沈恩超，黃中晶，趙志泓

(江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院甲乳外科，鎮(zhèn)江 212001)

三陰性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌的一種類型，是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)以及人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER-2)三者均為陰性的乳腺癌[1，2]。據(jù)報(bào)道統(tǒng)計(jì)TNBC在所有乳腺癌病例中占的比例約為20%。TNBC的組織學(xué)分級(jí)和惡性程度較高，侵襲性強(qiáng)，容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，因此具有高復(fù)發(fā)率、低生存率以及預(yù)后差的特點(diǎn)[3，4]。目前臨床對(duì)于TNBC的患者缺乏行之有效的治療方案，內(nèi)分泌治療以及靶向治療的效果也不夠理想，是臨床治療較為棘手的疾病。有研究認(rèn)為TNBC與P53、Ki67的表達(dá)情況之間存在密切的聯(lián)系，p53、Ki67的高表達(dá)是TNBC的特點(diǎn)之一[5，6]。本次研究收集2014年1月-2017年12月我院確診收治三陰性乳腺癌以及非三陰性乳腺癌患者的P53和Ki67的表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)分析研究，進(jìn)一步探討TNBC患者的P53和Ki67的表達(dá)情況以及臨床意義，為TNBC的治療提供更多的信息。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2014年1月-2017年12月我院確診收治的71例三陰性乳腺癌患者作為研究對(duì)象，并選取同期確診的71例非三陰性乳腺癌患者，所有患者均經(jīng)外科病理或者穿刺病理學(xué)確診組織病理學(xué)分級(jí)G2-G3，術(shù)前均未接受過(guò)放化療以及內(nèi)分泌治療。已排除患有精神疾病以及嚴(yán)重臟器功能異常的患者。三陰性乳腺癌組患者年齡29-58歲，平均年齡（43.8±6.5）歲，其中絕經(jīng)后期 16例，絕經(jīng)前期 55 例，腫瘤大?。?.9±1.1）cm，其中 TNM分期Ⅰ期19例，Ⅱ期30例，Ⅲ期22例。非三陰性乳腺癌組患者年齡28-57歲，平均年齡（43.5±6.3）歲，其中絕經(jīng)后期18例，絕經(jīng)前期53例，腫瘤大?。?.7±1.0）cm，其中TNM分期Ⅰ期18例，Ⅱ期32例，Ⅲ期21例。兩組患者的資料比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 對(duì)采集的所有標(biāo)本采用10%甲醛固定后進(jìn)行包埋切片，切片厚度約3μm，然后采用免疫組織化學(xué)EnVision二步法進(jìn)行檢測(cè)。先對(duì)標(biāo)本進(jìn)行脫蠟水化，然后在pH 6.0的枸櫞酸煮沸8-10min并保溫10min左右。待其冷卻后分別加入福建邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司的鼠抗人P53以及Ki67蛋白免疫組織化學(xué)單克隆抗體孵育過(guò)夜，次日采用PBS沖液沖洗后加入生物素標(biāo)記的二抗并進(jìn)行室溫孵育20min。接著通過(guò)二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色沖洗后以蘇木精復(fù)染并封片。以辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素代替一抗作為實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照，并設(shè)陽(yáng)性對(duì)照。由兩名資深的病理科醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行觀察切片并根據(jù)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)的說(shuō)明進(jìn)行結(jié)果判讀：P53陽(yáng)性細(xì)胞比例超過(guò)10%即視為陽(yáng)性（＋），否者為陰性（-）。Ki67陽(yáng)性細(xì)胞的比例低于14%即視為陰性（-），比例在 14%-25%為（＋），比例在 26%-50%為（＋＋），比例超過(guò) 50%為（＋＋＋）。

1.3 觀察指標(biāo) 比較P53和Ki67在兩組中的表達(dá)情況，分析三陰性乳腺癌（TNBC）的P53和Ki67表達(dá)水平與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P53和Ki67在三陰性乳腺癌、非三陰性乳腺癌中的表達(dá)情況 P53在三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌的陽(yáng)性表達(dá)率分別為64.8%（46/71）和28.2%（20/71），Ki67在三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌的陽(yáng)性表達(dá)率分別為76.1%（54/71）和32.4%（23/71）。三陰性乳腺癌組的P53和Ki67表達(dá)陽(yáng)性率均明顯高于非三陰性乳腺癌組，差異存在統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）。 見(jiàn)表 1。

2.2 TNBC患者的P53、Ki67表達(dá)情況與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 TNBC患者的P53表達(dá)陽(yáng)性與腫瘤的直徑、組織學(xué)分級(jí)、脈管內(nèi)癌浸潤(rùn)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)(P＜0.05)，與患者的年齡無(wú)關(guān)（P＞0.05)；而Ki67的表達(dá)陽(yáng)性則與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)有關(guān)(P＜0.05)，與患者的其他病理參數(shù)無(wú)關(guān)(P＞0.05)。見(jiàn)表2。3討論

表1 P53和Ki67在三陰性乳腺癌、非三陰性乳腺癌中的表達(dá)情況[n(%)]

表2 TNBC患者的P53、Ki67表達(dá)情況與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

TNBC在組織形態(tài)學(xué)以及免疫表型學(xué)方面與其他類型的乳腺癌存在較大的差異，其特殊的三陰性以及高度異質(zhì)性，導(dǎo)致內(nèi)分泌方面治療以及HER-2分子靶向治療效果不佳，臨床治療困難，預(yù)后較差，成為目前臨床研究的焦點(diǎn)所在[7]。有學(xué)者認(rèn)為P53以及Ki67基因的高表達(dá)是TNBC的特點(diǎn)之一，與患者的病情發(fā)展、疾病預(yù)后存在著緊密關(guān)系[8]。P53是一種腫瘤抑制基因包括野生型和突變型兩類，它對(duì)腫瘤的增殖分化能起到調(diào)控的作用，并且還參與腫瘤細(xì)胞的凋亡過(guò)程，在防止腫瘤發(fā)生、消除突變細(xì)胞方面擔(dān)任著重要角色。野生型的P53基因具有抑癌作用，其表達(dá)的產(chǎn)物半衰期較短，使用免疫組織化學(xué)染色法無(wú)法檢測(cè)到。而發(fā)生突變的P53基因則失去了抑癌的功能，還會(huì)促進(jìn)細(xì)胞惡化，延遲腫瘤細(xì)胞凋亡，其基因產(chǎn)生的產(chǎn)物半衰期明顯延長(zhǎng)，能夠被免疫組織化學(xué)染色法所檢測(cè)到[9，10]。研究發(fā)現(xiàn)近60%的乳腺癌患者P53基因有發(fā)生突變的風(fēng)險(xiǎn)，而發(fā)生P53基因突變的乳腺癌腫瘤組織侵襲性強(qiáng)，容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，而且對(duì)放化療治療不敏感，因此多數(shù)學(xué)者認(rèn)為P53基因的突變與乳腺癌患者預(yù)后不良相關(guān)[11]。Ki67是存在于增殖細(xì)胞中的一種核抗原，與細(xì)胞周期有著密切聯(lián)系，除了在細(xì)胞增殖周期中G0期沒(méi)有表達(dá)，其他時(shí)期均有明確表達(dá)，臨床多用其作為評(píng)估細(xì)胞增殖活性的標(biāo)志。目前臨床研究表明Ki67在乳腺癌、胃癌等多種惡性腫瘤中的表達(dá)水平均大幅度提高，提示Ki67與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸有關(guān)，對(duì)于判斷腫瘤的增殖狀態(tài)和危害程度有重要意義[12，13]。

而在本次研究發(fā)現(xiàn)TNBC患者的P53以及Ki67基因均呈現(xiàn)出高水平表達(dá)，與非三陰性乳腺癌相比表達(dá)陽(yáng)性明顯提高，而且P53表達(dá)陽(yáng)性與TNBC腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、脈管浸潤(rùn)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，Ki67表達(dá)陽(yáng)性與TNBC腫瘤組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，表明TNBC患者的P53以及Ki67高表達(dá)與腫瘤的惡性程度有關(guān)，與管小青等[14，15]的研究結(jié)論一致。相信隨著臨床研究的深入，通過(guò)對(duì)Ki67及P53蛋白在TNBC中表達(dá)以及TNBC的基因譜的進(jìn)一步探究，有可能會(huì)找到潛在的治療靶點(diǎn)[16-18]，為TNBC治療提供新的思路。由于時(shí)間限制，本次研究沒(méi)有比較P53以及Ki67高表達(dá)在三陰性乳腺癌患者預(yù)后方面的影響。

綜上，三陰性乳腺癌患者的P53和Ki67的表達(dá)陽(yáng)性情況均有所上調(diào)。P53和Ki67表達(dá)與腫瘤的惡性程度、增殖能力有關(guān)，對(duì)于患者的病情判斷具有一定的指導(dǎo)意義。