陳紅耀，王榮國，宋曉飛，皮麗宏

(河北省人民醫(yī)院耳鼻咽喉科，石家莊 050051)

鼻咽癌起源于鼻咽黏膜上皮和腺體，是頭頸部腫瘤中惡性程度較高的腫瘤之一，有明顯的種族差異，我國的發(fā)病率較高，南部地區(qū)明顯高于北部地區(qū)，以40～50歲的中年男性患者居多[1]。鼻咽癌早期癥狀不典型，臨床上容易延誤診斷，嚴重威脅患者的身體健康[2-3]。雖然醫(yī)療技術(shù)迅速發(fā)展，但鼻咽癌的治療效果仍不理想，尤其近年來青年人發(fā)病率增加，女性發(fā)病率也增加，對鼻咽癌的診治提出了新的要求。目前用于鼻咽癌檢測的腫瘤指標特異度及靈敏度均較低，因此尋找新的腫瘤特異性蛋白及因子十分必要。膜聯(lián)蛋白A1(ANXA1)是膜聯(lián)蛋白家族中的一員，與多種惡性腫瘤關(guān)系密切，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4-5]。但是關(guān)于ANXA1在鼻咽癌中的具體作用機制還不清楚，本研究通過檢測鼻咽癌患者外周血及腫瘤組織ANXA1的水平變化，深入探討其作用機制及變化規(guī)律，為鼻咽癌的診療提供臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月至2017年3月于本院行放射治療的初診鼻咽癌患者80例納入放療組，該組患者以前均未接受過抗癌治療，均經(jīng)過CT、磁共振及組織活檢病理結(jié)果確診，其中男51例，女29例，年齡35～64歲，平均(48.3±9.8)歲。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC，1997)和美國癌癥分期聯(lián)合委員會(AJCC，2002)第5版的方案進行分期，其中0期16例、Ⅰ期29例、Ⅱ期22例、Ⅲ期8例、Ⅳ期5例。放療后復(fù)發(fā)的患者30例納入復(fù)發(fā)組，其中男19例，女11例，年齡37～59歲，平均(47.8±10.4)歲。選擇同期性別、年齡相匹配的健康體檢者50例納入對照組，其中男22例，女28例，年齡35～65歲，平均(48.6±10.5)歲。所有入選者均自愿參與本研究，并簽署知情同意書，本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準。

1.2儀器與試劑 德國BNⅡ System全自動特定蛋白分析儀，ANXA1試劑盒、腫瘤壞死因子(TNF)-α 酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒、白細胞介素(IL)-10 ELISA試劑盒均購自美國R&D公司，瑞士HAMILTON酶免之星全自動免疫分析儀。

1.3方法

1.3.1標本采集 所有入選者清晨空腹抽取靜脈血5 mL，室溫靜置30 min后，3 500 r/min離心15 min，分離血清。放療組在放療前1 d、放療后1 d、放療后1個月各采血1次,對照組采血1次。復(fù)發(fā)組在確診復(fù)發(fā)后采取下一步治療以前采血1次。

1.3.2血清C反應(yīng)蛋白(CRP)水平的檢測 血清標本采用德國BNⅡ System全自動特定蛋白分析儀檢測。質(zhì)控品、定標品為儀器廠家配套產(chǎn)品。

1.3.3ANXA1、TNF-α、IL-10水平的檢測 采用雙抗夾心法檢測ANXA1、TNF-α、IL-10在外周血中的表達水平，使用前從冰箱取出標本在室溫下靜置30 min，所有液體組分使用前充分混勻，操作過程嚴格依據(jù)相應(yīng)試劑盒的說明書進行。在450 nm波長處，采用酶免之星全自動酶標儀檢測讀數(shù)。ANXA1檢測范圍為6～220 μg/L，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。樣本線性回歸與預(yù)期水平相關(guān)系數(shù)(r)=0.99。TNF-α檢測范圍為20～400 ng/L，批內(nèi)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于9%和11%，樣品線性回歸與預(yù)期水平r應(yīng)為0.95以上。IL-10檢測范圍為50～1 600 pg/mL，批內(nèi)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于7%和9%，樣品線性回歸與預(yù)期水平r應(yīng)在0.97以上。

2 結(jié) 果

2.13組研究對象外周血ANXA1、TNF-α、IL-10水平的比較 放療組患者放療前外周血CRP、TNF-α的水平明顯高于放療后1 d和放療后1個月，放療組患者放療后1 d外周血CRP、TNF-α水平明顯高于放療后1個月，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；放療組患者放療前外周血ANXA1、IL-10的水平明顯低于放療后1 d和放療后1個月，放療組患者放療后 1 d外周血ANXA1、IL-10水平明顯低于放療后1個月，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。復(fù)發(fā)組患者外周血CRP、TNF-α的水平明顯高于放療組放療前的水平，外周血ANXA1、IL-10的水平明顯低于放療前的水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2放療組不同分期的鼻咽癌患者外周血各項指標水平比較 隨著分期的逐漸加重，外周血CRP、TNF-α水平明顯升高，ANXA1、IL-10的水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3放療組外周血ANXA1與其他指標的關(guān)系 Pearson相關(guān)分析顯示，放療組外周血ANXA1與IL-10表達呈顯著正相關(guān)(r=0.451 7，P<0.05)，與血清CRP、TNF-α水平呈顯著負相關(guān)(r=-0.397 6，-0.412 7，P<0.05)。

表1 3組研究對象外周血ANXA1、TNF-α、IL-10水平的比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與放療后1個月比較，#P<0.05；與放療后 1 d比較，△P<0.05;與放療前比較，▲P<0.05

表2 放療組不同分期的鼻咽癌患者外周血各項指標水平比較

注：與0期比較，*P<0.05；與Ⅰ期比較，#P<0.05；與Ⅱ期比較，△P<0.05;與Ⅲ期比較，▲P<0.05

3 討 論

我國鼻咽癌發(fā)病率較高，位置隱蔽，病程進展較快。鼻咽癌的病因是多種因素造成的，如遺傳因素、環(huán)境因素、EB病毒感染等。近年來，雖然鼻咽癌手術(shù)和放療技術(shù)有了一定的進步，但鼻咽癌的復(fù)發(fā)率及病死率依然沒有明顯改善。與此同時鼻咽癌的發(fā)病率略有升高，發(fā)病年齡呈年輕化趨勢[6-7]。只有找到靈敏度與特異度均較高的鼻咽癌相關(guān)指標，才能對其進行早期診斷和早期治療，確保手術(shù)和放療的效果，改善患者預(yù)后。目前常用的一些指標不能早期提示鼻咽癌的發(fā)生，而ANXA1在多種惡性腫瘤患者體內(nèi)異常表達，本研究就ANXA1在鼻咽癌患者中的變化情況及其與其他血清學(xué)指標的關(guān)系進行了研究討論。

ANXA1位于人9q12-q21.2，包含13個外顯子和12個內(nèi)含子，編碼346個氨基酸。ANXA1隸屬于膜聯(lián)蛋白家族，廣泛表達于動植物體內(nèi)各種組織和細胞表面，依賴鈣離子的結(jié)合，并能與磷脂可逆結(jié)合才能發(fā)揮調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、變異、凋亡等一系列作用。ANXA1具有很強的抗炎、抗感染功能；通過表皮生長因子受體(EGFR)、激活蛋白激酶C(PKC)途徑或是直接磷酸化，促進細胞的增殖、趨化、新生血管形成；通過加強過氧化氫(H2O2)的過氧化功能促進細胞凋亡、組織壞死[8]。有研究報道，ANXA1通過磷酸化促進細胞癌變及腫瘤細胞增殖，抑制抑癌基因分化，通過與鈣離子和磷脂結(jié)合降低腫瘤細胞對藥物的敏感性，促進腫瘤轉(zhuǎn)移[9-10]。本研究應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測了研究對象外周血ANXA1水平，結(jié)果顯示ANXA1在鼻咽癌患者放療前的表達水平明顯降低，隨著放療的進行，ANXA1水平逐漸回升，放療后1個月時基本恢復(fù)到正常水平，與對照組中ANXA1的水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明ANXA1在腫瘤發(fā)生時表達下降，隨著腫瘤的切除或腫瘤細胞的殺滅，其表達水平逐漸升高，提示ANXA1與鼻咽癌的進展程度密切相關(guān)。同時本研究還發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)組患者血清ANXA1水平下降更多，明顯低于鼻咽癌患者放療前的水平，提示ANXA1與鼻咽癌的復(fù)發(fā)關(guān)系密切。

為進一步探討外周血中ANXA1水平與鼻咽癌的進展程度、有無淋巴結(jié)及遠處轉(zhuǎn)移的關(guān)系，本研究將放療組根據(jù)分期情況進行分組，結(jié)果顯示，隨著分期的變化，ANXA1水平逐漸下降，說明ANXA1水平在鼻咽癌出現(xiàn)周圍組織浸潤、淋巴結(jié)及遠處轉(zhuǎn)移時進一步降低，提示ANXA1的水平與鼻咽癌的浸潤程度、惡化與轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，檢測ANXA1水平可以提示鼻咽癌患者目前腫瘤的發(fā)展狀態(tài)，預(yù)測腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

炎癥的局部表現(xiàn)和全身反應(yīng)的臨床特征是紅、腫、熱、痛和功能障礙。紅、熱是由于局部血管擴張，血流加快。腫是局部炎癥性充血，血液成分滲出。痛是由于滲出物壓迫和某些炎癥介質(zhì)直接作用于神經(jīng)末梢所致。150年前，VIRCHOW最初發(fā)現(xiàn)慢性炎癥與癌變之間存在關(guān)聯(lián)。研究發(fā)現(xiàn)超過25%的癌癥都是由于慢性感染或其他類型的慢性炎癥引起[11]。慢性炎癥通過多種機制致癌，其包括誘導(dǎo)基因突變、促進血管生成、改變基因狀態(tài)和促進細胞增殖等方面。而這些機制主要通過一些炎性因子作為媒介起到致癌作用。

本研究還檢測了CRP、TNF-α、IL-10等炎癥指標的水平，發(fā)現(xiàn)放療組患者術(shù)前外周血CRP、TNF-α的水平明顯升高，IL-10的水平明顯降低，隨著放療的進行，CRP、TNF-α的水平明顯下降，IL-10的水平明顯升高，于放療后1個月，三者的水平與對照組的水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，尤其是復(fù)發(fā)組患者外周血CRP、TNF-α的水平明顯高于放療組放療前的水平，IL-10的水平明顯低于放療前的水平，提示鼻咽癌的進展過程也是炎性反應(yīng)的過程，通過炎性因子的變化可以間接反映腫瘤的變化情況，提示腫瘤的發(fā)生和復(fù)發(fā)。本研究還發(fā)現(xiàn)，放療組不同分期的鼻咽癌患者中外周血CRP、TNF-α水平隨著分期的逐漸加重明顯升高，IL-10水平明顯降低，進一步驗證了炎性因子的水平變化趨勢可以間接代表鼻咽癌的浸潤程度、有無淋巴結(jié)及遠處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，外周血ANXA1水平與IL-10表達呈顯著正相關(guān)，與血清CRP、TNF-α水平表達呈顯著負相關(guān)。提示ANXA1與炎癥指標聯(lián)合應(yīng)用對掌握鼻咽癌患者的病情變化更有意義，同時也提示ANXA1可能通過促進炎性反應(yīng)干預(yù)了腫瘤的進程。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌患者的外周血ANXA1水平隨腫瘤的發(fā)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移逐漸下降，且復(fù)發(fā)患者ANXA1水平下降更明顯，說明ANXA1與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)關(guān)系密切，監(jiān)測外周血ANXA1水平的變化對了解鼻咽癌患者的病情變化及評估十分重要。外周血ANXA1可作為鼻咽癌的隨訪指標，對臨床治療有一定的指導(dǎo)價值。