陳辰 顧春燕 黃臻輝

摘 要 目的：考察不同廠家聚山梨酯80對(duì)維生素K1注射液質(zhì)量的影響。方法：采用氣相色譜法測(cè)定聚山梨酯80中脂肪酸的含量，并考察使用不同廠家聚山梨酯80制備的維生素K1注射液的穩(wěn)定性。結(jié)果：聚山梨酯80中油酸含量越高，其他脂肪酸含量越低表明其純度越高，質(zhì)量越好，制備的維生素K1注射液產(chǎn)品越穩(wěn)定。結(jié)論：聚山梨酯80的質(zhì)量是影響維生素K1注射液質(zhì)量的重要因素。

關(guān)鍵詞 聚山梨酯80 維生素K1注射液 氣相色譜法 脂肪酸

中圖分類號(hào)：R944.12 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2018）13-0084-03

Effect of polysorbate 80 on the quality of vitamin K1 injection

CHEN Chen*， GU Chunyan， HUANG Zhenhui**

（SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 200240， China）

ABSTRACT Objective： To evaluate the effect of polysorbate 80 on vitamin K1 injection by comparing the quality of polysorbate 80 from different manufacturers. Methods： The content of fatty acids in polysorbate 80 was determined by gas chromatography and the stability of vitamin K1 injection prepared with polysorbate 80 from different manufacturers was investigated. Results： The higher the oleic acid content in polysorbate 80， the lower the other fatty acid content， the higher is the quality of vitamin K1 injection and furthermore the prepared vitamin K1 product is more stable. Conclusion： Polysorbate 80 is an important factor affecting the quality of vitamin K1 injection.

KEY WORDS polysorbate 80； vitamin K1 injection； gas chromatography； fatty acid

藥物制劑是由活性成分和輔料組成。輔料是制劑生產(chǎn)過(guò)程中必不可少的重要組成部分，藥用輔料不但賦予藥物具體的用藥形式，而且常常影響藥物的穩(wěn)定性、藥效發(fā)揮及制劑質(zhì)量，可以說(shuō)沒(méi)有輔料就沒(méi)有制劑[1]。

聚山梨酯80（polysorbate 80）化學(xué)名聚氧乙烯20山梨醇酐單油酸酯，為淡黃色至橙黃色的黏稠液體，是由山梨醇、脂肪酸和環(huán)氧乙烷等聚合形成的高分子混合物。聚山梨酯80是一種常用的藥用輔料，可作為乳化劑、增溶劑、潤(rùn)滑劑或穩(wěn)定劑等，在注射劑中的應(yīng)用極為廣泛。近年來(lái)含聚山梨酯80的維生素K1注射劑等多有不良反應(yīng)發(fā)生，甚至出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)現(xiàn)象，越來(lái)越引起人們的重視。研究表明，聚山梨酯80是引起不良反應(yīng)的主要原因之一，其安全性越來(lái)越引起人們的關(guān)注[2-4]。

由于維生素K1水溶性很弱，穩(wěn)定性較差，故須在注射劑中添加聚山梨酯80作助溶劑[5]，且用量較大，占該制劑輔料用量的61%（w/w）。因此，維生素K1注射液的質(zhì)量（穩(wěn)定性）除了與原料本身性質(zhì)有關(guān)外，還與加入的輔料如聚山梨酯80質(zhì)量有關(guān)。目前我國(guó)提高了對(duì)聚山梨酯80的質(zhì)量要求，現(xiàn)行《中國(guó)藥典》2015版將聚山梨酯80作為藥用輔料、增溶劑和乳化劑等，較2010版藥典新增加了對(duì)脂肪酸含量的要求，并且對(duì)聚山梨酯80（供注射用）也有了明確的質(zhì)量要求，從而進(jìn)一步提高了注射劑中聚山梨酯80的質(zhì)量[6]。本研究以制劑的穩(wěn)定性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)不同來(lái)源的聚山梨酯80經(jīng)相同工藝制備的維生素K1注射液進(jìn)行考察，評(píng)價(jià)聚山梨酯80質(zhì)量對(duì)制劑穩(wěn)定性的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

聚山梨酯80（A公司，批號(hào)：20140502；B公司，批號(hào)：20141001；C公司，批號(hào)：309363C）；14%三氟化硼甲醇溶液、肉豆蔻酸甲酯、棕櫚酸甲酯、棕櫚油酸甲酯、硬脂酸甲酯、亞油酸甲酯、亞麻酸甲酯以及油酸甲酯對(duì)照品（Sigma-Aldrich公司）；正庚烷（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；維生素K1（山東廣通寶藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20140502）；維生素K1對(duì)照品（英國(guó)藥典，批號(hào)：003041）。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

7890A氣相色譜儀、石英毛細(xì)管柱（0.25 mm×100 m，以88%氰丙基聚硅氧烷為固定液）、氫火焰離子化檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）；2695高效液相色譜儀、Kromasil-C18色譜柱（4.6 mm×100 mm，3.5 mm）（美國(guó)Waters公司）。

1.3 方法

1.3.1 聚山梨酯80的檢測(cè)方法

按照《中國(guó)藥典》2015版四部中對(duì)聚山梨酯80（供注射用）項(xiàng)下進(jìn)行色譜分析[6]。

1.3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別精密移取油酸甲酯對(duì)照品（30 mg/ml）0.5，1.5，2.5，4.0，6.0，10.0 ml、亞油酸甲酯對(duì)照品（8.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml、硬脂酸甲酯對(duì)照品（10.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.5，4.0 ml、肉豆蔻酸甲酯對(duì)照品（6.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml、棕櫚油酸甲酯對(duì)照品（11.5 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml、棕櫚酸甲酯對(duì)照品（11.0 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml和亞麻酸甲酯對(duì)照品（12.0 mg/ml）0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml，置于各10 ml量瓶中，取樣進(jìn)行色譜測(cè)定。以相應(yīng)脂肪酸甲酯濃度（mg/ml）為x，峰面積為y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并以最小二乘法計(jì)算得回歸方程。

1.3.1.2 精密度試驗(yàn)

取20141001批聚山梨酯80配制供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算RSD。

1.3.1.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取20141001批聚山梨酯80，經(jīng)過(guò)甲酯化處理后進(jìn)行氣相色譜測(cè)定。分別處理6批，考察試驗(yàn)的重復(fù)性。

1.3.1.4 不同廠家聚山梨酯80的測(cè)定

分別取A公司，B公司，C公司的聚山梨酯80樣品，按照《中國(guó)藥典》2015年版四部[6]中對(duì)聚山梨酯80（供注射用）項(xiàng)下的檢測(cè)方法進(jìn)行檢查。

1.3.2 維生素K1注射液的制備方法

將處方量的無(wú)水醋酸鈉，醋酸加入適量的注射用水中，攪拌均勻，形成緩沖溶液。按順序?qū)⑻幏搅康木凵嚼骢?0，維生素K1，丙二醇于燒杯中，不斷攪拌，使其乳化后加入醋酸鈉溶液中，接著稱取處方量的焦亞硫酸鈉于上述藥液中，并用注射用水將藥液稀釋至終體積，經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾后，灌封即得維生素K1注射液。制備的維生素K1注射液，批號(hào)為150301采用A公司的聚山梨酯80，批號(hào)為150302采用B公司的聚山梨酯80，批號(hào)為150303采用C公司的聚山梨酯80。

1.3.3 維生素K1注射液有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法

維生素K1注射液有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法按照《中國(guó)藥典》2015年版二部[7]中對(duì)維生素K1注射液項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)的檢查方法。

1.3.4 高溫影響因素試驗(yàn)

將樣品按照《中國(guó)藥典》2015年版四部中原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則[6]354-356中的方法置于高溫60℃條件下進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3.5 加速和長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)

加速和長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)均按《中國(guó)藥典》2015年版操作[6]354-356。

2 結(jié)果

2.1 聚山梨酯80的檢測(cè)結(jié)果

2.1.1 各脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

以相應(yīng)脂肪酸甲酯濃度（mg/ml）為x，峰面積為y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并以最小二乘法計(jì)算得回歸方程，結(jié)果線性均良好（表1）。

2.1.2 精密度和重復(fù)性試驗(yàn)

精密度試驗(yàn)結(jié)果油酸甲酯、亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯峰面積的RSD值為1.1%，1.5%，0.8%，重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果油酸甲酯、亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯峰面積的RSD分別為0.9%，1.1%，1.3%。

2.1.3 不同廠家聚山梨酯80的檢測(cè)結(jié)果

不同廠家的聚山梨酯80中除脂肪酸外的其他項(xiàng)測(cè)定結(jié)果均無(wú)顯著性差異（表2），而脂肪酸檢測(cè)結(jié)果有顯著性差異，根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版四部[6]的要求判斷，A公司產(chǎn)品的各項(xiàng)指標(biāo)均不符合藥典要求，B公司產(chǎn)品中的油酸和亞油酸超過(guò)了藥典要求，而C公司產(chǎn)品的各項(xiàng)指標(biāo)均符合藥典要求，表明C公司的聚山梨酯80質(zhì)量最好（表3）。

2.2 聚山梨酯80對(duì)維生素K1注射液中有關(guān)物質(zhì)的影響

自制3批維生素K1注射液中有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果表明150301和150302批維生素K1注射液經(jīng)過(guò)60 ℃存放10 d后有關(guān)物質(zhì)均超過(guò)《中國(guó)藥典》2015版規(guī)定的要求，而用C公司的聚山梨酯80制備的制劑同條件下有關(guān)物質(zhì)雖略有增加，但仍符合藥典要求（表4）。

2.3 加速和長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)

加速和長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，使用A、B公司的聚山梨酯80制備的維生素K1注射液，不僅含量降解較快、單個(gè)雜質(zhì)增加比較明顯，且有關(guān)物質(zhì)含量均超過(guò)了藥典規(guī)定的要求；只有C公司制備的維生素K1注射液經(jīng)過(guò)長(zhǎng)達(dá)24個(gè)月存放后有關(guān)物質(zhì)含量均符合《中國(guó)藥典》2015版的要求（圖1）。表明使用油酸含量較高的聚山梨酯80制備的維生素K1注射液的質(zhì)量較穩(wěn)定。

3 討論

不同來(lái)源的聚山梨酯80對(duì)維生素K1注射液的質(zhì)量有著重要的影響。其原因是聚山梨酯80中的游離脂肪酸主要來(lái)自合成原料油酸，而油酸存在于植物或動(dòng)物中，不同來(lái)源油酸的純度和價(jià)格差別很大。目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的聚山梨酯80的公司較多，產(chǎn)品質(zhì)量包括外觀性狀、顏色等參差不齊，為了最大程度地攫取經(jīng)濟(jì)利潤(rùn)，部分輔料供應(yīng)商會(huì)選擇劣質(zhì)的油酸合成聚山梨酯80，使得聚山梨酯80中含有較多的脂肪酸雜質(zhì)[8-9]。因此，制備維生素K1注射液應(yīng)該選擇純度高、雜質(zhì)含量低的聚山梨酯80，以最大限度地保障聚山梨酯80產(chǎn)品的安全性，從而提高維生素K1注射液的質(zhì)量，保證注射劑的安全性。本研究主要對(duì)聚山梨酯80的組成成分進(jìn)行了分析，但其各成分與制劑的溶血和致敏等不良反應(yīng)的關(guān)系尚有待于進(jìn)一步研究闡明。

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