陳洪波

摘 要：本實(shí)驗(yàn)研究克林霉素磷酸酯凝膠的制備方法并建立反相高效液相色譜法測(cè)定克林霉素磷酸酯凝膠中克林霉素磷酸酯的含量。方法：采用安捷倫十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（218mm×4.6mm，5μm），0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20），檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃?？肆置顾亓姿狨ピ?0～50ug·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。克林霉素磷酸酯平均回收率為99.3%。結(jié)論：本制劑穩(wěn)定、可靠，測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：克林霉素磷酸酯；制備；質(zhì)量

克林霉素磷酸酯化學(xué)名稱為（2s-反式）-6-（1-甲基-4-丙基-2-吡咯烷碳酰氨基）-1-硫代-甲基-7-氯-6，7，8-三脫氧-L-蘇式-α-D-半乳糖吡喃糖苷-2-二氫磷酸酯?？肆置顾亓姿狨榛瘜W(xué)合成的克林霉素衍生物，它在體外無抗菌活性，進(jìn)入機(jī)體迅速水解為克林霉素發(fā)揮抗菌活性?？肆置顾亓姿狨ゾ哂幸种起畀彵釛U菌、顆粒丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等的生長(zhǎng)作用。本實(shí)驗(yàn)研究克林霉素磷酸酯凝膠的制備方法并建立反相高效液相色譜法測(cè)定克林霉素磷酸酯凝膠中克林霉素磷酸酯的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：電子天平FA1004型（南京華欣分析儀器制造有限公司）；YL9100液相色譜儀（汕頭市科毅儀器設(shè)備有限公司）；MPC-K6s加熱制冷型恒溫水浴油?。ū本┵惷浪純x器設(shè)備有限公司）；德國(guó)SIGMA小型臺(tái)式高速（冷凍）離心機(jī)（北京博勱行儀器有限公司）；15升超聲波清洗器US-15A（中科儀（北京）儀器有限公司）。

1.2 色譜柱：安捷倫 十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（218mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對(duì)照品：克林霉素磷酸酯 購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑：甲醇、乙腈為色譜純；水為純化水，其它試劑均為分析純。

1.5 輔料：卡波姆（江蘇省海安石油化工廠）、脂肪醇聚氧乙烯醚（江蘇省海安石油化工廠）、依地酸二鈉（江蘇采薇生物科技有限公司）。

2 制備方法

2.1 處方

克林霉素磷酸酯、卡波姆、三乙醇胺、甘油、乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、亞硫酸氫鈉、依地酸二鈉。

2.2 制備

將亞硫酸氫鈉、依地酸二鈉溶于水中，攪拌下加入卡波姆，克林霉素磷酸酯甘油、乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、亞硫酸氫鈉等，攪拌均勻得藥物溶液，分裝，即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為透明凝膠。符合《中國(guó)藥典》2015年版對(duì)凝膠的要求。

3.2 含量測(cè)定

3.2.1 流動(dòng)相的選擇。0.1mol/L磷酸二氫鉀-甲醇-乙腈（70：10：20）， 0.2%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)pH至5.3）-乙腈（65∶35），甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59），0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20）；為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20）為流動(dòng)相。依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。流動(dòng)相：0.1mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20），檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按克林霉素磷酸酯峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

3.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取克林霉素磷酸酯對(duì)照品適量，置容量瓶中，加流動(dòng)相制成每1mL含20ug的溶液，即得。

3.2.3 供試品溶液的制備

取適量供試品精密稱定，用流動(dòng)相溶解至10ml容量瓶中并稀釋定容，搖勻后，離心5分鐘，取上清液，即得。

3.2.4 專屬性試驗(yàn)

依照處方取卡波姆、三乙醇胺、甘油、乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、亞硫酸氫鈉、依地酸二鈉等，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，照3.2.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在克林霉素磷酸酯出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

3.2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取克林霉素磷酸酯對(duì)照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為20ug·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.58%，表明本方法精密度良好。

3.2.6 對(duì)照品的線性考察

精密稱取克林霉素磷酸酯對(duì)照品10mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照3.2.2項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，克林霉素磷酸酯在10～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的克林霉素磷酸酯凝膠樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.83%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

3.2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的克林霉素磷酸酯對(duì)照品，上述方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.1%，RSD=0.89%，結(jié)果表明樣品加樣回收率良好。

3.3 微生物限度檢查

按照《中國(guó)藥典》2015年版附錄所載方法測(cè)定，結(jié)果符合規(guī)定。

4 討論

本制劑穩(wěn)定、可靠，符合中國(guó)藥典相關(guān)規(guī)定。此測(cè)定方法可用于克林霉素磷酸酯凝膠中克林霉素磷酸酯的含量測(cè)定。依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定克林霉素磷酸酯凝膠三批樣品中克林霉素磷酸酯的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為標(biāo)示量的100.1%、99.6%、99.6%。克林霉素磷酸酯凝膠中克林霉素磷酸酯的含量為標(biāo)示量的95%-105%。

參考文獻(xiàn)

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[5]袁耀佐，張玫.反相高效液相色譜法測(cè)定注射用克林霉素磷酸酯的含量[J].江蘇藥學(xué)與臨床研究，2001（01）.