李凡玲，田虎，周明，趙艾君，王為，印愛軍，杜偉強

仙桃市第一人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，湖北 仙桃433000

鼻咽癌起源于鼻咽部表面上皮細胞，是中國南部最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率為每年20/10萬～50/10萬[1-2]。鼻咽癌的發(fā)病部位較深且早期癥狀不典型，大部分患者確診時已為晚期。盡管鼻咽癌的放療和化療已經(jīng)取得較大進展，但是由于局部復發(fā)率或遠處轉移率較高，鼻咽癌的治療效果仍不令人滿意[3]。因此，需要尋找可以判斷鼻咽癌患者預后的新的生物學標志物和新的治療靶點。FOXM1又稱為HFH-11、MPP2和Win，屬于叉頭轉錄因子超家族成員，主要表達于增殖期細胞、轉化細胞或腫瘤細胞中，在終末分化和靜止期細胞中不表達。FOXM1是調(diào)節(jié)細胞周期的重要轉錄因子，通過調(diào)節(jié)細胞周期G1～S期和G2～M期轉化相關分子的轉錄，發(fā)揮廣泛的生物學功能，包括參與細胞周期進展、細胞增殖、細胞分化、DNA損傷修復、組織穩(wěn)定、血管生成、細胞凋亡、腫瘤發(fā)生和耐藥等過程[4]。大量研究表明，F(xiàn)OXM1高表達于多種惡性腫瘤中，包括乳腺癌、結直腸癌、肺癌和胰腺癌等，與腫瘤進展快、侵襲性高、易耐藥以及預后不良有關[5-6]。體外實驗表明，抑制FOXM1可以明顯抑制腫瘤細胞增殖，促進腫瘤細胞凋亡，提高化療的敏感度[7]。然而，目前關于FOXM1在鼻咽癌中的研究較少。因此，考慮到FOXM1在惡性腫瘤中的重要作用，本研究進行了原發(fā)性鼻咽癌組織FOXM1的表達特征及其與鼻咽癌患者臨床特征之間關系的研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月至2016年1月仙桃市第一人民醫(yī)院收治的經(jīng)病理學檢查確診的鼻咽癌患者112例，選取同期于仙桃市第一人民醫(yī)院接受治療的經(jīng)病理學檢查確診的慢性鼻咽炎患者41例。所有患者均能獲取完整的病歷資料和病理活檢組織標本；所有鼻咽癌患者均接受含或不含化療的標準全量放療，腫瘤活檢標本均于治療前獲取。鼻咽癌患者中，男76例，女36例；平均年齡（45.1±11.1）歲。慢性鼻咽炎患者中，男27例，女14例；平均年齡（44.2±12.3）歲。兩組患者的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 資料收集

收集鼻咽癌患者的性別、年齡、病理類型、美國癌癥聯(lián)合委員會（American Joint Committee on Cancer，AJCC）分期、T分期、N分期、淋巴結轉移情況等資料。分析比較鼻咽癌組織與慢性鼻咽炎組織中FOXM1的表達情況，并對FOXM1表達與鼻咽癌患者的臨床特征及預后的關系進行分析。通過門診定期隨訪、電話等方法對所有鼻咽癌患者進行7～65個月的隨訪，隨訪日期截至2016年7月1日?？偵嫫冢╫verall survival，OS）為從放療開始至患者死亡或末次隨訪的時間。

1.3 免疫組織化學染色

采用福爾馬林固定，石蠟包埋的活檢組織進行FOXM1抗體免疫組織化學染色。石蠟切片厚度為4 μm，切片常規(guī)用二甲苯脫蠟至水，再用梯度濃度酒精水化，采用0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖液（pH=6.0）進行抗原修復，為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在3%的雙氧水里室溫孵育30 min。滴加5%牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）封閉液，室溫封閉30 min甩去多余液體，滴加兔抗人FOXM1多克隆抗體（1∶200）至組織標本上，37℃孵育1 h；滴加生物素化山羊抗兔二抗，在37℃下孵育20 min。然后行二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）室溫顯色，鏡下控制反應時間。顯微鏡下觀察組織染色變化，評估陽性程度。評估標準參照參考文獻[8]。每張切片隨機選取5個高倍鏡視野進行結果判定，按染色強度評分：0分，未著色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，棕褐色。按陽性細胞比例評分：陰性為0分，陽性細胞數(shù)≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。根據(jù)兩項積分之和判定結果，＞3分為高表達，≤3分為低表達。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中FOXM 1表達情況的比較

鼻咽癌組織中FOXM1的高表達率為66.1%（74/112），明顯高于慢性鼻咽炎組織的34.1%（14/41），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=12.52，P＜0.01）。

2.2 FOXM 1表達情況與鼻咽癌患者臨床特征的關系

FOXM1高表達與鼻咽癌患者的AJCC分期、T分期、N分期和遠處轉移有關（P＜0.05）；FOXM1高表達與鼻咽癌患者的年齡、性別、病理類型無關（P＞0.05）。（表1）

表1 FOXM 1表達情況與鼻咽癌患者臨床特征的關系

2.3 預后情況的比較

生存分析結果顯示：FOXM1低表達鼻咽癌患者的中位生存時間未達到，F(xiàn)OXM1高表達鼻咽癌患者的中位生存時間為43.89個月（95%CI：38.45～49.33）；FOXM1低表達鼻咽癌患者的總生存率高于FOXM1高表達的患者，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=5.09，P=0.02）。（圖1）

圖1 FOXM 1高表達與低表達鼻咽癌患者的總生存曲線

3 討論

鼻咽癌與頭頸部鱗狀細胞癌在許多方面均有區(qū)別，包括與EB病毒感染有關，對放療和化療敏感等[9-10]。近期研究表明，一些自然酚類化合物可以通過磷脂酰肌醇-3-激酶/絲蘇氨酸蛋白激酶信號通路抑制EB病毒感染腫瘤細胞的進展[11]。盡管新的放化療聯(lián)合治療方案提高了鼻咽癌患者的長期生存率，但是由于高復發(fā)率和高遠處轉移率，鼻咽癌患者的病死率仍較高。有相同臨床分期的鼻咽癌患者接受相似治療方案后預后仍差異較大，因此，尋找新的預后標志物和治療靶點對鼻咽癌患者的治療和預后具有重要意義。

本研究發(fā)現(xiàn)，鼻咽癌組織中FOXM1的高表達率明顯高于慢性鼻咽炎組織（P＜0.01）。越來越多的證據(jù)表明，F(xiàn)OXM1過表達與乳腺癌、結直腸癌、肺癌、胰腺癌和白血病等多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。在實體瘤中，腫瘤基因組基因表達譜分析已經(jīng)一致地將FOXM1基因鑒定為最常上調(diào)的基因[12]。以上研究均表明，F(xiàn)OXM1在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。此外，許多臨床研究也證實，高表達FOXM1的腫瘤細胞比低表達FOXM1的腫瘤細胞更容易發(fā)生耐藥，抑制FOXM1表達可以提高腫瘤對化療藥物的敏感度，進一步證明了FOXM1在腫瘤細胞生存、進展及耐藥中的作用[7]。

本研究結果顯示，F(xiàn)OXM1高表達與鼻咽癌患者的AJCC分期、T分期、N分期和遠處轉移有關（P＜0.05），F(xiàn)OXM1高表達鼻咽癌患者的總生存率低于FOXM1低表達的患者（P＜0.05）。Jiang等[13]研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXM1在鼻咽癌組織和C666-1細胞中過表達，且FOXM1過表達與鼻咽癌患者的淋巴結轉移和腫瘤分期有關，該研究結果與本研究結果一致。FOXM1抑制劑——硫鏈絲菌素可以通過下調(diào)MMP-2、MMP-9、FSCN1、PXN 基因表達來抑制C666-1細胞的增殖和遷移。Huang等[14]通過免疫組織化學染色研究發(fā)現(xiàn)Aurora-B和FOXM1對于接受化療的鼻咽癌患者是不良預后的標志。Hou等[15]通過篩選紫杉醇抵抗鼻咽癌細胞的ABC轉運體基因和FOX分子基因表達發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXM1和ABCC5在紫杉醇抵抗鼻咽癌細胞和鼻咽癌患者腫瘤組織中均過表達。且FOXM1通過結合ABCC5基因啟動子FHK共同序列調(diào)節(jié)ABCC5基因表達。抑制FOXM1或ABCC5可以抑制紫杉醇藥物的排出，增加細胞內(nèi)藥物濃度，從而促進紫杉醇誘導的細胞凋亡。

綜上所述，過表達FOXM1與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展有關，F(xiàn)OXM1高表達與鼻咽癌患者的淋巴結轉移、臨床分期和不良預后有關。FOXM1可以作為鼻咽癌的預后分子和潛在治療靶點，為鼻咽癌患者的預后評估及臨床靶向治療提供重要參考價值。但本研究樣本量有限，故應進一步加大樣本量并深入研究闡明FOXM1在鼻咽癌患者中的作用機制，為鼻咽癌的發(fā)病機制研究及臨床治療提供重要依據(jù)。