王烈宏

子宮內(nèi)膜癌是臨床常見的惡性腫瘤之一, 是影響女性健康的重大疾病之一［1］。近些年, 對于子宮內(nèi)膜癌的研究仍在不斷深入, 子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機制以及腫瘤的誘導(dǎo)因子成為了研究該病的關(guān)鍵之處［2］。CD105是一種是內(nèi)皮細胞增生的最可靠的標志物［3,4］。它在癌灶內(nèi)及癌灶瘤周高表達, 提示其在新血管生成的血管優(yōu)先表達［5］。子宮內(nèi)膜癌新生的血管上強烈的表達, 因此常作為判斷腫瘤產(chǎn)生的一種特殊的標志物質(zhì)［6］。HIF-1α是一種轉(zhuǎn)錄因子, 在細胞缺氧時產(chǎn)生。研究顯示, 在一些惡性腫瘤以及組織癌變前過度表達, 并且該因子與腫瘤的轉(zhuǎn)移, 能量的代謝密切相關(guān)。本文通過SP法對相應(yīng)的抗原作為標記物標志物進行標記, 研究高原環(huán)境中CD105,F-8RAg和HIF-1α在子宮內(nèi)膜中的表達, 并對其價值進行評價。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2015年7月～到2016年9月收治的子宮內(nèi)膜癌患者48例作為子宮內(nèi)膜癌組, 根據(jù)臨床手術(shù)病理分期標準［7］, 患者中子宮內(nèi)膜癌Ⅰ期22例, Ⅱ期14例,Ⅲ期7例, Ⅳ期5例。另選本院同期收治的子宮內(nèi)膜不典型性增生11例(不典型性增生組)和正常子宮內(nèi)膜患者12例(正常組)。所有研究對象的標本均經(jīng)過病理學(xué)診斷確診。

1. 2 檢測方法 本次研究檢測方法采用SP法, 所需的SP法試劑盒由北京中山公司提供, CD105、F-8RAg以及HIF-1α抗體由廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司提供, 具體操作按照步驟：①烤片：溫度68℃, 時間20 min；②常規(guī)二甲苯脫蠟, 采用梯度酒精脫水法：二甲苯Ⅰ(20min)-二甲苯Ⅱ(20 min)-100%酒精Ⅰ(10 min)-100%酒精Ⅱ(10 min)-95%酒精(5 min)-80%酒精(5 min)-70%酒精(5 min)；③阻斷：滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3%過氧化氫(H2O2)37℃, 孵育10 min,磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗3次, 5 min/次；④抗原修復(fù)：在pH 6.0的0.01M枸櫞酸緩沖液中煮沸, 溫度95℃, 時間15～20 min, 然后自然冷卻20 min 以上, 再用冷水沖洗, 加快冷卻至室溫, PBS沖洗3次, 5 min/次；⑤健康羊血清工作液封閉：溫度37℃, 時間10 min, 傾去勿洗；⑥滴加一抗：4℃冰箱孵育過夜, PBS沖洗3次, 5 min/次(用PBS代替一抗作陰性對照), 滴加生物素標記二抗,在 37℃溫度下孵育30 min,PBS沖洗3次, 5 min/次；⑦滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液：在37℃溫度下, 孵育30 min, PBS沖洗3次,5 min/次；⑧二氨基聯(lián)苯胺(DAB)/ H2O2反應(yīng)染色：清水充分沖洗后, 用蘇木素復(fù)染, 常規(guī)脫水、透明、干燥、封片。PBS代替一抗作陰性對照, 陽性對照片由試劑公司提供。

1. 3 觀察指標及判定標準 MVD測定參照文獻［8］的微血管計數(shù)方法：首先, 在40倍顯微鏡下觀察全部視野, 在所有切片中, 選擇鄰近內(nèi)膜增生程度最高或內(nèi)膜癌侵犯最深的3個部位, 作為富含血管組織的“熱點”區(qū), 也是棕黃染色密度最高的區(qū)域, 然后, 在400倍顯微鏡下雙盲法計數(shù)微血管,其中呈現(xiàn)單個或聚集的被染為棕黃色或棕褐色的內(nèi)皮細胞,只要這些細胞和鄰近的微血管、腫瘤細胞或其他結(jié)締組織分開, 就把這些內(nèi)皮細胞作為1個血管計數(shù), 每次計數(shù)3個視野,取其均值作為MVD。管腔＞8個紅細胞直徑或管壁帶有肌層的大血管不作為新生血管計數(shù)。HIF-1α蛋白以胞漿或胞核內(nèi)有棕黃色細顆粒為陽性, 在400倍顯微鏡下對每張切片隨機選擇5個視野, 計數(shù)200個細胞視野, 共 1000個, 陽性細胞數(shù)＜1%為陰性“-”,陽性細胞數(shù)在1%～10%為弱陽性“+”,在11%～50%為中度陽性“++”, 若陽性細胞＞50%則為強陽性“+++”。

1. 4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示, 采用t檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman分析；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 三組CD105與F-8RAg標染的MVD結(jié)果比較 子宮內(nèi)膜癌組和不典型增生組中, 用CD105與用F-8RAg標染的MVD呈顯著正相關(guān)(r=0.653、0.597, P＜0.05), CD105標染的MVD明顯高于F-8RAg, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；而正常組中, CD105標染MVD與F-8RAg比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05)。見表 1。

2. 2 三組HIF-1α、CD105、F-8RAg陽性表達比較 子宮內(nèi)膜癌組HIF-1α、CD105、F-8RAg陽性表達率均顯著高于正常組和不典型性增生組, 且子宮內(nèi)膜癌組HIF-1α陽性表達率隨FIGO分期的升高而增加, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。見表 2。HIF-1α 與 CD105或 F-8RAg標染的MVD均顯著相關(guān)(r=0.772、0.621, P＜0.05), 但與CD105標染的MVD相關(guān)性更強。

表1 三組CD105與F-8RAg標染的MVD結(jié)果比較( ±s)

表1 三組CD105與F-8RAg標染的MVD結(jié)果比較( ±s)

注：與本組CD105比較, aP＜0.05

組別 例數(shù) CD105 F-8RAg t P正常組 12 4.13±2.42 4.52±2.41 -0.396 ＞0.05不典型性增生組 11 13.15±8.27 7.34±3.52a 2.144 ＜0.05子宮內(nèi)膜癌組 48 25.65±7.37 12.43±3.71a 11.100 ＜0.05

表2 三組HIF-1α、CD105、F-8RAg陽性表達比較［n(%)］

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是常見的惡性腫瘤之一, 與其他惡性腫瘤一樣, 具有較高的致死率, 成為影響女性患者的重大疾病之一。常規(guī)對于子宮內(nèi)膜癌的治療多采用外科手術(shù)與放療的方法［8］。對于惡性腫瘤來說, 治療后復(fù)發(fā)以及轉(zhuǎn)移的可能性極高。因此, 如何在治療后盡可能降低并發(fā)癥以及防止腫瘤的再次轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā), 成為了惡性腫瘤治療的關(guān)鍵。對于不典型增生發(fā)展成為惡性腫瘤的幾率較高, 作為子宮內(nèi)膜惡性腫瘤的前身, 對于其的干預(yù)與防治也作為腫瘤治療重要的一部分。

血管生成在惡性腫瘤的生長和發(fā)展中期重要作用, Akagi等［9］研究發(fā)現(xiàn), 在結(jié)、直腸腺瘤中, 有輕、重度不典型增生性腺癌發(fā)展過程中, 用CD105標記的微血管密度值如果逐漸升高, 則提示異常, 這有助于早期診斷疾病, 說明CD105是血管內(nèi)皮細胞增殖的標志之一, 與總內(nèi)皮細胞標志物CD31、CD34等不同的是, CD105僅在處于增殖狀態(tài)的腫瘤組織血管內(nèi)皮細胞中呈現(xiàn)強表達, 而在正常組織的血管中沒有表達。Zagzag等［10］提出, 人類腫瘤細胞組織中HIF-1α的升高與腫瘤血管生成及腫瘤進展有明顯相關(guān), 在不同的腫瘤組織中,致癌基因所導(dǎo)致的傳導(dǎo)通路的改變, 均通過HIF-1α表達升高促進腫瘤的生長, HIF-1α促進腫瘤生長的關(guān)鍵在于HIF-1α能促進腫瘤血管生成［11］。MVD是測量血管生成的定量指標, 研究中常用相應(yīng)因子標染得到的MVD結(jié)果測定腫瘤的發(fā)生情況以及與腫瘤發(fā)生、生長代謝的相關(guān)性。CD105是一種標志物, 它在子宮內(nèi)膜癌新生的血管上強烈的表達, 因此常作為判斷腫瘤產(chǎn)生的一種特殊的標志物質(zhì)。

HIF-1α是一種轉(zhuǎn)錄因子, 在細胞缺氧時產(chǎn)生, 眾多研究顯示［12-14］, HIF-1α在一些惡性腫瘤及組織癌變前呈現(xiàn)過度表達, 并且HIF-1α與腫瘤的轉(zhuǎn)移, 能量的代謝等密切相關(guān)。在許多組織的缺氧微環(huán)境中均測定到其含量, 而在正常的組織其數(shù)量存在并不出現(xiàn)任何異常。根據(jù)這一指標對惡性腫瘤發(fā)生情況進行判斷檢測。研究顯示, CD105、HIF-1α及F-8RAg可能共同參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。

分析文中數(shù)據(jù)可知, 子宮內(nèi)膜癌組和不典型增生組中,用CD105與用F-8RAg標染的MVD呈顯著正相關(guān)(r=0.653、0.597, P＜0.05), CD105標染的MVD明顯高于F-8RAg, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；而正常組中, CD105標染MVD與F-8RAg比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。HIF-1α與CD105或F-8RAg標染的MVD均顯著相關(guān)(r=0.772、0.621,P＜0.05), 但與CD105標染的MVD相關(guān)性更強。

綜上所述, CD015在惡性腫瘤中參與心血管的形成,HIF-1α對血管的形成具有一定的促進作用, CD105的MVD與HIF-1α的表達與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生密切相關(guān)。

［收稿日期：2018-02-27］