張繼燃 談定玉 王暉暉 凌冰玉 徐繼揚(yáng)（通訊作者）

（江蘇省蘇北人民醫(yī)院急診科 江蘇 揚(yáng)州 225001）

急性胰腺炎是急診常見疾病，其發(fā)病率高，病死率居高不下，20%～30%的患者臨床經(jīng)過(guò)兇險(xiǎn)，總體病死率為5%～10%[1]。其中，麻痹性腸梗阻、腸道屏障功能損害、腸道細(xì)菌易位，進(jìn)而引起腸源性感染，與其病情加重，發(fā)生感染性休克、多器官功能衰竭并導(dǎo)致死亡密切相關(guān)。

腸黏膜上皮細(xì)胞是腸道屏障功能組成的一部分，其增殖與凋亡保持動(dòng)態(tài)平衡在維持腸道屏障功能、保持腸黏膜上皮穩(wěn)態(tài)方面有重要作用，而急性胰腺炎時(shí)會(huì)誘導(dǎo)腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡增加，加重腸黏膜損傷。褪黑素是由松果體產(chǎn)生的一種吲哚類激素，有鎮(zhèn)靜催眠和調(diào)節(jié)睡眠覺醒周期的作用[2]。有研究顯示外源性褪黑素能夠通過(guò)抑制急性胰腺炎大鼠腸黏膜的損傷來(lái)減少腸道細(xì)菌易位，進(jìn)而減少感染，降低死亡率[3]。而關(guān)于褪黑素是否能夠抑制腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡的研究未有報(bào)道，本研究擬對(duì)著一問(wèn)題進(jìn)行初步探討，從而為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究提供一定的研究方向，同時(shí)為急性胰腺炎的治療提供新的思路。

表 淀粉酶濃度、內(nèi)毒素濃度以及細(xì)胞凋亡率各組對(duì)比

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康成年雄性SD大鼠（購(gòu)置于揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）12只，重量250～300g，隨機(jī)分為對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組和治療組（每組4只）。實(shí)驗(yàn)組及治療組大鼠制備急性胰腺炎模型[4]，對(duì)照組大鼠胰腺被膜下均勻多點(diǎn)注射生理鹽水，治療組大鼠在誘導(dǎo)急性胰腺炎之前30min通過(guò)灌胃法向大鼠胃內(nèi)侍以50mg/kg體重的褪黑素，對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組大鼠通過(guò)相同方法侍以等量的生理鹽水。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

淀粉酶檢測(cè)試劑盒（南京鷺飛生物技術(shù)有限公司）；內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒（上海樊克生物科技有限公司）；Tunel原位凋亡檢測(cè)試劑盒（南京鷺飛生物技術(shù)有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理24小時(shí)后處死，取血備測(cè)血清淀粉酶濃度、血清內(nèi)毒素濃度；分別取對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組和治療組大鼠小腸及結(jié)腸中段處腸管1cm，制備石蠟切片，通過(guò)Tunel法進(jìn)行腸黏膜細(xì)胞原位凋亡檢測(cè)。（具體實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)各試劑盒說(shuō)明書指示進(jìn)行）

2.結(jié)果

2.1 血清淀粉酶濃度

對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組及治療組分別為655.70±151.87U/L、1315.90±217.58U/L、1086.08±149.14U/L，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組以及對(duì)照組和治療組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)組和治療組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表1）。

2.2 血清內(nèi)毒素濃度

對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組及治療組分別為45.92±4.16EU/L、130.48±6.52 EU/L、86.37±7.97 EU/L，任意兩組間對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

2.3 Tunel法進(jìn)行原位凋亡檢測(cè)

DAB顯色后光鏡下觀察可見凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核為棕褐色，呈固縮狀，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組及治療組凋亡細(xì)胞數(shù)量多（圖1）。計(jì)算細(xì)胞凋亡率，小腸黏膜對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組及治療組細(xì)胞凋亡率分別為（14.05±2.13）%、（71.05±2.21）%、（32.97±3.15）%，結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡率分別為（15.73±6.58）%、（50.22±6.85）%、（42.96±7.72）%，對(duì)照組＜治療組＜實(shí)驗(yàn)組，任意兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

圖1 Tunel法原位凋亡檢測(cè)（A1-4、B1-4、C1-4分別為小腸黏膜上皮細(xì)胞對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組、治療組；D1-4、E1-4、F1-4分別為結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組、治療組）（×400倍）

3.結(jié)論

褪黑素主要是由哺乳動(dòng)物和人類的松果體產(chǎn)生的一種激素，實(shí)驗(yàn)研究表明，用褪黑素預(yù)處理可預(yù)防胰腺炎癥，減輕急性胰腺炎大鼠的胰腺組織損傷[5-6]。其對(duì)胰腺有保護(hù)性作用，能夠通過(guò)抗氧化，增強(qiáng)免疫防御，凋亡調(diào)控等作用防止胰腺炎的發(fā)生，減少胰腺損傷[7]。

細(xì)胞凋亡是基因的調(diào)控下發(fā)生的程序性死亡過(guò)程。腸黏膜上皮細(xì)胞的凋亡和增殖動(dòng)態(tài)平衡在維持腸道屏障功能方面有重要作用，相關(guān)研究證實(shí)在急性胰腺炎時(shí)會(huì)發(fā)生腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡增加，從而導(dǎo)致腸黏膜損傷、腸通透性增加，進(jìn)而引起細(xì)菌易位、腸源性感染，最終導(dǎo)致多器官功能衰竭，甚至死亡[8]。現(xiàn)有的研究未有關(guān)于褪黑素對(duì)胰腺炎腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡的影響。

在本研究中，通過(guò)建立急性胰腺炎大鼠模型，研究外源性褪黑素對(duì)急性胰腺炎大鼠腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果顯示施加外源性褪黑素的治療組與未施加褪黑素的實(shí)驗(yàn)組相比，腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡減少，且其內(nèi)毒素濃度也較實(shí)驗(yàn)組減少。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可知外源性褪黑素能夠通過(guò)減少急性胰腺炎大鼠腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡，保護(hù)腸黏膜屏障功能。