趙海忠，李良華，宋忠旭，孫 華，彭先文，梅書棋

（湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/動(dòng)物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430064）

豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的以豬只急性腸炎、腹瀉、嘔吐、脫水為主要特征的一種高度接觸性腸道傳染病[1]。2010年秋，PEDV變異株在免疫豬群突然出現(xiàn)，在我國多地暴發(fā)流行，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[2-3]。PED具有發(fā)病持續(xù)時(shí)間長和反復(fù)發(fā)病的特點(diǎn)，一年四季均可發(fā)病，但在氣溫較低的冬春季尤為嚴(yán)重[4-5]。筆者接診某規(guī)模豬場(chǎng)腹瀉病例，經(jīng)初步診斷為豬流行性腹瀉變異株，結(jié)合實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，采用針對(duì)性綜合防控措施，疫情得到有效控制，現(xiàn)將診治情況報(bào)道如下，供養(yǎng)殖實(shí)踐參考借鑒。

1 發(fā)病情況

2017年11 月，氣溫驟降，湖北某規(guī)?；i場(chǎng)分娩舍哺乳仔豬發(fā)生腹瀉，3個(gè)產(chǎn)仔單元共有哺乳仔豬768頭，發(fā)生腹瀉631頭，發(fā)病率為82.2%，豬只死亡206頭，病死率為32.6%。發(fā)生腹瀉哺乳仔豬主要在25日齡內(nèi)，部分1日齡仔豬發(fā)病，尤以初胎母豬所產(chǎn)仔豬腹瀉嚴(yán)重。發(fā)病仔豬精神高度沉郁，體溫升高40.2～40.8℃，部分豬只腹瀉前出現(xiàn)明顯嘔吐，食欲減退或廢絕，迅速發(fā)生水瀉，糞便灰白色或黃色，糞便中含有小的未消化的凝乳塊、惡臭，豬只迅速消瘦，被毛粗亂，2～5 d死亡（圖1）。對(duì)患豬肌注慶大霉素進(jìn)行治療，使用效果不理想。豬場(chǎng)按照免疫程序免疫豬瘟、偽狂犬病、流行性腹瀉等疫苗，未免疫大腸桿菌等細(xì)菌疫苗，產(chǎn)房環(huán)境密閉，欄舍潮濕，溫度較低，空氣污濁。

2 臨床剖檢

選取具有典型臨床癥狀腹瀉仔豬5頭進(jìn)行解剖，記錄病例剖檢主要臟器病變特征。胃底部潰瘍，在胃的內(nèi)部充滿大量的未消化的凝乳塊，腸系膜充血、壞死、淋巴結(jié)腫大，并且小腸有不同程度的萎縮，小腸壁變薄，腸內(nèi)充滿白色、黃綠色的凝乳塊，腸管已呈現(xiàn)半透明狀，腸內(nèi)絨毛脫落嚴(yán)重（圖2）。

圖1 仔豬嘔吐、腹瀉、極度消瘦

圖2 胃底潰瘍，腸系膜淋巴結(jié)壞死，小腸脹氣、變薄

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 RT-PCR檢測(cè)

采集13頭臨床腹瀉仔豬糞便，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室腹瀉相關(guān)病原檢測(cè)。根據(jù)GenBank收錄的PEDV變異株的M基因、TGEV（傳染性胃腸炎病毒）的N基因、PoRV（輪狀病毒）的VP7基因cDNA序列設(shè)計(jì)特異性引物[6]，引物由寶生物工程（大連）有限公司合成。采用RT-PCR方法檢測(cè)PEDV、TGEV、PoRV。RTPCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果見圖3，檢測(cè)結(jié)果顯示，13份樣品中9份擴(kuò)增出PEDV的M基因668 bp的片段，未擴(kuò)增出TGEV的N基因528 bp的片段和PoRV的VP7基因333 bp的片段，表明檢出PEDV為變異株，其陽性比例為69.2%，TGEV、PoRV均為陰性。

圖3PEDV、TGEV、PoRV RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

3.2 細(xì)菌分離

將采集的13份糞便樣品接種血清瓊脂平板進(jìn)行病原菌分離培養(yǎng)，觀察細(xì)菌生長的菌落特點(diǎn)，涂片，革蘭氏染色、鏡檢。13份樣品均分離出大腸桿菌，培養(yǎng)結(jié)果見圖4，革蘭氏染色陰性。取細(xì)菌培養(yǎng)液，按0.5 mL/只皮下注射18～22 g SPF級(jí)昆明小鼠10只。連續(xù)觀察7 d，SPF小鼠3/10死亡，表明分離到的細(xì)菌具有致病性，但致病性較弱。

圖4 大腸桿菌培養(yǎng)結(jié)果

4 診斷結(jié)果

綜合發(fā)病情況、臨床剖檢、RT-PCR檢測(cè)、細(xì)菌分離，確診為PEDV變異毒株引起的哺乳仔豬流行性腹瀉。

5 綜合防控

5.1 免疫接種

公母豬全群緊急普免變異株T-P二聯(lián)滅活苗[豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（WH-1株+AJ1102株）]2次，間隔1周，每次4 mL；2～3日齡哺乳仔豬同步免疫1 mL。優(yōu)化PED常規(guī)免疫程序，“普免”和“跟胎免疫”相結(jié)合，10月份季節(jié)性普免T-P二聯(lián)活疫苗[豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（WH-1R株+AJ1102-R株）]1頭份，間隔3周后普免T-P二聯(lián)滅活苗2 mL；產(chǎn)前5周、2周分別免疫T-P二聯(lián)活疫苗1頭份、T-P二聯(lián)滅活疫苗2 mL。滅活疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生黏膜免疫抗體IgA和中和抗體IgG，阻止病毒感染和臨床癥狀發(fā)生；活疫苗能夠誘導(dǎo)細(xì)胞免疫殺滅PEDV，從而將PEDV從豬體清除?；蠲缗c滅活苗聯(lián)用效果較好[7]。

5.2 生物安全措施

發(fā)病產(chǎn)仔單元均獨(dú)立封閉隔離，杜絕人員、器具交流，避免交叉感染。及時(shí)淘汰7日齡內(nèi)整窩腹瀉仔豬，10日齡以上腹瀉仔豬提前斷奶，減少環(huán)境病毒量，切斷水平循環(huán)感染。加強(qiáng)消毒，舍內(nèi)用0.5%含氯制劑每天噴霧消毒，并配合冰醋酸自然熏蒸。場(chǎng)區(qū)大環(huán)境每日消毒1次。發(fā)病單元清空后，產(chǎn)床漏縫板、料槽使用燒堿浸泡，用70℃左右熱水沖洗，干燥后安裝到位再用甲醛熏蒸，空欄7 d以上。

5.3 飼養(yǎng)管理精細(xì)化

首先改善產(chǎn)房環(huán)境，加強(qiáng)防寒保暖，封閉冷風(fēng)入口，杜絕賊風(fēng)。增設(shè)加溫爐，室內(nèi)溫度維持在26～28℃。產(chǎn)仔前預(yù)熱保溫箱，產(chǎn)后3 d保溫箱溫度維持在32～33℃。注意通風(fēng)換氣，保持產(chǎn)房相對(duì)干燥，濕度控制在70%以下。發(fā)現(xiàn)腹瀉仔豬，及時(shí)對(duì)糞便采用碳酸鈣干燥劑（仔豬爽身粉）處理。搞好產(chǎn)床清潔衛(wèi)生，及時(shí)清理腹瀉糞便并無害化處理[8]。其次搞好哺乳護(hù)理，提供優(yōu)質(zhì)全價(jià)飼料，保持臨產(chǎn)母豬良好體況，保證母豬產(chǎn)后乳汁充足；用溫?zé)?.1%高錳酸鉀水擦洗產(chǎn)仔母豬乳頭，輔助仔豬及時(shí)吃夠初乳，提高仔豬免疫力。最后做好豬群管理，實(shí)行全進(jìn)全出和批次化生產(chǎn)，排毒期尚未結(jié)束的母豬（產(chǎn)前4周內(nèi)腹瀉）和頭胎豬隔離到專用產(chǎn)仔單元產(chǎn)仔。

5.4 對(duì)癥治療

加強(qiáng)巡查力度，做到即時(shí)發(fā)現(xiàn)即時(shí)治療；腹瀉仔豬使用自制口服液（30 mL慶大霉素+4袋獸用蒙脫石散+20 mL 50%葡萄糖），1周齡內(nèi)仔豬2 mL，1～2 周齡仔豬 3 mL，2～3 周齡仔豬 4 mL，3 周齡及以上仔豬5 mL，上、下午各1次，連用3～5 d；仔豬腹瀉停止后再給藥1次，以鞏固療效；同窩未發(fā)生腹瀉的仔豬預(yù)防用藥1次，劑量減半；嚴(yán)重脫水腹瀉仔豬及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)液（復(fù)合維生素B 1 mL+恩諾沙星1～3 mL+5%葡萄糖鹽水20～60 mL）。對(duì)恢復(fù)階段仔豬料中添加益生菌、弱仔寶、奶粉等，修復(fù)胃腸道，提高營養(yǎng)水平，增加采食量，促進(jìn)仔豬代償性生長[9]。做好妊娠母豬藥物保健工作，可在產(chǎn)前、產(chǎn)后7 d，每噸飼料分別添加50%復(fù)方黃芪多糖250 g+電解質(zhì)多維1 000 g。

采取綜合防控措施效果顯示，2周內(nèi)豬場(chǎng)腹瀉疫情基本得到控制，3周后豬場(chǎng)腹瀉停止，豬群恢復(fù)健康。

6 分析與討論

6.1 接種疫苗是預(yù)防PED有效防控措施之一。免疫后能否產(chǎn)生高水平保護(hù)性IgA抗體是PED免疫成功的關(guān)鍵[8]。種豬群免疫PED變異株商品化疫苗，公母豬、保育豬、肥育豬臨床均未發(fā)生明顯腹瀉病例，臨床保護(hù)效果較好。盡管免疫未能對(duì)哺乳仔豬提供完全保護(hù)，32.6%的病死率與上年同期未免疫PED變異株疫苗時(shí)89.7%的病死率相比大幅度降低，表明疫苗免疫顯著降低了哺乳仔豬病死率。

6.2 環(huán)境誘因會(huì)導(dǎo)致豬流行性腹瀉暴發(fā)。產(chǎn)房管理不到位，衛(wèi)生環(huán)境差、潮濕、通風(fēng)不良；保溫措施不嚴(yán)謹(jǐn)，溫度波動(dòng)大等，形成環(huán)境應(yīng)激，母豬腸道大腸桿菌與大量毒素通過胎盤或乳汁傳給仔豬，致仔豬免疫力下降，誘發(fā)豬流行性腹瀉。誘發(fā)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

6.3 發(fā)生PED目前尚無特效治療藥物，防控PED關(guān)鍵在于建立預(yù)警機(jī)制和嚴(yán)格執(zhí)行生物安全。對(duì)種豬群定期進(jìn)行病原檢測(cè)和特異性中和抗體檢測(cè)，從源頭監(jiān)測(cè)豬群帶毒、排毒以及散毒情況，根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果結(jié)合本場(chǎng)實(shí)際，選擇同型PED變異株疫苗，采取“普免”+“跟胎免疫”免疫程序，結(jié)合科學(xué)精細(xì)管理，藥物輔助保健治療等綜合措施，防范于未然。