室、內(nèi)表面顏色，飲片質(zhì)地等)，同時也損失其顯微鑒別的特征(細(xì)胞、結(jié)晶的形態(tài)等)。因此，制定科學(xué)有效的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來控制產(chǎn)品質(zhì)量，成為配方顆粒安全有效的關(guān)鍵所在。本試驗采用HPLC法測定陳皮配方顆粒中橙皮苷、川陳皮素和橘皮素的含量，方法操作簡便、準(zhǔn)確可靠和重復(fù)性好，可快速準(zhǔn)確測定陳皮配方顆粒中橙皮苷、川陳皮素和橘皮素的含量。