宋俊華，李國平，武 鵬，陳鐵春

(農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(huì)(CIPAC)是一個(gè)非盈利性質(zhì)的非政府國際組織，其主要職責(zé)是組織制定農(nóng)藥原藥和制劑的分析方法及物理化學(xué)參數(shù)測定方法，促進(jìn)農(nóng)藥質(zhì)量分析方法在國際間的協(xié)調(diào)一致，為FAO/WHO農(nóng)藥產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)提供方法支持等，也是農(nóng)藥國際貿(mào)易發(fā)生爭議時(shí)常用的仲裁方法。

為充分保證方法的可靠性和適用性，在正式公布前，CIPAC方法須按照規(guī)定的要求及流程在全球范圍內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間的協(xié)同驗(yàn)證，本文對此進(jìn)行了詳細(xì)介紹，供相關(guān)部門及企業(yè)參考。

1 總體要求

在CIPAC相關(guān)準(zhǔn)則中，將“協(xié)同驗(yàn)證”定義為：每個(gè)參加的實(shí)驗(yàn)室用經(jīng)定義好的方法對同樣的分析物進(jìn)行分析，并對分析結(jié)果進(jìn)行評價(jià)的實(shí)驗(yàn)室間研究項(xiàng)目。

申請CIPAC協(xié)同驗(yàn)證的方法必須滿足下列三個(gè)特性：(1)可用性，即方法需適用于一定范圍內(nèi)、不同濃度的產(chǎn)品分析，且具有同樣的選擇性和靈敏度；(2)可靠性，即具有可接受范圍內(nèi)的準(zhǔn)確度和精密度(同時(shí)包含重復(fù)性和再現(xiàn)性)；(3)可操作性，即要求方法具有時(shí)間快、費(fèi)用低的特點(diǎn)，且應(yīng)使用易得到的試劑和設(shè)備，并對操作者安全。申請協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)的方法可以由成員國或生產(chǎn)企業(yè)提出。在進(jìn)行協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)前，需對方法的特異性、回收率、精密度(實(shí)驗(yàn)室內(nèi))及耐用性等進(jìn)行確認(rèn)。方法需按照CIPAC要求的格式撰寫。

因協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)的主要目的是測試分析方法而不是實(shí)驗(yàn)室，因此對參與實(shí)驗(yàn)室無質(zhì)量管理體系方面的具體要求，如是否為GLP實(shí)驗(yàn)室等，非GLP實(shí)驗(yàn)室也可參加CIPAC組織的協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)。協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果主要采用ISO 5725-(1986)的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果報(bào)CIPAC委員會(huì)評審?fù)ㄟ^后，一般先作為CIPAC臨時(shí)方法公布，一年后轉(zhuǎn)為正式方法發(fā)布。

2 協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)申請流程

進(jìn)行CIPAC協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)的流程一般如下：成立工作組或指定項(xiàng)目協(xié)調(diào)人(study coordinator)—選擇分析方法—建立方法參數(shù)—小范圍協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)—小范圍協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果評價(jià)—確定參加大范圍驗(yàn)證試驗(yàn)的方法參數(shù)—招募實(shí)驗(yàn)室—發(fā)送樣品及標(biāo)準(zhǔn)品等—仔細(xì)核對方法及項(xiàng)目規(guī)劃—確定返回驗(yàn)證結(jié)果的最后期限—數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)—評價(jià)方法的適用性—最后確定方法并將統(tǒng)計(jì)報(bào)告交CIPAC評價(jià)。

小范圍協(xié)同驗(yàn)證為非強(qiáng)制性要求，一般由3～4家對方法熟悉、經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)室完成。試驗(yàn)過程中需盡量遵從分析方法參數(shù)的要求，但視需要也可對方法進(jìn)行改進(jìn)，以更好的滿足大范圍協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)要求。試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)一報(bào)告給項(xiàng)目協(xié)調(diào)人，在提前扣除離群值后，計(jì)算方法的重復(fù)性和再現(xiàn)性，以對各實(shí)驗(yàn)室在大范圍協(xié)同驗(yàn)證時(shí)需要達(dá)到的平行性進(jìn)行預(yù)測。根據(jù)小范圍協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果，CIPAC或成員國CIPAC分會(huì)可決定方法是否能夠進(jìn)入到大范圍驗(yàn)證試驗(yàn)。

大范圍協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)申請需通過CIPAC秘書處在CIPAC官網(wǎng)上發(fā)布通知，全球各實(shí)驗(yàn)室自愿報(bào)名參加，如報(bào)名實(shí)驗(yàn)室較多，一般采取先來先得的原則，最后建議選擇8～15家實(shí)驗(yàn)室參加。

項(xiàng)目協(xié)調(diào)人須保證提供充足的試驗(yàn)樣品及標(biāo)樣。用于協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)的樣品最少為5個(gè)，但對于單一濃度的樣品，樣品數(shù)量可以降低到3個(gè)。因試驗(yàn)需要在不同的時(shí)間點(diǎn)重復(fù)，且在進(jìn)行正式的協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)前，實(shí)驗(yàn)室有可能需要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以熟悉試驗(yàn)方法，因此需要額外的試驗(yàn)樣品及標(biāo)樣。除樣品、標(biāo)樣和方法以外，項(xiàng)目協(xié)調(diào)人還需向參與實(shí)驗(yàn)室提供典型譜圖、安全注意事項(xiàng)、預(yù)先設(shè)計(jì)好的用于填寫結(jié)果的表格，標(biāo)樣和樣品的貯存條件等信息。

待所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)返回后，需要對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)。如果某實(shí)驗(yàn)室提供了比方法本身要求的更多的重復(fù)數(shù)據(jù)，則所有的數(shù)據(jù)結(jié)果都需要報(bào)告，并說明多余數(shù)據(jù)產(chǎn)生的原因，以決定哪些數(shù)據(jù)可以用于進(jìn)行有效的統(tǒng)計(jì)。如果某實(shí)驗(yàn)室在不同濃度的樣品分析中均出現(xiàn)了不可解釋的離群值，可以將該實(shí)驗(yàn)室整體作為離群實(shí)驗(yàn)室剔除，但被剔除實(shí)驗(yàn)室的數(shù)量不能超過參加實(shí)驗(yàn)室總量的22%。所有對驗(yàn)證方法的偏離都應(yīng)在報(bào)告中說明。數(shù)據(jù)需用Cochran最大方差和/或Grubbs檢驗(yàn)確定離群值，并分別用含有離群值或不含離群值的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)計(jì)算精密度、平均值、重復(fù)性(r)和再現(xiàn)性(R)等，將其與Horwitz計(jì)算值進(jìn)行比較，以確定方法是否可以接受。

3 相關(guān)雜質(zhì)分析方法的實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證

與有效成分和理化性質(zhì)分析方法不一樣的是，用于相關(guān)雜質(zhì)分析的CIPAC方法不需要經(jīng)過上述協(xié)同驗(yàn)證流程，僅需要進(jìn)行至少3家實(shí)驗(yàn)室間的同行驗(yàn)證。但每個(gè)實(shí)驗(yàn)室均需要對方法的特異性、線性、準(zhǔn)確度、重復(fù)性和最低定量限等方法確認(rèn)數(shù)據(jù)進(jìn)行再次確認(rèn)，且滿足CIPAC方法確認(rèn)準(zhǔn)則的相關(guān)要求。同行驗(yàn)證可以通過CIPAC或申請國家所在的CIPAC分會(huì)平臺(tái)或申請人自行組織完成。

4 CIPAC方法的劑型拓展驗(yàn)證

CIPAC方法均與產(chǎn)品劑型對應(yīng)，不同的劑型可能方法也不同，適用于同一有效成分某劑型的方法在使用到另一劑型之前，可能僅需要進(jìn)行方法的部分驗(yàn)證，而不是全流程的協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)。下圖給出了CIPAC方法劑型間拓展的流程圖，其中可接受的濃度范圍是指現(xiàn)CIPAC方法內(nèi)樣品濃度的200%至50%。

CIPAC方法是國際上農(nóng)藥質(zhì)量分析方法的權(quán)威參考資料，被世界上大多數(shù)國家的農(nóng)藥登記管理部門認(rèn)可接受。隨著新修訂《農(nóng)藥管理?xiàng)l例》的施行，為加強(qiáng)登記后農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)管，產(chǎn)品分析方法將被作為公開信息之一。為了保證其適用性和可靠性，相關(guān)管理部門可在方法公布前，借鑒CIPAC的協(xié)同驗(yàn)證模式，對方法進(jìn)行驗(yàn)證，為產(chǎn)品登記后監(jiān)管提供更加可靠的技術(shù)支持。

CIPAC方法劑型間拓展流程圖