劉雁雨，魏京華，張 燕，袁善奎

(農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

1 前言

噁唑酰草胺是韓國化工技術(shù)研究院開發(fā)的芳氧苯氧丙酸酯類除草劑，其作用機(jī)理是通過抑制乙酰輔酶A羧化酶而發(fā)揮殺草作用。噁唑酰草胺對大多數(shù)一年生禾本科雜草均有較好的防除效果，但對水稻安全[1]。五氟磺草胺是美國陶農(nóng)科公司開發(fā)三唑并嘧啶磺酰胺類除草劑[2]，其作用機(jī)理是通過抑制乙酰乳酸合成酶達(dá)到除草效果。五氟磺草胺是目前稻田用除草劑中殺草譜最廣的品種，對水稻田常見的多種雜草，包括稗草、一年生莎草以及多種闊葉草均有良好的防效[3]。隨著噁唑酰草胺和五氟磺草胺的廣泛推廣使用，其強(qiáng)勁的市場表現(xiàn)日益顯現(xiàn)。

目前，有關(guān)噁唑酰草胺的分析方法主要是液相色譜法，該方法普遍存在耗時、靈敏度低等缺點(diǎn)[4-6]；現(xiàn)有的五氟磺草胺的分析方法主要是高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，但在分析中通常需要繁瑣的前處理過程[7-9]。有關(guān)同時檢測噁唑酰草胺和五氟磺草胺的方法尚未見報道。由于近年來有企業(yè)利用上述兩種有效成分各自優(yōu)勢開發(fā)混配制劑，試驗檢測及將來的環(huán)境殘留風(fēng)險監(jiān)測中需要建立一種同時測定水中兩種有效成分的分析方法。本實驗以水為供試物，通過優(yōu)化色譜條件、質(zhì)譜條件和提取溶劑，建立了超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-ESI-MS/MS)同時測定水中的五氟磺草胺和噁唑酰草胺，該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，能夠滿足水中噁唑酰草胺和五氟磺草胺殘留的同時快速準(zhǔn)確檢測的要求。

2 材料與方法

2.1 試驗材料 五氟磺草胺標(biāo)準(zhǔn)品(99.5%)陶氏益農(nóng)農(nóng)業(yè)科技(中國)有限公司；噁唑酰草胺標(biāo)準(zhǔn)品(98%)德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司；乙腈、二氯甲烷和乙酸乙酯(色譜純)賽默飛世爾科技有限公司；乙酸(優(yōu)級純)汕頭市西隴化工有限公司；氯化鈉(分析純)北京化工廠；流動相用水屈臣氏純凈水。

Waters Quattro-premier XE超高效液相色譜-串聯(lián)四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀(配ESI離子源和BEH C18色譜柱)美國Waters公司；QL-901 Vortex渦旋混合器海門市其林貝爾儀器制造有限公司；0.22μm有機(jī)相針式濾器天津市津騰實驗設(shè)備有限公司；20mL棕色玻璃瓶四川蜀玻有限責(zé)任公司。

2.2 試驗方法

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 準(zhǔn)確稱取五氟磺草胺標(biāo)準(zhǔn)品約0.02g(精確至0.000 2 g)于10mL容量瓶中，加入乙腈溶解定容，搖勻后靜置備用；準(zhǔn)確稱取噁唑酰草胺標(biāo)準(zhǔn)品約0.02g(精確至0.000 2 g)于10mL容量瓶中，加入乙腈溶解定容，搖勻后靜置備用。將上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙腈梯度稀釋得到1、0.8、0.5、0.2、0.1、0.05、0.02、0.01、0.005、0.001mg/L的五氟磺草胺和噁唑酰草胺的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.2 前處理方法 取5mL自來水水樣于棕色玻璃瓶中，加入5mL含0.2%乙酸的二氯甲烷溶液，手動振搖1min，全速渦旋1min，取下層有機(jī)相1mL氮吹至干，加入1mL乙腈渦旋混勻后過0.22μm濾膜后上機(jī)檢測。

2.2.3 色譜條件 色譜柱為：Acquity UPLC BEH C18柱(50 mm×2.1mm，1.7μm)；流動相A為水，流動相B為乙腈；采用二元梯度洗脫分離，梯度洗脫程序：0 min ～1.0 min，80% B；1.0 min～1.1 min，80%～70% B；1.1 min～2.5 min，70% B；2.5 min～2.6 min，70%～80% B；2.6 min～4.0 min，80% B。柱溫30℃；樣品室溫度20℃；流速為0.2mL/min；進(jìn)樣量：5μL。

2.2.4 質(zhì)譜條件 采用電噴霧離子源，正離子(ESI+)采集模式，多反應(yīng)監(jiān)測模式下檢測。毛細(xì)管電壓3.0 kV，離子源溫度120℃，脫溶劑氣溫度為350℃，脫溶劑氣流量600 L/h，錐孔反吹氣流量50 L/h。2種農(nóng)藥的監(jiān)測離子、錐孔電壓和碰撞電壓等質(zhì)譜參數(shù)(表1)。

表1 2種農(nóng)藥的串聯(lián)質(zhì)譜測定參數(shù)

*為定量離子

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件優(yōu)化 本實驗選常用的C18液相色譜柱，經(jīng)流動相種類選擇配比實驗，當(dāng)選用甲醇和水作流動相時，目標(biāo)物質(zhì)的峰形較差。通過查閱相關(guān)資料，建立了以乙腈和水作為流動相，梯度洗脫的色譜條件。在該色譜條件下，可以對五氟磺草胺和噁唑酰草胺進(jìn)行很好的分離，且峰形良好。2種農(nóng)藥在4min內(nèi)達(dá)到基線分離，保留時間分別為0.77 min和1.44min。優(yōu)化后的混合標(biāo)樣總離子流圖(A)、空白樣品總離子流圖(B)及添加樣品總離子流圖(C)，圖1所示。

圖1 五氟磺草胺和噁唑酰草胺的混合標(biāo)樣總離子流圖(A) ;空白樣品總離子流圖(B)；添加樣品總離子流圖(0.005mg/L)(C)

3.2 提取方法優(yōu)化 從水中提取五氟磺草胺和噁唑酰草胺，選擇了不同的萃取溶劑進(jìn)行比較，包括乙腈、二氯甲烷和乙酸乙酯。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用乙酸乙酯和二氯甲烷提取，能保證噁唑酰草胺的定量回收，效果令人滿意。但3種提取劑對五氟磺草胺的提取效率均太低。由于五氟磺草胺在水中的溶解度與pH值有關(guān)，數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)pH值介于5～9時，五氟磺草胺在水中的溶解度為5.7～1 460mg/L。因此，調(diào)節(jié)提取溶劑的酸度可能有助于改善提取效果。為此，試驗分別采用含0.2%乙酸的乙腈、二氯甲烷及乙酸乙酯做提取劑，按照2.2.2前處理方法進(jìn)行添加回收試驗。結(jié)果表明，酸化的乙腈對提取效果未明顯改善，2種目標(biāo)物質(zhì)的回收率仍然偏低，其中，五氟磺草胺的回收率最高僅為50.2%；而采用酸化的乙酸乙酯或酸化的二氯甲烷作提取劑時，不僅能夠保證噁唑酰草胺的定量回收，而且可以改善五氟磺草胺的提取效果。但是相比酸化的二氯甲烷作提取劑，酸化的乙酸乙酯對2種目標(biāo)物質(zhì)的回收率偏高，因此，試驗最終選擇含0.2%乙酸的二氯甲烷作提取劑。不同提取劑對目標(biāo)物的回收率結(jié)果(圖2)。

圖2 不同提取劑對目標(biāo)物質(zhì)回收率(A 0.005mg/L加標(biāo)，B 0.8mg/L 加標(biāo))

3.3 方法評價

3.3.1 線性關(guān)系和檢出限 在優(yōu)化的試驗條件下，對系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測，結(jié)果(表2)，噁唑酰草胺和五氟磺草胺在0.001～1mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，R2>0.993 4。以3倍信噪比(RSN=3)計，噁唑酰草胺和五氟磺草胺的檢出限均低于0.002mg/L；以10倍信噪比(RSN=10)計，噁唑酰草胺和五氟磺草胺的定量限為0.005mg/L。

表2 2種農(nóng)藥的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)(R2)和檢出限(LOD)

3.3.2 加標(biāo)回收率和精密度 取5mL自來水水樣于棕色玻璃瓶中，分別添加五氟磺草胺和噁唑酰草胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加水平分別為0.005和0.8mg/L，每個添加水平重復(fù)測定5次，按照優(yōu)化的試驗方法進(jìn)行添加回收率的測定。試驗結(jié)果(表3)，2種農(nóng)藥的添加回收率為89.7%～109.0%，RSD為7.1%～7.8%。

表3 五氟磺草胺和噁唑酰草胺在自來水中的添加回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

4 結(jié)論

本實驗建立了水中噁唑酰草胺和五氟磺草胺農(nóng)藥的UPLC-ESI-MS/MS檢測方法，平均回收率為89.7%～109.0%。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.1%～7.8%，該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，能夠在4 min內(nèi)完成檢測。符合農(nóng)藥殘留檢測的要求，適用于水樣的檢測。