姜煜琪

摘 要：目的：建立檢測原料藥格列喹酮殘留溶劑檢定方法并建立其檢驗方法學。方法：本次測定使用Agilent 7890A氣相色譜儀，J&W; Scientific DB-624毛細管色譜柱和J&W; Scientific HP-INNOWax毛細管色譜柱，氫火焰離子化檢測器，以頂空進樣和手動進樣法通過外標法測定格列喹酮中相關工藝殘留溶劑。結(jié)論：該方法應用合理、準確可靠，采用外標法分別進樣分析，精密度和重復性良好，可以應用于原料藥格列喹酮內(nèi)含的各類殘留溶劑的測定，并應用于殘留溶劑方面的質(zhì)量控制。

關鍵詞：格列喹酮，殘留溶劑，方法學

格列喹酮是高活性胰島β細胞激動劑，具有較強的選擇性，在第二代口服磺脲類降糖藥中應用廣泛。由于其絕大部分由膽汁代謝排除，故適用于肝、腎功能不全及具有相關代謝障礙的糖尿病患者，尤其適用于Ⅱ型糖尿病合并腎病的治療，藥效安全穩(wěn)定。[1]本次研究通過一系列實驗，建立了完整的格列喹酮殘留溶劑檢驗方法，實驗結(jié)果表明，本方法重復性好、準確可靠，適用于現(xiàn)有工藝過程中格列喹酮殘留溶劑的質(zhì)量控制。

一、儀器及實驗樣品

Agilent 7890A氣相色譜儀，Agient 7964E頂空進樣器（美國Agilent科技有限公司）；Ms204s/01化學分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

原料藥格列喹酮（某公司，T1708001，T1708002，T1709003），色譜純甲醇、乙醇、正丙醇、二甲苯、環(huán)己烷、N，N-二甲基甲酰胺，二甲基亞砜。

二、實驗過程與實驗結(jié)果

2015年版《中國藥典》（四部）附錄[2]中確定氣相色譜法為測定殘留溶劑的首選方法，本文選用氣相色譜法對工藝內(nèi)殘留溶劑進行測定。

（1）儀器硬件及條件選擇

為保證實驗的易操作性及各殘留成分檢測的準確性，本實驗選用J&WScientificDB-624;毛細管色譜柱（6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷固定液，30m×0.53mm，膜厚3μm，中等級性）測定甲醇、乙醇、正丙醇、環(huán)己烷，溶劑采用二甲基亞砜進行試驗，按毛細管柱頂空進樣系統(tǒng)程序升溫法如下條件進行測試程序：

選擇火焰離子化檢測器（FID）和J&WScientificHP-INNOWax;毛細管色譜柱（聚乙二醇固定液，30×0.53，膜厚1μm，強極性）測定二甲苯和N，N-二甲基甲酰胺，按毛細管柱手動進樣系統(tǒng)程序升溫法如下條件進行測試程序：

測得出峰時間：DB-624色譜柱中甲醇2.60min，乙醇3.48min，正丙醇4.05min，環(huán)己烷8.10min，溶劑二甲基亞砜15.58min。HP-INNOWax色譜柱中二甲苯11.3min-12.4min，N，N-二甲基甲酰胺15.25min，溶劑二甲基亞砜19.21min。上述各峰出峰時間合理易辨認，分離度符合實驗要求，溶劑不干擾待測溶劑出峰，適用于本次實驗的要求。

（2）樣品和對照品配制

以二甲基亞砜為溶劑配制甲醇、乙醇、正丙醇、環(huán)己烷100μg/mL的混合溶液，精密量取混合對照品A置頂空瓶中，密封瓶口，即得對照品溶液A。以二甲基亞砜為溶劑配制二甲苯100μg/mL，N，N-二甲基甲酰胺50μg/mL的混合溶液，即得對照品溶液B。

精密稱定本品適量，置50mL容量瓶中，加入適量二甲基亞砜胺振搖使溶解，冷卻后定容，配制成40mg/ml的樣品溶液，即得供試品溶液b。精密量取適量置于頂空瓶內(nèi)，密封瓶口，即得供試品溶液a。

（3）條件推定

①升溫程序：調(diào)整色譜柱DB-624柱箱升溫程序為：起始柱溫40℃，保持10min，以40℃的速率升至180℃，保持3分鐘。調(diào)整色譜柱HP-INNOWax柱箱升溫程序為：起始柱溫為60℃，以每分鐘10℃的速率升至180℃，保持3分鐘，再以每分鐘50℃的速率升至230℃，保持3分鐘。

②進樣口條件：原料藥格列喹酮在高溫下穩(wěn)定，故確定頂空進樣和手動進樣進樣口溫度均為200℃，分流比1：10避免色譜柱超載同時保證實驗穩(wěn)定性。

③檢測器條件：在200℃，250℃，300℃下分別測定樣品殘留溶劑，其中250℃以上溫度對實驗重復性沒有明顯影響，故確定檢測器溫度為250℃。

④頂空進樣器條件：采用通用條件85℃，加熱時間30min。經(jīng)測定不影響實驗測定，可以滿足實驗要求。

（4）方法學考察

①線性測試：按照“2.2”項下要求分別配制相對濃度為50%，80%，100%，150%，200%的對照品溶液，按照“2.3”項下推定條件分別進樣并記錄色譜圖，通過計算色譜圖甲醇、乙醇、正丙醇、環(huán)己烷、二甲苯、N，N-二甲基甲酰胺峰面積進而計算各組分線性常數(shù)。結(jié)果表明上述對照品組分在實驗范圍內(nèi)均成線性比例，各組分線性常數(shù)k>0.98，符合實驗要求。

②重復性測試：按照“2.2”項下要求配制對照品溶液，按照“2.3”項下推定條件連續(xù)進樣12針，分別計算12針中各對照品成分峰面積的RSD%。結(jié)果表明上述各對照品組分RSD%<1%，符合實驗要求。

③精密度測試：取原料藥樣品，每份樣品分為6份，按照“2.2”項下要求配制對照品溶液，將6份樣品各連續(xù)測定6次，同時安排兩名實驗員按照“2.3”項下推定條件進行平行實驗，分別計算兩批樣品中各對照品峰面積平均值、含量平均值及上述兩者的RSD%，再將兩名實驗員的得出各項結(jié)果進行比較計算，得出兩者計算結(jié)果的RSD%。結(jié)果表明上述兩批樣品中各組分的峰面積平均值、含量平均值及上述兩者的RSD%均符合限度要求，不同實驗員所得結(jié)果間的RSD%小于允許值，符合實驗要求。

（5）實際測定

取原料藥格列喹酮3批，按照“2.2”項下要求配制對照品溶液，按照“2.3”項下條件分別進樣，分別記錄色譜圖中各對照成分峰面積并計算其殘留量。結(jié)果表明3批樣品可以正常檢驗，各種對照品殘留量均符合規(guī)定要求。

三、總結(jié)

氣相色譜法是測定殘留溶劑的藥典首選方法，該方法具有易于操作、重復性好、精密度高等諸多特點。本文通過實驗參數(shù)篩選和方法學研究，確定了在現(xiàn)有工藝流程中各類可能殘留溶劑的檢驗參數(shù)，并通過實際實驗加以確認，證明了該方法具有準確、簡便、重復性好等優(yōu)點，現(xiàn)已應用于本原料藥的質(zhì)量控制實驗中。

參考文獻：

[1]格列喹酮.醫(yī)學百科[引用日期2018-7-10]

[2]國家藥典委員會.2015年版《中國藥典》（四部）附錄 中國醫(yī)藥科技出版社